生防菌株SW11在番茄植株上的定殖能力及其对番茄灰霉病的防控效果

通过抗生素抗性标记法结合室内拮抗和小区防效试验,研究生防菌株SW11在番茄植株及其根围土壤中的定殖能力,及其对番茄灰霉病的防控效果.结果显示菌株SW11在番茄根、茎、叶和根围土壤中均能够较长时间定殖寄生,施药后5d在番茄植株内定殖量达到最高值,在根围土壤和植株表面则呈先多后少、逐渐下降的动态变化趋势,施药30 d后,菌株SW11抗Rif标记菌株在根面的存在量为1.31×104 cfu/g,根围土壤中为4.88×102 cfu/g,叶面为1.84×102 cfu/g,茎外为0.87×102 cfu/g,根、茎和叶内为20～65 cfu/g.当菌液浓度为1.57×108 cfu/mL时,施药7d后对番茄灰霉病的预防效果可达88.15％,治疗效果可达70.50％.研究结果证明生防菌株SW11可以成为番茄植株微生态环境中的有益微生物之一,能够有效控制番茄灰霉病的发生和为害,为其开发应用和番茄灰霉病的生物防治提供了理论依据和有效途径.     

苦马豆素抗牛病毒性腹泻病毒的研究

【目的】疯草是中国西部影响草地生态和畜牧业健康发展的毒草之一。主要有豆科棘豆属和黄芪属有毒植物等,在冬季牧草严重缺乏的时节,牛羊等牲畜被迫采食后可引起中毒和生产性能下降,甚至死亡,每年给我国草地生态和畜牧业造成的直接经济损失达几十亿元,是危害最严重的毒草。目前,我国西部天然草地动物因疯草中毒死亡所造成的经济损失仍持续剧增。苦马豆素被认为是引起动物疯草中毒的主要毒性成分。由于疯草分布广泛,资源丰富,如何改善草地生态,合理开发利用疯草成为研究的课题和方向。近几十年来, 随着对疯草研究的深入和扩展,人们发现苦马豆素不仅具有良好的抗肿瘤效果,还可作为免疫调节剂、抗HIV及扩散抑制剂、抗病毒和细胞保护剂等药物使用。目前,国内在对苦马豆素抗肿瘤、调节机体免疫方面研究较热,但是,对苦马豆素在抗病毒活性、作用机理方面的研究尚无相关报道。为了探讨茎直黄芪中生物碱苦马豆素（swainsonine,SW）抗牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus,BVDV）的作用机制,明确其体外抗病毒作用效果,为抗BVDV的药物筛选提供参考依据。【方法】利用细胞培养技术,采用CPE观察法和MTT比色法相结合的方法测定不同浓度SW对牛肾原代细胞(madin-darby bovine kidney cells,MDBK)的毒性作用,确定药物的安全浓度和TD50,并分别采用先加药后感染病毒、先感染病毒后加药、药毒作用2 h后加入、感染病毒同时给药后再加药四种作用方式,检测不同浓度SW对BVDV入侵的阻断作用、复制的抑制作用、直接杀伤作用和综合作用,并计算不同作用方式下的治疗指数。【结果】结果显示：SW浓度小于0.256 μg•mL-1范围内对MBDK细胞无毒性作用,在大于0.512 μg•mL-1浓度下MBDK细胞表现出一定程度的病变,TD50为2.512 μg•mL-1,按Reed-Muench 氏法计算BVDV TCID50为10-4.7/0.1mL;在体外随苦马豆素质量浓度的增加,其抗BVDV作用具有很好的量效关系,且与作用方式有关,比较四种作用方式下的治疗指数1.05、2.47、2.08和3.21,说明SW对BVDV的综合作用（65.29%,P＜0.01）和复制（65.05%,P＜0.01）的抑制作用较好,亦有一定的直接杀伤作用,但对其入侵的阻断作用不佳。【结论】SW在体外有良好抗BVDV活性作用,并推测苦马豆素（SW）抗病毒的主要效应可能是SW能进入细胞内抑制BVDV的复制增殖以及直接灭活游离BVDV而发挥作用。     

60Coγ辐照柱花草M1代表型及分子水平诱变效果分析

采用不同剂量60 Coγ射线辐照处理(0,325,487,974Gy)热研13号柱花草(Stylosanthes guianensis SW.‘Reyan No.13’)种子,统计M1代植株的发芽率、株高、叶片长度和茎粗,进行SRAP分子标记分析,以期明确柱花草M1代表型与分子水平的诱变效果。结果表明:辐射处理的各项生物性状指标均低于对照,随着辐照剂量的增加,柱花草生长所受抑制作用也增强,974Gy处理下除叶长外其他生长指标均最低,显著低于另2个处理和对照(P<0.05);经SRAP分析显示,24对SRAP引物组合中共筛选出8对多态性好、条带清晰的引物组合,8对引物组合共扩增出88个条带,其中多态性条带57条,多态性比率达64.77%。柱花草的各辐照处理均与对照存在不同程度的多态性差异,相异系数随着辐照剂量的增加而增大。325Gy,487Gy和974Gy处理的相异系数分别为22.0%,38.1%和41.5%;这些材料间的遗传相似系数(GS)变化范围为0.585～0.780,平均GS为0.678。974Gy处理与对照的遗传相似系数为0.585,说明974Gy处理与对照的遗传距离较远,变异程度最大,而487Gy处理次之,325Gy处理最小。通过UPGMA分子系统聚类法,可把4个辐照梯度处理分为2大类群:对照、325Gy和487Gy处理聚在第Ⅰ大类中,而974Gy处理单独聚为第Ⅱ大类。SRAP分析结果与生物性状指标结果呈现一定程度的一致性,说明SRAP分析可以准确检测柱花草辐照材料的变异。     

基于熵值法的高速公路施工过程对水土流失的影响评价

[目的]研究高速公路施工过程对沿线山体植被、水土保持方面的影响,为路段后期水土保持工作采取最优的防护措施提供参考依据。[方法]基于高速公路施工期水土流失影响因素的分析基础,建立多层次、多指标的高速公路施工期水土流失评价体系。通过现场工程参数分析,将水土流失影响指数(SWⅡ)引入同一高速公路不同路段水土流失影响的评价中。选用基于客观赋权法的熵值法确定评价体系中各评价指标对水土流失的影响程度。依托在建梁平至忠县高速公路项目,针对初步选定的9段路段进行施工期水土流失评价。[结果]确定研究区水土流失情况严重的4段重点路域,并将其划定为水土流失重点防护区域。[结论]验证了多层次、多指标的高速公路施工期水土流失影响评价体系的合理性,排除了人为因素的干扰,可以更加客观、科学地确定高速公路施工期水土流失重点路域。     

底墒和施肥对旱地冬小麦主要特性的影响

采用裂区试验设计,以人工创造的播前不同底墒为主处理,不同施肥量为副处理,研究了陇东旱塬地区底墒和施肥对旱地冬小麦产量、水分利用效率、主要农艺性状和关键生育期光合作用的影响.结果表明,随着播前底墒的增加,旱地冬小麦的产量、水分利用效率显著增加,主要农艺性状和光合作用同步增进,其中产量、WUE、千粒重、容重在中等施肥量时达到最大值,高施肥量时有所下降,但仍高于不施肥处理.     

Inhibitory effect of NF-κB decoy ODN on expressions of TLR4 and IL-8 in LPS- induced intestinal epithelial cells

AIM: To study the effect of NF-κB decoy oligodeoxynucleotides(ODNs) on TLR4 and IL-8 expression in LPS-induced SW480 cells. METHODS: SW480 cells were cultured in vitro and stimulated for 3 h with LPS (10 μg/L). NF-κB decoy oligodeoxynucleotides mediated by lipofectin 2000 were added into the cell culture for 6 h. The supernatants were collected and messured for IL-8 by ELISA. TLR4 mRNA and IL-8 mRNA were examined by RT-PCR, respectively. The results were compared with control group, Scrambled ODNs group and lipofectin 2000 group. RESULTS: After SW480 cells were stimulated by LPS, TLR4 mRNA, IL-8 mRNA and IL-8 expressions were significantly increased, and the difference compared with control group was obvious. After treated with NF-κB decoy oligodeoxynucleotides, TLR4 mRNA, IL-8 mRNA and IL-8 expressions were significantly inhibited. The Scrambled ODNs group and lipofectin 2000 group had no effect on them. CONCLUSION: NF-κB decoy ODNs will become a new gene drug for treating inflammatory bowel disease(IBD).     

石斛的氨基酸组成及分析

利用全自动氨基酸分析仪测定22种主要石斛栽培品种的氨基酸组成和含量,并应用多元统计分析方法对其品质进行分析。结果表明,石斛中以天冬氨酸、谷氨酸、亮氨酸、精氨酸4种氨基酸含量最丰富;蛋氨酸和胱氨酸分别为石斛的第1和第2限制性氨基酸。不同品种石斛的氨基酸含量和组成比例存在一定差异,其中,10种石斛含有17种氨基酸和7种必需氨基酸,11种石斛未检出蛋氨酸或胱氨酸。参照FAO/WHO推荐标准,氨基酸营养价值较高的是线叶石斛、紫瓣石斛、杓唇石斛、玫瑰石斛、紫菀石斛和叠鞘石斛6个品种;采用主成分分析方法和聚类分析,可将22种石斛氨基酸分为4类品质,以石斛氨基酸指标聚类可将22种石斛聚为3类。     

Expression of miRNA-198 and miRNA-296-5P in PB3A-treated colon cancer cell line and its function prediction

AIM:To explore the effect of pinobanksin-3-acetate (PB3A) on microRNA (miRNA) expression profile of human colon cancer cells for providing new methods of treatment of colon cancer and development of targeted drug.METHODS:The method of miRNA expression profiling was used to observe the miRNA differential expression in human colon cancer SW480 cells after treated with PB3A.The expression of miRNA-198 and miRNA-296-5p in the SW480 cells was detected by RT-qPCR.The network databases of miRWalk,MicroT,miRanda and so on were used to predict the target genes regulated by these miRNAs,and pathway significant enrichment analysis was performed.RESULTS:miRNA microarray analysis showed that after treated with propolis flavonoid PB3A for 24 h,267 miRNAs with differential expression twice or more in the SW480 cells were observed.Among them,there were 30 miRNAs with 10-fold or more differential expression,in which 28 were up-regulated and 2 were down-regulated.The results of RT-qPCR showed that the expression levels of miRNA-198 and miRNA-296-5p were consistent with the results of miRNA microarray analysis,and the difference was statistically significant (P<0.05).Bioinformatic analysis revealed that miRNA-198 has 859 target genes,and miRNA-296-5p has 906 target genes.The target genes of miRNA-198 were clustered in pathways in cancer,axon guidance,Wnt signaling pathway,regulation of actin cytoskeleton,insulin signaling pathway and MAPK signaling pathway,while the target genes of miRNA-296-5p were clustered in axon guidance,Wnt signaling pathway,MAPK signaling pathway,endocytosis,melanogenesis,insulin signaling pathway and calcium signaling pathway.CONCLUSION:Propolis flavonoid PB3A affects the expression of miRNA in colon cancer SW480 cells.The abnormal expression of miRNA-198 and miRNA-296-5p may be involved in the inhibitory effect of PB3A on colon cancer.     

牛蒡苷与人血清白蛋白的相互作用

运用荧光光谱法和紫外吸收光谱法研究了牛蒡苷与人血清白蛋白(HSA)的相互作用。结果显示,随着牛蒡苷浓度的增大,HSA的荧光强度明显增强并且发生蓝移;逐渐增大的各向异性值表明,牛蒡苷能够嵌插到HSA的疏水空腔中;求得25,32,39℃时牛蒡苷与HSA反应的结合常数分别为1.04×105,9.78×104和9.58×104L/mol;热力学参数(ΔH=-4.63kJ/mol,ΔS=80.48J/mol·K),表明维持药物与蛋白质的相互作用力主要是静电作用力。     

产苦马豆素疯草内生真菌Alternaria Section Undifilum oxytropis的诱变筛选

【背景】疯草是黄芪属和棘豆属有毒植物的统称,疯草内生真菌Alternaria Section Undifilum oxytropis是从疯草中分离获得的一种具有产生苦马豆素（swainsonine,SW）能力的真菌。因其产物SW一方面体现出良好的抑制肿瘤细胞生长、浸润和转移作用及潜在的抗艾滋病病毒等多种药用活性,另一方面牛羊因大量误食疯草能导致中毒,对草原畜牧业健康发展造成了严重的危害,受到研究人员的广泛关注。但由于疯草内生真菌Alternaria Section Undifilum oxytropis产苦马豆素生物合成机制尚不清楚,严重制约了后续通过生物发酵大量获得SW用以抗肿瘤机制研究与临床应用,以及通过基因工程手段对疯草进行脱毒育种,使疯草成为牛羊可食用、无毒的天然牧草。【目的】利用有效的研究手段,阐明Alternaria Section Undifilum oxytropis产苦马豆素生物合成机制。【方法】以Alternaria Section Undifilum oxytropis为出发菌株,分别采用紫外辐照诱变、亚硝基胍化学诱变、紫外辐照与亚硝基胍复合诱变的3种诱变方式,在不同诱变时间、诱变剂量等条件下对其进行了诱变筛选研究。通过测定不同诱变方式和作用条件下对菌株的致死率,经发酵培养、连续5代传代培养、并采用α-甘露糖苷酶活性分析法检测诱变菌株产苦马豆素含量变化,优化确定了不同诱变方式下最佳诱变条件,并将优势突变菌株接种马铃薯葡萄糖琼脂培养基（potato dextrose agar,PDA）和改良察式液体培养基,连续培养32 d,测定并绘制了突变菌株D4和UD1的生长周期曲线。【结果】经上述3种诱变方式处理后,分别获得1株产苦马豆素含量变化较大、能稳定连续传代培养的突变菌株U4、D4、UD1。其优化的诱变条件,紫外辐照为辐照处理160 s,亚硝基胍化学诱变为亚硝基胍诱变剂量6 μL、诱变处理时间5 min,紫外辐照与亚硝基胍复合诱变为紫外辐照20 s,亚硝基胍诱变剂量2 μL,诱变处理时间5 min。突变菌株U4、D4、UD1较原始菌株,菌落形态偏小、中间凸起,菌落颜色呈微粉色或白色,且其产苦马豆素含量均有显著变化,其中U4突变菌株产苦马豆素量平均增加16.02%（P<0.01）、D4 突变菌株产苦马豆素量平均降低23.58% （P<0.01）,UD1 突变菌株SW产量平均增加21.87%（P<0.01）,但D4、UD1突变菌株生长周期与出发菌株一致,均为24 d。【结论】通过紫外辐照诱变、亚硝基胍化学诱变、紫外辐照与亚硝基胍复合诱变方法,成功筛选出产苦马豆素含量变化较原始菌株差异较大的3株突变菌株U4、D4、UD1,这为后续利用高通量测序等分子生物学手段,在分子水平上阐释疯草内生真菌Alternaria Section Undifilum oxytropis关键基因、关键酶在其生物合成苦马豆素机制关系方面奠定研究基础。