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541.
In order to evaluate whether Nsp9 could enhance the replication of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), pIRES2-EGFP-Nsp9 plasmid containing whole Nsp9 genome were transfected into Marc-145 cells,Real-time PCR and Western blotting were used to evaluate the expression of N protein after PRRSV was inoculated. The results showed that the level of N protein in the Nsp9 transfected cells was significantly higher than control group (P<0.05),which was 1.5 times higher. Meanwhile,the expression at protein level had the same trend as the mRNA level. When the dose of plasmid was increasing,the expression of N protein both at the mRNA and protein levels were increased. In conclusion,Nsp9 gene could enhance the replication of PRRSV in Marc-145 cells.  相似文献   
542.
利用反转录PCR (RT-PCR)技术扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5基因部分片段,并克隆到pGEM-T Easy载体上,得到重组质粒作为荧光定量PCR检测的标准模板,以10倍梯度稀释模板,进行SYBR GreenⅠ荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立PRRSV的荧光定量PCR检测方法。该方法检测灵敏度可达10拷贝/μL,与猪圆环病毒、猪乙型脑炎病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒、猪流感病毒和猪细小病毒不发生交叉反应,具有良好的特异性和重复性;对16份临床疑似病料进行了检测,发现15份均为荧光定量PCR阳性,而常规RT-PCR只能检测出12份阳性。结果表明,建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于临床PRRSV感染的早期诊断以及分子流行病学调查。  相似文献   
543.
本试验建立了一种三联PCR方法,可以同时检测猪伪狂犬病、蓝耳病和猪圆环病毒2型感染。利用该方法对来自26个发病猪场的30个病料进行了检测,检测结果再与单联PCR方法检测结果对比,得出两者平均符合率为93%。表明该方法是一种高度敏感、特异性强的检测方法,可以运用于临床诊断。  相似文献   
544.
本试验利用Marc-145细胞体外培养系统,通过观察细胞病变效应(CPE)来评价板蓝根、黄芪等中药活性提取物成分体外抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)对细胞的感染作用,并通过改变加药方式(先加药物后接种病毒、先接种病毒后加药物、病毒和药物感作后同时加入),初步探讨中药活性提取物的抗病毒机制。结果表明。在安全浓度范围内,板蓝根水提物体外对PRRSV具有显著的直接杀灭作用;连翘、黄芪水提物和黄芪多糖体外对PRRSV均具有明显的阻断和抑制作用,为筛选抗PRRSV中药制剂提供了理论依据。  相似文献   
545.
江西PRRS流行毒株ORF7基因遗传变异分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
江西某4个猪场发生以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道症状等为特征的传染病,怀疑为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染所致.本研究对送检病料进行RT-PCR检测为阳性后,克隆出PRRSV ORF7基因,序列分析表明4个序列之间同源性是98.7%~100%,同源性很高;与美洲型蓝耳病标准毒株VR-2332的同源性为93.3%~94.6%,与疫苗株MLV的序列同源性在93.3%~94.6%;而与欧洲株LV的同源性只有58.1%~58.6%.结果表明这4个毒株与VR-2332和MLV株亲缘关系比较密切,属于美洲型毒株.  相似文献   
546.
PRRSV抗体竞争ELISA检测方法的建立与标准化研究   总被引:5,自引:1,他引:5  
以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)基因的原核表达产物重组N蛋白为包被抗原,利用兔抗重组N蛋白血清和PRRS猪血清竞争该抗原,建立间接竞争ELISA方法检测PRRS抗体。经研究确定重组N蛋白的包被浓度为0·3μg/mL,检测血清不用稀释,兔抗重组N蛋白血清的工作浓度为1∶3000,酶标抗体的工作浓度为1∶10000,包被液为0·05mol/L、pH9·6的碳酸盐缓冲液。该方法特异性强,稳定性和重复性好,整个检测过程可在3h内完成。以IDEXX试剂盒的检测结果为参照标准,该方法的敏感性为79·76%,特异性为90·9%,符合率为83·59%。将该方法按试剂盒要求标准化,4℃放置5个月,检测效果不变。  相似文献   
547.
对猪繁殖与呼吸综合征病毒持续感染与保护性免疫应答机制目前尚未完全阐明,有报道认为病毒中和抗体对抗感染不起保护性作用,甚至起负作用。近年来的研究结果表明,中和抗体在保护性免疫中起重要作用。文章针对猪繁殖与呼吸综合征病毒持续感染与清除,病毒抗原表位与中和抗体的产生机制,病毒感染动物免疫应答反应模型,病毒中和抗体在保护性免疫中的作用等内容做一综述。  相似文献   
548.
猪链球菌2型仔猪感染动物模型的建立及免疫保护试验   总被引:1,自引:3,他引:1  
采用猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)弱毒与猪链球菌2型协同感染仔猪的方式,建立动物感染模型,结果协同感染组试验仔猪均死亡,PRRS弱毒、猪链球菌攻毒组及空白对照组仔猪均存活.结果表明,PRRS弱毒可增强猪链球菌2型对猪的易感性.将建立的动物感染模型用于猪链球菌灭活苗(马链球菌兽疫亚种 猪链球菌2型)的效力检验,结果灭活苗可以保护PRRSV与链球菌的协同感染.  相似文献   
549.
猪繁殖与呼吸综合征免疫学研究进展   总被引:9,自引:0,他引:9  
猪繁殖与呼吸综合征病毒是能够引起母猪繁殖障碍和新生仔猪呼吸症状的严重危害养猪业的一种重要病原。其特异的免疫学特征给疫苗的设计与研制带来一定的困难。近年来,对其免疫学研究取得了重要的进展,特别是在病原的基本免疫学特征、体液免疫与细胞免疫特征、免疫抑制与免疫调节等方面做了深入研究与分析。同时,也对参与该病免疫应答的细胞及细胞因子和所引起的免疫病理学方面做了详细的研究。这些都为猪繁殖与呼吸综合征疫苗的研究提供了新的思路和方法。  相似文献   
550.
利用RT-PCR分段扩增的方法,扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中山分离株(ZS-GD株)、珠海分离株(ZH-GD株)覆盖全长基因组的10个片段,分别克隆入pMD18-T载体进行序列测定,获得了PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株基因组全长15320 bp的核苷酸序列。利用生物信息学软件对PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株全基因组序列进行了遗传进化分析,结果显示PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株与美洲型参考株的核苷酸序列相似性分别为88.1%~97.8%和88.4%~98.0%;与欧洲型参考株(Lelystad)的核苷酸序列相似性分别为60.6%和60.4%,且在2株毒的Nsp2蛋白上有30个aa的缺失,表明PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株均为美洲型分离株的缺失变异株。  相似文献   
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