鸽源冠状病毒PSH株纤突蛋白基因的遗传变异分析

对鸽源冠状病毒PSH株纤突蛋白基因进行了RT—PCR扩增、克隆和测序。结果表明，PSH株S基因由3504个核苷酸组成，编码1条由1167个氨基酸残基组成的多肽。S基因编码产物裂解后形成的S1和S2亚单位分别由541和626个氨基酸残基组成。PSH株S蛋白切割识别位点为精氨酸-精氨酸-苯丙氨酸-精氨酸-精氨酸（RRFRR），与多数鸡传染性支气管炎病毒（IBV）切割识别位点相似（RRF／SRR）。与GenBank中其他冠状病毒毒株S基因的推导氨基酸序列相比较，PSH株与IBV参考毒株的同源性为79．3％～99．6％，而与其他冠状病毒包括火鸡蓝冠病病毒和SARS病毒的同源性均小于37．8％。表明，鸽源冠状病毒PSH株属于第3抗原群冠状病毒，且与IBV亲缘关系较近。     

鸡病毒性关节炎病毒C-98分离株S1基因的克隆与序列分析

提取鸡病毒性关节炎病毒（AVAV）内蒙古分离株（C-98株）总RNA，参考GenBank中禽呼肠孤病毒（ARV）S1133株S1基因序列设计了2对引物，应用RT—PCR技术扩增了病毒S1基因，将S1基因cDNA克隆到pGEM—T Easy载体后测序。将测定序列拼接后与参考毒株ARV-176、ARV-138、ARV-S1133、MDRV—YJL的S1基因序列进行了比较。结果显示，AVAV C-98分离株的S1基因与强毒株ARV-176株的同源性最高，达99．9％；与MDRV—YJL的同源性为99．3％，与弱毒疫苗株ARV—S1133的同源性也达97．9％；与ARV-138株的同源性最低，为81．2％。表明，AVAVC-98株与参考毒株的差异较小，与疫苗株ARV-S1133有很高的同源性。     

牛分支杆菌MPT83基因的表达及重组蛋白的纯化

从牛分支杆菌培养物中抽提总DNA，扩增了MPT83基因，并克隆入pMD-18-T Simple Vector，将测序正确的目的基因插入表达载体pET-32a（＋）中，转化BL21（DE3）宿主菌，IPTG诱导表达，用亲和层析方法对表达蛋白进行了纯化。经测序，构建的克隆质粒pMD-MPT83与Gen-Bank中的序列一致；构建的表达质粒pET-MPT83经PCR和BamHI＋HindⅢ双酶切鉴定构建正确；经SDS-PAGE分析，在约42ku处出现新的蛋白条带，4h后表达量即达到高峰；Westernblotting分析表明，融合蛋白能够被牛分支杆菌阳性血清所识别；纯化的表达蛋白经SDS-PAGE电泳，出现清晰的单一条带。表明MPT83基因原核表达载体构建成功。     

猪IL-18基因的原核表达及重组蛋白的纯化

以pcDNA3．1-pIL-18为模板，采用PCR技术扩增到了猪白细胞介素18（IL-18）的成熟蛋白基因，通过KpnⅠ＋SacⅠ双酶切及连接反应，构建了pET32c—pIL—18原核表达质粒。经过限制性内切酶分析、PCR鉴定及DNA序列测定证实，重组质粒中的基因片段连接正确。之后，重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），于37℃、1．0mmol／L IPTG条件下诱导表达。菌体裂解产物经SDS—PAGE分析，在分子质量约为33ku处出现了预期的目的蛋白。用8mol／L脲对表达产物变性，经Ni^2＋NTA柱纯化，透析复性，得到了纯化的IL-18蛋白。Western—blot分析证实，纯化的重组IL-18蛋白具有反应活性。上述研究结果为重组IL-18的应用奠定了基础。     

赤羽病病毒核衣壳蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

以纯化的重组赤羽病病毒核衣壳蛋白作为诊断抗原，建立了检测牛血清特异性核衣壳蛋白抗体的间接ELISA方法，初步组装成便于现地使用的试剂盒。经对试验条件进行优化，确定最佳抗原包被量为每孔1μg（100μL），样品稀释度为1：100，兔抗牛IgG辣根过氧化物酶标记抗体稀释度为1：8000。经特异性试验和重复性试验证明该方法特异性高、重复性好。应用初步研制的间接ELISA试剂盒和微量中和试验法分别对云南省的89份、内蒙古的100份牛血清样本进行了检测，以中和试验为参照，经统计学处理，得出检测临界值分别为0．411和0．303，2种方法的符合率分别为72．7％（56／77）和91．4％（85／93）。试剂盒在37℃保存3d，对敏感性无明显影响。     

亚洲璃眼蜱唾液腺-新基因（GP29）的原核表达及产物鉴定

将吸血诱导的亚洲璃眼蜱唾液腺差异表达基因GP29的开放性阅读框插入pGEX-4T-1，转化BL21，表达出一相对质量为53ku的蛋白，其大小与预计结果一致。蛋白质的肽质量图谱和“1381．7511”肽段序列两方面的结果证明，SDS-PAGE胶板上相对质量为53ku的蛋白就是由目的基因表达的GST融合蛋白。该蛋白与Swiss PROT库中的任何蛋白均有较大差别，可能是一个新功能分子。     

猪冬痢的防治

每年冬季，猪很容易发生流行性腹泻和传染性胃肠炎，俗称“冬痢”。该病可在成年母猪和公猪、育肥猪、仔猪中暴发，临床上以呕吐、腹泻、少食或不食、脱水和酸碱平衡失调，特别是10日龄内仔猪死亡率较高为特征，该病传染迅速，尤其在猪只较为密集的养猪场，常会在数日内波及全群。     

鹧鸪坏死性肠炎的诊断

坏死性肠炎又称肠毒血症,是由魏氏梭菌引起的一种急性传染性肠道疾病。2006年3月,我县某鹧鸪养殖场饲养的鹧鸪3000只,10日龄时开始发病,至40日龄时来我处就诊。据该养殖户叙述,该群鹧鸪在7日龄时用Ⅳ系 H120、25日龄时用Ⅳ苗各两倍量饮水免疫,发病时有少数表现为呼吸道症状,拉黄绿色粪便,发病率达50%,日死亡数十只,曾用过多种抗菌素及抗病毒药,但均无明显的效果,至40日龄时已死亡近1000只,死亡率达到33%,特来我处就诊。     

饲喂方式对蛋鸡啄羽行为的影响

欧盟法律即将禁止用常规笼养设备养鸡，同时西欧某些国家的法律规定也将禁止断喙。禁止笼养和断喙将加剧蛋鸡的啄癖行为。影响啄癖的因素很多，营养对啄癖有促进和减弱双向效应。禽类日粮矿物元素、蛋白质和氨基酸（蛋氨酸和精氨酸）水平过低会导致严重的啄羽行为。日粮缺乏动物性蛋白有时也会引起一定程度的啄癖。限饲、饲喂颗粒饲料均导致啄羽率升高。高纤维素、低能量日粮和粗饲料能降低啄羽率。青年期垫料中额外添加谷物或秸秆能降低成年期啄羽率。啄羽率的降低可能与采食时间的延长有关。     

禽用基因疫苗的研究进展

基因疫苗(genetic vaccine)又称核酸疫苗(nucleicacid vaccine)、DNA疫苗(D NA vaccine),是将带有目的编码蛋白抗原基因的真核重组表达载体直接注射到动物机体中,使外源基因在活体细胞内表达,诱导机体产生抗体并引起特异性的免疫应答,达到顶防和治疗传染病的目的。它包括D NA疫