中国对虾ATG5基因的克隆及其在pH、碳酸盐碱度胁迫下的表达分析

采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得中国对虾(Fenneropenaeus chinensis) ATG5基因cDNA全长,命名为FcATG5。利用实时荧光定量技术分析了FcATG5的组织表达及其在pH和碳酸盐碱度胁迫下的表达特征,并利用RNAi技术验证其功能。基因分析显示,FcATG5 cDNA全长为2225 bp,开放阅读框为810 bp,编码269个氨基酸,预测其编码的蛋白质分子量为31.103 kDa,理论等电点为5.59,为疏水性蛋白,包含1个APG5自噬相关蛋白结构域,无跨膜结构,不包含信号肽。同源性和系统进化分析显示,FcATG5具有高度保守性,与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)同源性最高(98.14%)。组织表达分析显示,FcATG5在中国对虾各组织中均有表达,肌肉中表达量最高(P<0.05),血淋巴细胞中最低(P<0.05)。pH胁迫后48 h,FcATG5在鳃中的表达量最低,为对照组的1.68倍;胁迫后96 h最高,为对照组的2.67倍。碳酸盐碱度胁迫后12 h,FcATG5在鳃中表达量最高,为对照组的2.77倍;胁迫后96 h最低,为对照组的1.30倍。干扰实验结果显示,pH和碳酸盐碱度胁迫下,沉默FcATG5基因会使中国对虾死亡率显著增高(P<0.05),表明该基因的表达量越高,越有利于中国对虾存活。实时定量结果表明,FcATG5在pH、碳酸盐胁迫下的表达量均显著升高(P<0.05),推测自噬可能参与中国对虾应对非生物胁迫的调控。本研究结果对水生动物特别是甲壳动物中细胞自噬研究具有重要的借鉴意义,有助于推进中国对虾盐碱水养殖的研究进程。     

盐度、pH值和碱度对凡纳滨对虾受精卵孵化率的影响

以进口凡纳滨对虾所产的受精卵为材料,在相同孵化水温(29.5℃)、不同盐度(20、25、30、35、40)、不同pH值(7.0、7.5、8.0、8.5、9.0)及不同碱度(2.23 mmol/L、2.79 mmol/L、3.35 mmol/L、3.90mmol/L、4.46 mmol/L)条件下,进行凡纳滨对虾受精卵的孵化试验。试验结果表明:凡纳滨对虾受精率的孵化率与盐度呈密切相关,以海水盐度为30的孵化效果最佳,平均孵化率达到87.7%,盐度低至20或高至40时均不能孵化出无节幼体;凡纳滨对虾受精卵的孵化效果与海水的pH值密切相关,微碱性的海水有利于受精卵的正常发育,孵化率表现较佳,其中以海水pH值8.0的孵化效果最佳,受精卵的平均孵化率为85.85%,海水pH值过低或过高都不利于胚胎的发育,受精卵的孵化率都有不同程度的下降;受精卵的孵化效果与海水碱度的变化没有显著的相关性,在2.23～4.46 mmol/L的碱度范围内,受精卵的平均孵化率介于85.35%到85.95%之间,各碱度梯度组之间的孵化率无显著差异。     

长期高碱胁迫下凡纳滨对虾基因表达差异研究

凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)具有较强的环境适应能力,对盐碱水环境有一定的耐受性,但在高pH、高碱环境下的存活率不稳定。为探究凡纳滨对虾对长期高碱胁迫的响应机制,本研究以低碱对照组(LSW：碳酸盐碱度为3 mmol/L,盐度为6,pH为8.1)和高碱胁迫组(AW：碳酸盐碱度为10 mmol/L,盐度为6,pH为8.8)养殖42 d的凡纳滨对虾肠道和鳃组织作为实验材料,通过Illumina平台进行转录组测序,对测序数据进行拼接、注释,进而筛选、分析高碱胁迫下的差异表达基因及调控通路并进行定量PCR验证。结果显示,2个组织共同差异表达基因有243个,其中,98个表达上调,145个表达下调。肠道中差异表达基因主要集中在糖代谢、碳水化合物消化吸收、胆汁分泌、ABC跨膜转运、紧密连接以及免疫调节等途径。鳃中差异表达基因主要集中在谷胱甘肽代谢、碳酸氢盐转运、精氨酸合成、糖代谢以及离子转运等相关途径。进一步筛选获得10个最显著的差异表达基因,经qRT-PCR验证发现,凡纳滨对虾鳃中碳酸酐酶(CA1、CA10)、蜕皮激素诱导蛋白(Eip74EF)、β-半乳糖基转移酶(UGT8)基因在高碱胁迫下均表达下调,而Na+/K+-ATPase-α (NKA-α)、Na+/K+ transporting ATPase interacting (NKAIN)、氨转运蛋白(Rhbg)、苹果酸脱氢酶(MDH)等基因表达上调,与转录组表达趋势一致,推测其可能参与了对虾高碱胁迫下的应激响应。凡纳滨对虾表现出较强的高碱适应性,可能是通过下调鳃中CA的表达,补偿体内碱中毒,上调Rh氨转运蛋白防止氨在体内积累,上调NKA相关基因维持体内渗透平衡;但蜕皮激素诱导蛋白(Eip74EF)显著下调,推测其蜕皮功能受到影响。本研究为深入探讨凡纳滨对虾在长期高碱胁迫条件下的生理响应机制提供了基础数据。     

碱度对异育银鲫血红蛋白和肌肉蛋白含量的影响

以血红蛋白含量和肌肉蛋白含量为指标,以碱度为1.47 mmol/L的曝气自来水作为对照,研究了碱度为4、7、10、15和20 mmol/L的几种水环境对异育银鲫健康养殖的适宜性.结果表明:4 mmol/L的水环境碱度能提高异育银鲫血红蛋白含量,但差异不显著(JP＞0.05),7 mmol/L的水环境碱度对血红蛋白含量也无显著影响(P＞0.05),10、15和20 mmol/L的水环境碱度能显著降低异育银鲫血红蛋白含量(P＜0.05);4、7和10 mmol/L的水环境碱度对异育银鲫肌肉蛋白含量均无显著影响(P＞0.05),15和20 mmol/L的水环境碱度则会使异育银鲫肌肉蛋白含量显著下降(P＜0.05).这说明,4 mmol/L左右的水环境碱度适宜异育银鲫的健康养殖,而7 mmol/L以上的水环境碱度不利于异育银鲫的健康养殖.     

拖拉机发动机冷却液中储备碱度检测方法研究及应用

为解决在没有专用设备情况下对发动机冷却液中储备碱度的实时检测,利用现有技术条件,采用创新检测方法,测定发动机冷却液的储备碱度。试验表明,检测结果与仪器测定结果误差小,可采用价值高,且方法简单快捷,安全可靠,易操作,可满足日常生产检测的需要,具有可推广的实用价值。     

miR-192在尼罗罗非鱼应答碱度胁迫中的表达及靶基因

采用实时荧光定量、生物信息学、双荧光素酶报告和体内miRNA抑制的方法,探究miR-192在尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）应答碳酸盐碱度胁迫中的作用。结果如下：（1）实时荧光定量PCR实验表明,在急性碱度胁迫（6 g/L NaHCO₃）尼罗罗非鱼6 h后,鳃组织中miR-192的表达显著下调,溶质转运蛋白基因（solute carriers16A7,SLC16A7）表达显著上调（P<0.05）;（2）借助生物信息分析预测到SLC16A7可能是miR-192的靶基因;（3）利用双荧光素酶报告实验发现miR-192会与SLC16A7的3''UTR结合;（4）体内对miR-192抑制后,SLC16A7的表达显著上调（P<0.05）。证实了miR-192参与了尼罗罗非鱼应答碱度胁迫中的调控过程,SLC16A7是miR-192的直接靶基因,为探明miRNAs调控尼罗罗非鱼应答碱度胁迫的分子机制提供了一定的依据。     

2012-2014年赛众牌土壤调理剂在小麦上的田间肥效试验总结

本报告总结了2012-2014两年间在陕西省合阳县小麦上通过多重复小区试验,试验赛众牌土壤调理剂对土壤理化性状、增产等方面的贡献,检验该产品是否在改良碱化土壤上值得推广。经试验前检验,试验田块的碱化度和pH等数据均较高,到达土壤碱化指标。两年试验结果表明:赛众牌土壤调理剂在改良碱化土壤方面具有良好效果,且对小麦增产,农民增收,降低种植成本都有较好作用。因此,在盐碱地的改良上值得推广。     

水温对池塘养虾的影响及调节方法

<正>在生产实践中,对水环境各种指标(如:溶解氧、氨氮、亚硝酸盐、p H、总碱度等)的收集和掌控,是现代科学养殖中必不可少的手段,但是,往往忽视了或者轻视了温度指标的监测,特别是温度的波动对养殖动物的影响。1水温对虾的作用与影响1.1水温与虾体温的关系在虾及鱼类的生存条件中,水温占有重要的位置。     

畜禽养殖废水沼液生物脱氮的影响因素分析

文章结合经验,以模拟畜禽废水厌氧消化液为处理对象,在25℃、30℃条件下,对金霉素和碱度对硝化过程的影响进行了阐述与研究。