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睾丸酮丛毛单胞菌活化因子基因的质粒载体构建及表达 总被引:4,自引:0,他引:4
提取睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni)的基因组DNA,利用PCR扩增activator基因,将扩增产物克隆到pKtac1(含强启动子tac)中,构建重组质粒pKtac1-act1和 pKtac1-act2。经酶切分析和测序,鉴定出正确的重组质粒pKtac1-act1和 pKtac1-act2。将重组质粒转化入大肠杆菌(Escherichia coli)HB101中,用酶联免疫分析方法测定细菌总蛋白质中的activator表达量;将pAX1(含3α-HSD/CR基因)分别和重组质粒(pKtac1-act1和pKtac1-act2)一起转化入E. coli HB101中,测定细菌总蛋白质中的3α-HSD/CR和activator的表达量。结果表明:重组质粒能明显提高activator的表达;pAX1与重组质粒共转化的蛋白质粗提物中,activator和3α-HSD/CR的表达量都显著提高。 相似文献
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鲢的性分化及性转技术的初步研究 总被引:2,自引:0,他引:2
将繁殖季节顺产出的鲢卵从未受精卵开始到出膜后45d的鱼苗进行连续切片,观察其性分化。经观察,鲢苗出膜后24d在腹腔上皮的下方清晰可见性腺原基。出膜后34d则已明显性分化,雄性生殖嵴之体细胞增殖,与性细胞一起突向体腔,以柄状精巢系膜连于腹膜上皮;雌性生殖嵴之体细胞增殖,沿腹膜上皮横向伸展。用口服甲基睾丸酮(MT)的方法,设3个梯度(15×10-6、30×10-6、45×10-6)对鲢雌核发育苗进行性转,结果以出膜后3~4d的鱼苗口服MT(30×10-6),连续投喂50d,转雄效果较好,鱼苗能正常摄食药饵,成活率可达79.2%。 相似文献
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微生物可通过与植物的共生作用来降低重金属对植物的毒性,在重金属污染土壤低碳和绿色修复方面具有重要的应用价值。通过水培实验研究了沙福芽孢杆菌N4和睾丸酮丛毛单胞菌ZG2复合菌对玉米幼苗镍(Ni)和镉(Cd)胁迫的解毒特征及其机制。结果表明,在Ni和Cd胁迫浓度为5~20 mg·L-1的水培条件下,玉米种子萌发和幼苗生长都受到了明显的影响,而复合菌可通过与玉米幼苗的共生作用进行生长繁殖,降低了Ni和Cd对玉米幼苗生长的毒害作用,进而提高了玉米幼苗的株高、主根长、生物量以及叶绿素SPAD值。在Ni和Cd的胁迫浓度均为5、10、20 mg·L-1的条件下,与对照相比,复合菌可使玉米幼苗茎叶部Ni含量分别降低42.2%、37.0%、35.1%,Cd含量分别降低25.8%、27.2%、28.4%,叶片内较高毒性形态(乙醇提取态和去离子水提取态) Ni的分布比例之和降低13.9%~21.5%,Cd的分布比例之和降低14.7%~20.3%,叶片细胞器中Ni的分布比例降低12.1%~17.0%,Cd的分布比例降低20.7%~29.3%,使Ni胁迫下玉米幼苗茎叶部的Mg含量分别增加21.0%、39.0%、24.1%,Cd胁迫下玉米幼苗茎叶部的Mg含量分别增加29.4%、11.4%、35.9%,并且随着Mg浓度的增加,叶片Ni和Cd的含量进一步降低。研究表明复合菌通过降低玉米幼苗对Ni和Cd的吸收,促进叶片中Ni和Cd向较低毒性形态转化,降低叶片细胞器中Ni和Cd的占比,提高玉米幼苗对Mg的吸收等机制降低Ni和Cd对玉米幼苗的毒性作用,复合菌在Ni和Cd污染玉米耕地土壤修复方面具有重要的应用潜力。 相似文献
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为查明2018年8月云南省曲靖市富源县某规模化猪场发生母猪产死胎、弱仔猪的病因,本试验采集弱仔猪内脏组织病料进行病原菌的分离培养、生化鉴定、16S rRNA扩增、药敏试验及致病性试验。结果显示,从弱仔猪大脑组织内分离培养出1株菌落形态呈圆形、半透明的革兰氏阴性短杆菌。生化鉴定结果显示,衣康酸盐同化(ITA)、辛二酸盐同化(SUB)、乙酸盐(ACE)、DL-乳酸盐同化(LAT)、丙酸盐同化(PROP)、3-羟基-丁酸盐(3OB)、脯氨酸(PRO)生化反应结果呈阳性;丙氨酸同化(ALA)、D-甘露醇(MAN)、D-葡萄糖(GLU)、癸酸盐(CAP)、丝氨酸同化(SER)等生化反应结果呈阴性,其16S rRNA序列与GenBank中丛毛单胞菌属(Comamonas sp.)EB172株(登录号:EU847238.1)的16S rRNA核苷酸序列同源性达99%。药敏试验结果显示,其对阿莫西林/克拉维酸、头孢噻吩、多黏菌素E、复方新诺明、大观霉素、呋喃妥因和多西环素敏感。致病性试验结果显示,以0.3 mL 9.3×108 CFU/mL的细菌悬液腹腔接种小鼠,72 h内共有7只死亡(7/12)。本试验结果表明,弱仔猪及流产胎儿存在睾丸酮丛毛单胞菌感染。 相似文献
27.
研究了口服甲基睾丸酮(MT)诱导马拉瓜丽体鱼(Cichlasoma managuense)雄性化效应与鱼苗规格、剂量和处理时间的关系,并讨论了MT对马拉瓜丽体鱼的生长率和成活率的影响。结果表明,MT诱导1.2 cm以下鱼苗可获得较高的雄性率;鱼苗的雄性率随着MT含量增加和处理时间延长而提高,投喂剂量为40 mg/kg的饲料30d、50 mg/kg的饲料20 d以上,或者60 mg/kg的饲料10 d以上,鱼苗的雄性率均可达到90%以上;MT能提高马拉瓜丽体鱼的生长率,而与成活率没有直接依赖关系。 相似文献
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应用PCR技术将发生突变的tac启动子-10区(TATGTT)回复突变为TATATT和TATGAT,构建了两个重组质粒pPM1、pPM2,酶切结果发现pPM1质粒转化大肠杆菌后部分细菌对tac启动子进行切除。将重组质粒分别与pAX1共转化大肠杆菌,提取细菌总蛋白,酶联免疫吸附法测定细菌总蛋白中activator及3α-HSD的表达量,结果表明tac启动子-10保守区为TATATT的质粒比-10保守区为TATGAT的质粒具有更高的转录活性,activator及3α-HSD的表达量高低依次均为pPM1>pPM2>pb。根据同源重组原理构建突变菌,并利用HPLC测定了各突变菌对睾凡酮的降解能力,结果表明不同突变菌对睾凡酮的降解能力高低依次为Cp7(C.T.+ pPM1)> Cp4(C.T.+pPM2)> Cb7(C.T.+pb)>C.T.。 相似文献
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30.