Frankia菌株At4的类nodD基因的克隆与研究

通过功能互补法从Frankia菌株At4的基因文库中筛选到可互补豌豆根瘤菌nodD基因功能的pAt2GX和pAt3GX,把pAt2GX和pAt3GX重新导入tmdD突变体中,接种豌豆苗,可观察到nodD突变体恢复了结瘤功能。扫描电镜观察、根瘤内生菌抗性标记检测及内生菌重组质粒的酶切分析均表明nadD突变体恢复结瘤功能是山于带有外源质粒pAt2GX和pAt3GX所致,这就证明了pAt2GX和pAt3GX带有类nodD基因功能的DNA片段。酶切分析及DNA-DNA杂交实验结果说明pAt2GX和pAt3GX不属于同—克隆,但这两个质粒的DNA之间有同源区。     

银杏HDR基因的克隆与功能分析

[目的]获得银杏HDR基因的克隆并研究HDR基因的功能.[方法]采用RT-PCR技术获得银杏HDR的全长cDNA,命名为GbHDR(GenBank登录号:DQ364231),该基因cDNA全长为1 827 bp,包含1 425 bp的开放阅读框,编码474个氨基酸残基的蛋白;并构建GbHDR的原核表达载体pTrcGbHDR,与原核表达载体pAC-BETA共转入大肠杆菌XL1-Blue,获得β-胡萝卜素工程菌.[结果]克隆基因实际长度为1 441 bp的GbHDR基因,该序列包含1 425 bp的HDR基因ORF,编码474个氨基酸残基的蛋白,其预测分子量为53.2 kD,等电点预测为5.76.功能互补分析表明,GbHDR能推动工程菌XL1-Blue+pTrcGbHDR+pAC-BETA超量表达β-胡萝卜素,在颜色互补平板上呈现β-胡萝卜素特有的橘黄色,证实GbHDR具有典型的HDR基因功能.[结论]获得1株可高量积累β-胡萝卜素的大肠杆菌工程菌,为最终实现β-胡萝卜素代谢工程提供侯选基因和作用靶点.     

拟南芥MPK3、MPK4、MPK6在酵母hog1?中的渗透调节作用

【目的】研究拟南芥MAPK信号转导途径的关键基因MPK3、MPK4、MPK6的功能,明确其在渗透调节中的作用。【方法】构建拟南芥MPK3、MPK4、MPK6的酿酒酵母表达载体,遗传转化酿酒酵母渗透调节功能丧失的hog1?突变体,筛选得到阳性转化子,并分析其在渗透胁迫下的表型特征。【结果】扩增得到了拟南芥MPK3、MPK4、MPK6的全长cDNA序列,构建了上述3个基因的表达载体,并筛选得到了3个基因的阳性转化子。在1 mol•L-1 KCl、0.3 mol•L-1 LiCl、1 mol•L-1 NaCl、1 mol•L-1 Sorbitol的盐胁迫处理下,阳性转化子生长状态良好,与野生型的表型基本一致,均恢复了hog1?对盐胁迫的抗性。在盐胁迫处理下,hog1?细胞形态异常且体内甘油含量较野生型低,而转化子的形态和体内甘油含量均恢复到正常的表型。【结论】MPK3、MPK4、MPK6均能够使酿酒酵母渗透调节功能丧失突变体hog1?恢复对盐胁迫的抗性,具有渗透调节的功能。     

PtHAK5, a candidate for mediating high-affinity K+ uptake in the halophytic grass, Puccinellia tenuiflora

Puccinellia tenuiflora is a typical salt-exclu-ding halophytic grass with strong salt-tolerance, which enhances tolerance by restricting Na⁺ influx as well as having a strong selectivity for K⁺ over Na⁺. The HAK5 K⁺ transporters generally modulate effective K⁺ acquisition in plants, especially under low K⁺ condition. In this study, PtHAK5 from P. tenuiflora was isolated by RT-PCR and characterized using yeast complementation. The results showed PtHAK5 consisted of 784 amino acids and shared over 80% homology with the identified high-affinity K⁺ transporter HAK5 from other higher plants. The expression of PtHAK5 rescued the K⁺-uptake-defective phenotype of yeast strain CY162. In conclusion, PtHAK5 is a candidate for mediating high-affinity K⁺ uptake under low K⁺ conditions.     

昭通市农村能源发展趋势研究

采用典型抽样方法首次在昭通市的水富、绥江、巧家、鲁甸4个县开展农户生活能源设备使用情况调查,了解农户对能源设备的评价和使用意愿,以此分析农村能源发展趋势。结果表明,农村能源将向集中供能、多能互补、持续增长的趋势转变,提出大力推广节柴灶和太阳能热水器,积极研究和推广适合当地的生产、生活用能设备,适度发展大中型沼气池,大力支持农村公共能源基础设施建设等建议。     

水稻条斑病细菌hrp调节基因hrpGXooc和hrpXooc的克隆和序列分析

 Xanthomonas oryzae pv. oryzicola基因文库的hrp基因克隆pUHRS138携39.3-kb大小的hrp基因片段。经系列亚克隆和对hrp^-突变体的功能互补验证,4.5-kb BamHI-KpnI为最小功能片段,该片段可使X. o. pv. oryzicola的hrp^-突变体恢复在烟草上激发产生HR和在水稻上具致病性。序列测定和分析显示,4.5-kb hrp片段中含hrpXooc和hrpG_Xooc基因。单独的hrpG_Xooc和hrpXooc不能功能互补hrp^-突变体。hrpXooc与其它黄单胞菌中已克隆的hrpX的同一性达83%以上,推测的蛋白质水平上的差别主要在32、141、164、175、213、247和357位点上。HrpX序列中α-螺旋-转-α-螺旋结构在黄单胞菌中高度保守。hrpG_Xooc与水稻白叶枯病菌的hrpGXoo同一性达96%,与X. campestris pv. vesicatoria的hrpG_Xcv同一性达87%,与Ralstonia solanacearum的hrpG_Rs同源性较低,4种HrpG蛋白质水平上的差别主要集中在22、29、115和252位点上。HrpGXooc和HrpGXcv同列比较显示,3~9和216~220区域的氨基酸序列有所不同,可能反映了HrpG蛋白在感知环境信号和调节hrp基因表达方面的差别。     

水稻侧根突变体Oslrd2的表型分析和基因克隆

侧根是水稻胚后发育的重要器官,具有吸收养分和稳固植株的作用.本研究从甲基磺酸乙酯(EMS)诱变的水稻Kasalath突变体库中筛选得到一个水稻侧根突变体Oslrd2,对其进行了表型和遗传分析、图位克隆、候选基因测序及转基因互补验证.结果表明,与野生型相比,Oslrd2幼苗期的苗高和根系伸长都受到明显抑制,侧根短且数量少...     

番茄dxs基因的克隆及在大肠杆菌中的颜色互补

用RT-PCR (反转录- 聚合酶链式反应) 的方法从番茄中克隆到5-磷酸脱氧木酮糖合成酶(Deoxyoxylulose-5-phosphate synthase, DXS) 基因编码区(记为ledxs) , 并构建了ledxs原核表达载体pTrcLeDXS。将携带番茄红素生物合成途径上香叶基香叶基焦磷酸合成酶(geranylgeranyl pyrophosphate synthase, crtE) , 八氢番茄红素合成酶(phytoene synthase, crtB) , 八氢番茄红素脱饱和酶( phytoene desaturase, crt I) 3个关键酶基因的原核表达载体pAC-LYC转入大肠杆菌XL1-Blue。将pTrcLeDXS转入该重组工程菌, 获得番茄红素工程菌。将该菌用于构建颜色互补平板, 并进行发酵培养以检测番茄红素表达量。颜色互补平板上的菌斑呈现鲜艳的红色。经过21 h的培养番茄红素的产量达605.25μg·L^-1。结果显示:ledxs能明显推动类胡萝卜素途径向番茄红素合成的方向流动。