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541.
ZHAO Meng-meng FENG Song-lin WANG Wen-jia XING Xing FENG Jia-ping ZHANG Gui-hong 《中国畜牧兽医》2016,43(12):3114-3120
In order to evaluate whether Nsp9 could enhance the replication of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), pIRES2-EGFP-Nsp9 plasmid containing whole Nsp9 genome were transfected into Marc-145 cells,Real-time PCR and Western blotting were used to evaluate the expression of N protein after PRRSV was inoculated. The results showed that the level of N protein in the Nsp9 transfected cells was significantly higher than control group (P<0.05),which was 1.5 times higher. Meanwhile,the expression at protein level had the same trend as the mRNA level. When the dose of plasmid was increasing,the expression of N protein both at the mRNA and protein levels were increased. In conclusion,Nsp9 gene could enhance the replication of PRRSV in Marc-145 cells. 相似文献
542.
利用反转录PCR (RT-PCR)技术扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5基因部分片段,并克隆到pGEM-T Easy载体上,得到重组质粒作为荧光定量PCR检测的标准模板,以10倍梯度稀释模板,进行SYBR GreenⅠ荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立PRRSV的荧光定量PCR检测方法。该方法检测灵敏度可达10拷贝/μL,与猪圆环病毒、猪乙型脑炎病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒、猪流感病毒和猪细小病毒不发生交叉反应,具有良好的特异性和重复性;对16份临床疑似病料进行了检测,发现15份均为荧光定量PCR阳性,而常规RT-PCR只能检测出12份阳性。结果表明,建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于临床PRRSV感染的早期诊断以及分子流行病学调查。 相似文献
543.
544.
板蓝根、黄芪等中药活性提取物对猪繁殖与呼吸综合征病毒体外作用的研究 总被引:8,自引:0,他引:8
本试验利用Marc-145细胞体外培养系统,通过观察细胞病变效应(CPE)来评价板蓝根、黄芪等中药活性提取物成分体外抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)对细胞的感染作用,并通过改变加药方式(先加药物后接种病毒、先接种病毒后加药物、病毒和药物感作后同时加入),初步探讨中药活性提取物的抗病毒机制。结果表明。在安全浓度范围内,板蓝根水提物体外对PRRSV具有显著的直接杀灭作用;连翘、黄芪水提物和黄芪多糖体外对PRRSV均具有明显的阻断和抑制作用,为筛选抗PRRSV中药制剂提供了理论依据。 相似文献
545.
江西PRRS流行毒株ORF7基因遗传变异分析 总被引:1,自引:0,他引:1
江西某4个猪场发生以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道症状等为特征的传染病,怀疑为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染所致.本研究对送检病料进行RT-PCR检测为阳性后,克隆出PRRSV ORF7基因,序列分析表明4个序列之间同源性是98.7%~100%,同源性很高;与美洲型蓝耳病标准毒株VR-2332的同源性为93.3%~94.6%,与疫苗株MLV的序列同源性在93.3%~94.6%;而与欧洲株LV的同源性只有58.1%~58.6%.结果表明这4个毒株与VR-2332和MLV株亲缘关系比较密切,属于美洲型毒株. 相似文献
546.
PRRSV抗体竞争ELISA检测方法的建立与标准化研究 总被引:5,自引:1,他引:5
以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)基因的原核表达产物重组N蛋白为包被抗原,利用兔抗重组N蛋白血清和PRRS猪血清竞争该抗原,建立间接竞争ELISA方法检测PRRS抗体。经研究确定重组N蛋白的包被浓度为0·3μg/mL,检测血清不用稀释,兔抗重组N蛋白血清的工作浓度为1∶3000,酶标抗体的工作浓度为1∶10000,包被液为0·05mol/L、pH9·6的碳酸盐缓冲液。该方法特异性强,稳定性和重复性好,整个检测过程可在3h内完成。以IDEXX试剂盒的检测结果为参照标准,该方法的敏感性为79·76%,特异性为90·9%,符合率为83·59%。将该方法按试剂盒要求标准化,4℃放置5个月,检测效果不变。 相似文献
547.
548.
549.
550.
利用RT-PCR分段扩增的方法,扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中山分离株(ZS-GD株)、珠海分离株(ZH-GD株)覆盖全长基因组的10个片段,分别克隆入pMD18-T载体进行序列测定,获得了PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株基因组全长15320 bp的核苷酸序列。利用生物信息学软件对PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株全基因组序列进行了遗传进化分析,结果显示PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株与美洲型参考株的核苷酸序列相似性分别为88.1%~97.8%和88.4%~98.0%;与欧洲型参考株(Lelystad)的核苷酸序列相似性分别为60.6%和60.4%,且在2株毒的Nsp2蛋白上有30个aa的缺失,表明PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株均为美洲型分离株的缺失变异株。 相似文献