p53V149F突变打靶载体及细胞模型的构建

目的构建p53基因突变模型,为研究p53基因突变引发肿瘤的发生和进展提供细胞模型资源。方法利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,根据 p53^V149F 突变位点的序列,在线设计合成单链向导sgRNA,构建CRISPR打靶载体;将重组载体转染细胞,流式分选阳性细胞群,提取细胞基因组,Sanger测序分析Cas9核酸酶对靶位点的切割情况,构建同源修复模板,通过T7EN1试验进一步检测编辑效率;将重组载体和同源模板通过电转染方法共同转染至成纤维细胞中,通过单克隆挑取、PCR和Sanger测序鉴定挑取含目标突变的细胞株。结果成功构建靶向p53基因目标区域的CRISPR/Cas9打靶载体;获得5个含目标突变的克隆点,点突变率为10%,测序结果出现套峰,表明出现基因型多样化;1个细胞克隆的测序结果无杂峰,TA克隆鉴定结果表明：一个等位基因存在p53^V149F位点突变,另一个等位基因存在240 bp缺失。结论成功构建了含p53^V149F的细胞系,并对基因的功能进行了初步验证,为进一步构建两基因同时修饰模型奠定了基础,并为药物筛选提供可用的细胞模型资源,为创制模拟疾病发生的遗传模式和临床表现的小型猪实验动物模型奠定了基础。     

新安县优质烤烟种植气候因子分析

选取新安县1971～2000年气温、降水、日照和相对湿度等4个对烤烟生产响最大的气象因子资料,分析其变化特点,得出新安县农业气候与优质烤烟所需气候特征相似,随着气候变暖将有利于优质烤烟的发展;并根据新安县实际,提出栽培措施,即:采取选择适宜播期,使季节气候与烟草气候最佳配置,加强烟田建管等。     

黑龙江7个春麦小麦品种幼胚愈伤诱导和植株再生研究

选用来自黑龙江的7个不同基因型小麦品种,以幼胚为外植体,MS为基本培养基,通过选用不同浓度的激素和有机物,设计了4种诱导培养基和10种分化培养基,研究不同基因型在不同培养基上愈伤诱导及植株再生能力。结果显示,7个不同基因型小麦在MS4诱导培养基上均具有较高的愈伤诱导率,平均达92.7%,其中“农麦30”愈伤平均诱导率高达94.4%。不同分化培养基下出芽率与基因型显著相关,不同基因型有不同的最适分化培养基。农麦30和农麦12受激素的种类和量影响较小,10种分化培养基上的出芽率都在较高的水平上,是良好的转基因材料。     

多因子对墨吉明对虾氮磷代谢的影响

对不同条件下的墨吉明对虾氮磷代谢进行了相关实验。实验结果表明：温度、体质量、盐度、p H、摄食状态和光照条件都对墨吉明对虾磷、硝酸氮、亚硝酸氮和氨氮代谢影响显著。在20~30℃范围内,随温度升高,墨吉明对虾磷、亚硝酸氮、氨氮代谢率均显著升高;硝酸氮代谢率在25℃条件下最大;磷、亚硝酸氮、硝酸氮代谢率随体质量增加而减慢,氨氮代谢加快;盐度在10~30范围内,随盐度升高,磷、亚硝酸氮代谢率提高,硝酸氮、氨氮代谢率下降;p H在7.5~9.0范围内,随p H值升高,磷代谢水平明显下降,氨氮代谢率显著升高,亚硝酸氮代谢率在p H 8.5时出现最大值（0.451±0.039）μg/（g·h）;硝酸氮代谢率在p H 8.0时有最小值（1.364±0.028）μg/（g·h）;饱食状态下墨吉明对虾磷、硝酸氮、亚硝酸氮、氨氮代谢率相对于饥饿组分别提高了33.85%、68.07%、233.81%、72.22%;正常光照条件下墨吉明对虾磷、硝酸氮、亚硝酸氮、氨氮代谢率相对于遮光组分别提高了130.79%、37.58%、120.23%、103.93%。     

上海农民合作社高质量发展相关思考

改革开放以来,中国农民合作社取得了较大发展,成为带动农户进入市场的基本主体、发展农村集体经济的新型实体、创新农村社会管理的有效载体.如何以农民合作社规范提升行动为抓手,推进农民合作社高质量发展,显得尤为重要.阐述了上海农民合作社的现状,并对影响合作社发展的主要问题进行分析,提出了以农民合作社规范提升为抓手,推进农民合作...     

静原鸡let-7a-5p的靶基因预测及组织表达分析

【目的】了解let-7a-5p的生物学信息,初步探索其在静原鸡肌肉组织中的功能作用。【方法】利用生物信息学方法对转录组测序获得的静原鸡let-7a-5p的成熟序列进行保守性分析,使用miRDB、TargetScan和miRanda在线软件预测let-7a-5p的靶基因,取其交集进行GO功能和KEGG通路富集分析,并利用实时荧光定量PCR检测let-7a-5p在静原鸡公鸡和母鸡各组织中的表达水平。【结果】let-7a-5p的成熟序列在各物种间高度保守,共预测得到38个基因集合。在生物过程、细胞组分和分子功能中靶基因富集较多的GO条目有细胞过程、生物调节、细胞、结合和催化活性;靶基因显著富集于聚酮糖单元生物合成、AGE-RAGE信号通路在糖尿病并发症中的作用、泛素介导的蛋白水解、TGF-β信号通路和加压素调节的水重吸收信号通路,且富集最多的是代谢途径、AGE-RAGE信号通路在糖尿病并发症中的作用、泛素介导的蛋白水解和MAPK信号通路。let-7a-5p-靶基因互作主要通过作用于靶mRNA的3′-UTR抑制表达或使其降解。组织表达发现,let-7a-5p在静原鸡公、母鸡的心脏、肝脏、脾脏、...     

黄芪多糖在LPS诱导的DF-1细胞炎症反应中的抗炎作用及其调节机制

为探讨黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)在LPS(lipopolysaccharide,LPS)诱导的鸡胚成纤维细胞系DF-1(chicken embryonic fibroblast cell line,DF-1)炎症模型中对IL-1β和TNF-α表达的影响,以及细胞因子信号转导抑...     

基于SD法的郑州市人民公园植物景观评价研究

采用SD法对郑州市人民公园植物景观进行评价研究,设定9个评价因子,选取公园20处具有代表性景观样点,有效回收186名游客调查问卷,运用SPSS对调查数据进行相关性分析。研究表明,郑州市人民公园植物景观满意度和环境舒适度平均分值分别为3.655分和4.055分,舒适度评分略高于满意程度,二者具有较高的关联程度;与环境舒适度相关性最高的是树荫面积,与植物景观满意度相关性最高的是植物景观意境,植物种类和植物量比的关联性较弱;公园20处景观样点评分≥4.0分的有5处,3.5~4.0分的有9处,3.0~3.5分的有4处,低于3.0分的有2处,其中樱花苑9号样点得分最高,分值为4.345分,郑州市人民公园植物景观整体水平呈良好状态。