猪肠球菌溶血素cylA基因原核表达载体的构建

以猪致病性粪肠球菌染色体DNA为模板,PCR扩增溶血素cylA基因,相应酶切后,克隆到原核表达载体pET32a中,构建pET32a-cylA重组质粒,并将pET32a-cylA质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)。经HindⅢ、XhoI双酶切及测序鉴定,并与已发表的肠球菌溶血素cylA基因序列比较,同源性达99.8%。表明成功构建猪肠球菌溶血素cylA基因的重组表达质粒,为制备单抗、开发疫苗及其致病机制研究奠定了基础。     

迟缓爱德华氏菌的溶血特性

分析了不同来源的２８株Ｅｔ的溶血特性。分别以平板法（ＰｌａｔｅＡｓｓａｙ,ＰＡ）、接触法（ＣｏｎｔａｃｔＨｅｍｏｌｙｓｉｓ,ＣＨ）及上清法（ＳｕｐｅｒｎａｔａｎｔＡｓａｙ,ＳＡ）检测Ｅｔ的溶血性,阳性率依次为７５％、７５％、５７１４％。ＰＡ和ＣＨ的符合率为１００％。凡ＳＡ检测为阳性的,ＰＡ、ＣＨ检测皆为阳性。培养基中加入螯合剂ＥＤＤＡ造成环境缺铁,结果,约３２１４％Ｅｔ的胞外溶血素显著增加。经胰酶、热处理后,ＡＴＣＣ１５９４７株溶血活性丧失,提示Ｅｔ溶血素是一种不耐热蛋白样物质。