广西巴马小型猪MyoD1基因克隆及其真核表达载体的构建

本研究旨在对广西巴马小型猪成肌细胞决定基因1(myoblast-determining 1,MyoD1)进行克隆分析,并构建MyoD1基因真核表达载体pEGFP-N1-MyoD1,为进一步研究该基因在广西巴马小型猪骨骼肌发育中的调控作用奠定基础。以广西巴马小型猪的肝脏组织为材料,应用RT-PCR技术克隆得到广西巴马小型猪MyoD1基因编码序列,对其核苷酸序列和蛋白质序列进行生物信息学分析,并构建该基因的真核表达载体,经过PCR和双酶切验证,通过脂质体转染,将重组质粒转染C2C12细胞,在细胞水平验证了该载体的正确性。结果显示,广西巴马小型猪MyoD1基因编码区序列长960 bp,编码319个氨基酸,核苷酸序列与猪、牛、水牛、绵羊、马、人、小家鼠、褐家鼠、家犬的同源性依次为99.7%、92.8%、92.9%、92.6%、91.5%、82.9%、82.9%、82.0%和90.9%;系统进化树分析表明,广西巴马小型猪MyoD1基因在不同物种及进化过程中具有高度保守性;蛋白质结构分析表明,MyoD1蛋白为膜外蛋白,在第4-116位氨基酸处存在1个MyoD家族标志性的MyoD结构域,对广西巴马小型猪、猪和人的MyoD1蛋白高级结构比较发现其具有极高的相似性。本研究构建的广西巴马小型猪MyoD1基因表达载体pEGFP-N1-MyoD1,转染C2C12细胞后产生绿色荧光信号,表明MyoD1基因在C2C12细胞中成功表达。     

高、低营养水平饲粮对妊娠环江香猪繁殖性能、体成分和血浆生化参数的影响

本试验旨在研究高、低营养水平饲粮对妊娠母猪繁殖性能和体成分的影响,并探讨其生化机制。选用首次妊娠的环江香猪48头,根据体重随机分为2组,每组8个重复(栏),每重复3头。配种后分别饲喂NRC饲粮[消化能(DE)为14.73 MJ/kg,粗蛋白质(CP)含量为13.11%]和地方猪饲粮(DE为12.24 M J/kg,CP含量为9.77%)。分别于配种后45、75和110 d称取母猪体重,每栏选取1头母猪,前腔静脉采血用于生化参数分析,放血处死后解剖,记录胎猪头数,称取胎猪个体重,并测定母体成分。结果表明:与地方猪饲粮组相比,NRC饲粮组母猪的繁殖性能和体成分指标差异均不显著(P0.05),妊娠45和75 d时血浆谷丙转氨酶以及妊娠75 d时谷草转氨酶活性均显著降低(P0.05),妊娠45 d时低密度脂蛋白-胆固醇浓度,妊娠75 d时碱性磷酸酶活性、高密度脂蛋白-胆固醇和总胆固醇浓度以及整个妊娠期甘油三酯浓度均显著升高(P0.05);在不同妊娠期,2种饲粮对各测定指标的影响有一定差异。由此可见,2种饲粮对环江香猪的繁殖性能和体成分均无显著影响;NRC饲粮在一定程度上改善了机体代谢,促进了生长发育,但同时增加了脂肪沉积。     

巴马火麻的药用保健饮食及旅游开发研究

指出了巴马火麻作为"长寿之乡"巴马的重要饮食组成部分,是巴马人长寿的原因之一;然而巴马火麻产品的开发和火麻特色菜肴的推广进程缓慢。具体阐述了火麻的药用价值、保健饮食,以及在旅游开发的现状,并提出了相应的对策。     

热应激对巴马香猪免疫和生化指标的影响

为了探讨热应激诱发动物免疫损伤的可能机理,本研究观测了热应激对巴马香猪行为、基线免疫和血液生化指标的影响。对巴马香猪的行为观察发现热应激使其饮欲增强、活动量增大和打斗增多。结果表明:热应激使巴马香猪红、白细胞数量显著升高(P<0.05);嗜中性粒细胞百分率下降,嗜酸性和嗜碱性粒百分率上升;单核细胞百分率升高(P<0.05);热应激对巴马香猪血浆超氧化物歧化酶(SOD)、总胆固醇(TC)和白蛋白(ALB)的影响不大。血尿素氮(BUN)呈下降趋势,但差异不显著;肌酸激酶(CK)升高(P<0.05);乳酸脱氢酶(LDH)含量下降。葡萄糖(GLU)则在早期低于对照组,而后期高于对照组(P<0.05),说明热应激引起巴马香猪代谢和内分泌紊乱。     

广西巴马小型猪ApoE基因真核表达载体的构建及鉴定

【目的】构建广西巴马小型猪载脂蛋白E基因（ApoE）真核表达载体,为生产转ApoE基因的广西巴马小型猪奠定基础。【方法】采用RT-PCR从广西巴马小型猪肝组织中扩增出ApoE基因编码序列,将该基因连接至pEGFP-C1载体上,利用双酶切和测序对重组质粒pEGFP-C1-ApoE进行鉴定,并将重组质粒pEGFP-C1-ApoE转染PK15细胞。【结果】广西巴马小型猪ApoE基因编码区序列长954bp,编码317个氨基酸,与GenBank已公布的猪ApoE基因cDNA序列（NM_214308）对应区段同源性为100%。构建的重组质粒pEGFP-C1-ApoE转染PK15细胞48h后,在荧光显微镜下转染细胞发出荧光,细胞形态清晰,可见细胞核。【结论】广西巴马小型猪ApoE基因能与pEGFP-C1载体重组构建pEGFP-C1-ApoE真核表达载体,有效表达出ApoE蛋白。     

巴马小型猪糖尿病前期血脂和血液流变学变化分析

为研究巴马小型猪糖尿病前期对血脂和血液流变学的影响,对正常巴马小型猪和糖尿病前期小型猪的血脂和血流变学指标进行了检测,并进行糖耐量实验。结果表明,血脂四项检测中血总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇糖尿病前期组均高于正常对照组（P<0.05）。血液流变学指标检测中活化部分凝血酶原时间出现延长（P<0.05）。其他检测指标无明显差异。实验显示,巴马小型猪糖尿病前期已出现血脂紊乱和部分血流变学指标的改变。因此糖尿病前期患者在控制血糖的同时,应控制血脂,降低血黏度,以预防或减少糖尿病的发生。     

精氨酸对妊娠环江香猪胎儿生长发育的影响

 【目的】研究精氨酸对妊娠环江香猪胎儿生长发育的影响。【方法】试验选取体重35—40 kg的环江后备母猪10头,单栏饲养,每栏1头。配种15 d后,随机分为2组,每组5头。试验组在基础日粮中添加0.83%L-精氨酸,对照组添加1.71%L-丙氨酸(等氮对照)。配种第45天,称取母猪体重,颈动脉放血处死母猪,收集血液,肝素抗凝,离心分离血浆;解剖母猪,记录胎儿数量、重量和存活率,采集羊水、尿囊液和胎盘,-20℃保存,用于实验室分析。【结果】结果表明,精氨酸组与丙氨酸组相比,胎儿平均个体重和黄体数分别提高14.4%(P＜0.05)和6.0%(P＞0.05),胎盘粗脂肪含量降低14.7%(P＜0.05),羊水和尿囊液中精氨酸的浓度分别提高65.0%和79.1%(P＜0.05),尿囊液中赖氨酸浓度降低28.3%(P＜0.05);血浆和尿囊液中NO的含量分别提高22.9%和66.3%(P＜0.05),胎盘中总NO合酶、诱导型NO合酶和结构型NO合酶的活性分别提高75.5%、61.7%和84.5%(P＜0.05)。【结论】提示精氨酸通过促进胎盘一氧化氮的生成促进妊娠母猪早期胎儿的生长发育。     

广西巴马小型猪体细胞核移植体系的建立

通过建立广西巴马小型猪体细胞核移植培养体系,为后续转基因克隆猪生产及其相关研究提供最佳条件.试验探讨了盲吸法对猪卵母细胞的去核效率;利用分离到的广西巴马小型猪附睾成纤维细胞作供体构建重构胚胎,探讨6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)和细胞松弛素B(CB)对其后续胚胎发育的影响;利用分离到的广西巴马小型猪腹部成纤维作供体,探讨其对核移植胚胎的发育效率.结果表明:猪卵母细胞盲吸法去核的效率为73.75％;广西巴马小型猪附睾成纤维细胞作供体构建重构胚胎,6-DMAP和CB对其后续胚胎发育没有显著差异(分裂率和囊胚率分别为:89.89％and 6.74％vs.82.95％and 5.68％,P＞0.05);腹部成纤维细胞作供体,重构胚胎的融合率、分裂率和囊胚率分别为55.40％、67.53％和6.49％.采用盲吸法可以对体外成熟猪卵母细胞成功去核,广西巴马小型猪腹部成纤维细胞和附睾成纤维细胞均可作供体成功构建体细胞核移植胚胎,并可以发育到囊胚.     

主动免疫猪活化素重组融合蛋白疫苗对巴马小型猪生长性能的影响研究

以含有巴马小型猪活化素成熟肽基因的重组质粒pRSETA—ACTA和pRSETA—ACTB的重组融合蛋白疫苗,对60日龄的巴马小型猪进行免疫,以探讨活化素免疫调控动物生长性能的作用机理。结果表明：主动免疫重组融合蛋白疫苗ACTA对巴马小型猪的日增重无显著影响（P〉0．05）;而主动免疫重组融合蛋白疫苗ACTB后1～28d、29～56d、1～56d,试验组日增重比对照组分别提高了5．3％（P〉0．05）、17．4％（P〈0．05）和14．2％（P〈0．05）。ELISA检测结果发现,试验猪主动免疫ACTA或ACTB重组融合蛋白疫苗后均能显著产生抗活化素抗体（P〈0．05）;主动免疫ACTB重组融合蛋白疫苗极显著地提高了血清中卵泡抑制素（FS）的浓度（P〈0．01）。可见,该研究制备的ACTB重组融合蛋白疫苗可有效促进巴马小型生长猪的生长、提高血清中FS的浓度。     

广西巴马小型猪卵泡抑素的克隆及原核表达

从广西大学巴马小型猪卵巢中提取总RNA，并以其为模板，应用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR），在合成的特异性引物引导下，扩增获得广西巴马小型猪卵泡抑素（follistatin）cDNA的全序列，长度为1035 bp。将PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行序列测定及分析，结果表明：广西巴马小型猪卵泡抑素cDNA序列与GenBank中已报道的家猪卵泡抑素同源性高达99.4%。同时，将目的基因插入到原核表达载体pET 32a+多克隆位点中，构建了follistatin的原核表达载体，并转化于大肠杆菌BL21。转化菌经异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导，变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质免疫印迹（Western blotting）分析，结果表明：试验已成功表达了follistatin的融合蛋白(约58.4 ku)。