西瓜花叶病毒抗血清制备及其应用

 西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus, WMV)是危害葫芦科作物的重要病毒。制备特异性强、效价高的抗血清对快速准确检测和鉴定WMV具有重要意义。本研究将WMV外壳蛋白(Coat protein,CP)基因克隆到原核表达载体pEHISTEV获得pEHISTEV-WMV-CP。将pEHISTEV-WMV-CP转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导,成功表达出分子量约为36 kDa的蛋白,与预期WMV CP大小一致。切胶回收WMV CP,与等体积弗氏不完全佐剂充分乳化后免疫健康新西兰大白兔。Western blotting结果表明,制备的抗血清与WMV CP有反应,与同属的番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)、小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus, ZYMV)和烟草花叶病毒属的黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)均无反应。酶联免疫吸附测定(PTA-ELISA)结果表明,本研究制备的WMV抗血清效价为1∶8 192,并且能够检测稀释512倍的病毒汁液。利用该抗血清对田间采集的10个RT-PCR检测为阳性的样品进行检测,全部呈现阳性。本研究利用大肠杆菌表达的CP制备的WMV抗血清具有较高的特异性和灵敏度。研究结果为WMV的快速检测和鉴定奠定了基础。     

适用于西瓜砧木育苗的菌糠基质筛选

以4 种菌糠为复合育苗基质对西瓜砧木进行育苗试验,考察各菌糠品种应用于西瓜砧木育苗的适用性,筛选出适用西瓜砧木育苗的菌糠品种。试验选取海鲜菇、杏鲍菇、金针菇以及茶树菇菌糠分别与蛭石混合配制成复合育苗基质,测定各基质的理化性状并进行西瓜砧木育苗试验。结果表明：杏鲍菇和金针菇菌糠容重相对较小,总孔隙度相对较少;海鲜菇、茶树菇菌糠育苗效果优于杏鲍菇和金针菇处理;海鲜菇菌糠:蛭石=4:1、茶树菇菌糠:蛭石=1:1 基质处理西瓜砧木壮苗指数达0.36、0.37,显著高于对照的草炭:蛭石=2:1处理。建议选择海鲜菇、茶树菇菌糠进行西瓜砧木育苗复合基质的进一步研发。     

西瓜ClPDF2.1蛋白的原核表达及其对香蕉枯萎病菌的抑制活性测定

尖孢镰刀菌古巴专化型侵染香蕉引起的香蕉枯萎病严重危害中国香蕉产业。植物防卫素是一类小的富含半胱氨酸的抗真菌蛋白。本研究旨在了解西瓜（Citrullus lanatus）防卫素蛋白ClPDF2.1对香蕉枯萎病菌的抑制活性。提取西瓜RNA后反转录为cDNA,以西瓜cDNA为模板,克隆ClPDF2.1基因,将测序正确的ClPDF2.1连接到载体pGEX-6P-1,随后转化Trans BL21(DE3)pLysS,IPTG 诱导GST-ClPDF2.1融合蛋白表达16 h后,经SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定GST-ClPDF2.1融合蛋白的表达,进行GST-ClPDF2.1融合蛋白体外抑制香蕉枯萎病菌生长的功能初探。本研究为进一步培育转基因香蕉抗病品种奠定基础。     

无籽西瓜组培脱毒与离体嫁接技术研究

利用无籽西瓜种胚进行组培脱毒与西葫芦离体嫁接研究。结果表明:不同消毒剂对种胚萌发有一定影响,其中消毒剂二氧化氯250 mg/L处理有利于种胚萌芽,萌发率达86.7%。6-BA对茎尖分化有促进作用,浓度0.2 mg/L对芽分化有显著作用;不同激素浓度对芽丛增殖和单芽生根也有一定影响,其中MS+6-BA 0.5 mg/L+IAA 1 mg/L继代培养增殖率最高;MS+NAA 0.2 mg/L生根率最高(83.9%)。采用无菌嫁接成活率(77.5%)高于开放式嫁接成活率(37.5%);经ELISA检测,对WMV-2(西瓜花叶病毒2号)、ZYMV(小西葫芦黄化花叶病毒)的脱毒率分别为75%和80%。     

早熟西瓜新品种花都的选育

花都为早熟西瓜品种,母本XH-15是从俄罗斯引进的一代杂种中分离出的自交系,父本BM-16是早熟抗裂西瓜品系104和京欣1号杂交分离选育出的高代自交系。花都生长势强健,易坐果。果实圆形,果皮绿色覆墨绿色条带,瓤红色,酥脆爽口,汁多味甜,中心可溶性固形物含量11%左右。单果质量5~7kg,每667m2产量4000kg左右。对枯萎病和炭疽病的抗性强于对照京欣1号,适于早春栽培。     

小果型西瓜离体诱导四倍体的初步研究

[目的]为小果型西瓜三倍体的育种奠定基础。[方法]以二倍体小果型西瓜优良自交系MH-39-1的子叶为外植体进行离体诱导四倍体的研究。[结果]100 mg/L秋水仙素处理子叶的不定芽分化率达66.7%,平均分化不定芽6.7个。400 mg/L秋水仙素处理的四倍体诱导率为20.0%。秋水仙素处理12 h的不定芽分化率为83.3%,处理48 h的不定芽分化率为16.7%。秋水仙素处理24~36 h的四倍体诱导率为16.7%。4.0 mg/L 6-BA处理的不定芽分化率为83.3%,1.0 mg/L 6-BA处理的不定芽分化率为58.3%。再生芽在4种生根培养基上的生根率均在90%以上,在不添加植物生长调节剂的培养基上再生苗的平均生根数仅为6.5条,添加NAA的培养基上再生苗的平均生根数在10条以上,但根短而粗。[结论]初步确定秋水仙素离体诱导小果型西瓜四倍体的适宜浓度和处理时间为400mg/L和24 h。     

西瓜砧木体内汁液对枯萎病菌的影响

为了解西瓜砧木的抗病机理,提取4种砧木日本南瓜(RBNG)、黑籽南瓜(HZNG)、野生西瓜(YSXG)和瓢葫芦(PHL),以及西瓜品种为超甜花龙(CTHL)的芽期和苗期的体内汁液,测定其对西瓜枯萎病菌孢子萌发、菌丝生长的影响。结果表明,4种砧木芽期体内汁液都有较好的抑菌作用,且都高于超甜花龙;4种砧木苗期体内汁液的抑菌作用与超甜花龙之间的差异均不明显;4种砧木的抑菌作用之间均无显著差异。     

西瓜枯萎病菌毒素培养滤液对西瓜幼苗可溶性蛋白含量的影响

以不同抗性西瓜苗品种为材料,研究了西瓜苗期感染枯萎病菌(Fusarium oxysporumf.sp.niveum)病原菌毒素粗提液处理后在生长的不同时期、不同生长部位植株体内可溶性蛋白含量的变化情况,并分析了这些变化与植物抗病性的相互关系。结果表明,经毒素粗提液处理后,与对照相比,不同部位间可溶性蛋白含量存在明显差异。但是从总体上看,叶部可溶性蛋白含量最高、茎部次之、根部最低;一般情况下,在同一部位抗病品种的可溶性蛋白含量大于感病品种。     

西瓜炭疽病苗期不同抗性鉴定方法的研究

以不同抗性西瓜品种为材料,进行西瓜炭疽病苗期不同抗性鉴定方法的研究。结果表明：适宜的西瓜炭疽病苗期人工鉴定接种孢子液浓度为1×106个/mL;适宜的接种炭疽病苗龄为二片真叶期;调查和鉴定幼苗抗病性的最适时期为接种后的7-10d。     

基质中有机肥含量对西瓜幼苗生长发育的影响

以草炭、蛭石、珍珠岩一般配方为对照,在基质中添加不同比例有机肥研究其对西瓜育苗的影响。结果表明：15％～20％有机肥处理的西瓜幼苗生长质量较好,壮苗指数及根系活力也较高。