诺卡氏菌mce1A基因的克隆及重组表达

诺卡氏菌(Nocardia seriolae)是近年来海淡水养殖鱼类频发慢性传染病的病原菌。该研究通过引物扩增得到全长1 254 bp、编码417个氨基酸的诺卡氏菌毒力因子mce1A基因的全序列。该基因编码蛋白质的分子量约为43.98 k D,理论等电点5.14,含有161个疏水性氨基酸,疏水性平均值为0.044,为疏水性蛋白,具有α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲3种结构。经预测,Mce1A有MCE、DUF3407区域、OM_asym_Mla D、Mtu_fam_mce、Mla D 5个结构域,彼此交叠,含有公共区域。根据Mce1A氨基酸构建的系统进化树可以发现诺卡氏菌和新星诺卡氏菌的亲缘关系最近。构建p ET32a-mce1A重组质粒并转化至大肠埃希菌BL21中,得到的重组蛋白的相对分子量约63 k D。温度、IPTG浓度对重组蛋白表达量没有影响。该研究为进一步研究Mce1A的致病机制奠定了基础。     

鰤诺卡氏菌灭活疫苗对大口黑鲈非特异性免疫指标的影响

本研究采用福尔马林灭活的鰤鱼诺卡氏菌全细胞灭活疫苗作为免疫原,通过腹腔注射免疫健康大口黑鲈(Micropterus salmoides),分别于免疫后的第1、7、14、21、28和35天采集血液样品,对其外周血液的血细胞数量、吞噬细胞的吞噬活性、溶菌酶活力、酸性磷酸酶活力以及超氧化物歧化酶活力等非特异性指标进行测定。结果表明：免疫组血细胞数量显著增加,红细胞和白细胞数量均于第7天达峰值,分别为(4.49±0.23)x10⁶个/ mm³和3.88±0.24)x10³个/ mm³；免疫组吞噬指数和吞噬百分比均在第7天达到最高值,分别为2.65和29.85％。血清中溶菌酶活力和酸性磷酸酶活力均于免疫后第7 天达到峰值, 极显著高于对照组(P<0.01),而超氧化物歧化酶活力于免疫后第14天达到峰值, 极显著高于对照组(P<0.01)。攻毒感染试验表明受免鲈鱼的相对免疫保护率为61.54％。由此可见,鰤鱼诺卡氏菌灭活疫苗能够显著诱导大口黑鲈发生非特异性免疫应答反应,提高其免疫因子的活性,从而增强鱼体的免疫保护力。