1个改进的DNA分子量标准物——pT13/HindMarke

在对某些基因进行克隆操作的过程中已经发现 ,重组质粒 p T1和 p T2等量混合 ,经 Hind 酶切后的电泳条带分布均匀 ,比较适合作为质粒DNA酶切鉴定的分子量标准物 (Marker) ,并将其命名为 p T1 2 / Hind Marker[1] 。但是该Marker缺少 2 .0 kb左右、1 .0左右以及 0 .5kb以下的     

核酸疫苗的研究进展

核酸疫苗(nucleic acid vaccine),也称基因疫苗(genetic vaccine),是指将含有编码的蛋白基因序列的质粒载体,经肌肉注射或微弹轰击等方法导入宿主体内,通过宿主细胞表达抗源蛋白,诱导宿主细胞产生对该抗源蛋白的免疫应答,以达到预防和治疗疾病的目的.核酸疫苗是利用现代生物技术免疫学、生物化学、分子生物学等研制成的,分为DNA疫苗和RNA疫苗两种.但目前对核酸苗的研究以DNA疫苗为主.     

牛乳腺细胞系BME—L1β—酪蛋白分泌的诱导及人促红细胞生成素（h …

用悬浮胶元及生乳激素诱导ＢＭＥ－Ｌ１泌了β－酪蛋白，证明了ＢＭＥ－Ｌ１所具有上皮性质，用质脂体介导法向ＢＥＭ－Ｌ１转入含人促红细胞生成素基因的质粒ｐＢＣＥ，经生乳激素及悬浮胶元诱导，这些细胞短暂表达ｈＥＰＯ。讨论了影响乳腺细胞内源乳蛋白基因及外源基因表达效率的因素。     

Advance on the Tigecycline Resistance Mechanism

Tigecycline,as a new tetracycline antibiotic,is one of the last lines of defense against carbapenems-producing enterobacter multidrug-resistant infections.In recent years,the emergence of tigecycline-resistant strains has severely restricted the clinical use of tigecycline.It was originally believed that the resistance mechanism of tigecycline was mediated by the efflux pump encoded by the chromosome,which could not lead to drug resistance by horizontal transfer.With the deepening of research,it was found that some efflux pump mutations or high expression on the plasmid could also cause the strain's tigecycline sensitivity to decrease.Recently,it has been reported that the plasmid-mediated tet(X) variant can make the strain highly resistant to tigecycline,and can be spread among different species of bacteria through adaptable plasmids.This article described the prevalence and transmission mechanism of high-level tigecycline resistance gene tet(X) variants by introducing bacterial chromosome-mediated tigecycline resistance mechanisms and plasmid-mediated tigecycline resistance mechanisms,and provided a reasonable explanation for the high-level variant of the tigecycline resistance gene tet(X) in animal-derived strains,aiming to provide reference for relevant scientific researchers and clinical workers.     

轮状病毒VP4蛋白与热稳定肠毒素融合基因的克隆及其植物表达载体的构建

利用DNA重组技术，将用PCR扩增来的VP4-ST融合基因分别克隆到原核表达载体pThioHisB及植物表达载体pBin438中，成功构建了重组表达质粒pTh—VP4-ST和pB—VP4ST。将pTh—VP4-ST进行SDS-PAGE分析，结果表明，表达的目的蛋白以包涵体形式存在，大小约40ku；同时将pB—VP4一ST转化了农杆菌EHA105。     

拟南芥AtLCR67干扰质粒的构建及转基因植株的鉴定

种子发育过程是植物整个生长周期最重要的阶段,涉及到一系列功能物质的合成和转化,是由各种相互关联的基因共同控制完成的,因此,研究该阶段特异性表达的基因对研究种子发育过程非常重要。以种子特异性表达的基因At LCR67为研究对象,通过构建RNAi干扰质粒,借助根癌农杆菌介导的浸花法,将At LCR67基因的RNAi表达框转到拟南芥基因组中;经过PPT抗性筛选与PCR鉴定,成功获得了8株转基因植株。对其中的3株进一步作RT-PCR检测,显示有2株中的At LCR67基因表达被完全抑制,另一株的基因表达水平被抑制了大约70%,结果完全实现了设计目标;同时还发现T2代植株有晚花表型。这两株转基因植株为进一步研究At LCR67功能与作用机制提供了良好的遗传材料。     

负股RNA病毒反向遗传学操作及其应用

负股RNA病毒是动物病毒中重要的一群,包括人和动物许多重要的病原,如流感病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、呼吸道合胞体、副流感、狂犬病、埃博拉及汉坦病毒等。所有这些病毒均属于基因组分节段(正粘病毒、布尼病毒、嵌砂样病毒属)和不分节段(副粘病毒属、弹状病毒属、丝状病毒属和波纳病毒属)的几个属。同其他RNA病毒和DNA病毒相比,     

JSRV-Env重组质粒诱导转染TC-1、TC-1-Hyal2细胞后对TGF-α及VEGF因子表达的影响

通过脂质体法将JSRV-Env重组质粒瞬时转染小鼠肺上皮细胞（TC-1）和表达绵羊Hyal-2的小鼠肺上皮细胞（TC-1-Hyal2）,而后探讨两细胞中转化生长因子-α（TGF-α）及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA和蛋白表达的变化,以此分析TGF-α、VEGF与绵羊肺腺瘤病（ovine pulmonary adenomatosis,OPA）发生的关联性及其在细胞癌变过程中的作用。体外培养TC-1和TC-1-Hyal2细胞,按照不同质粒可将TC-1和TC-1-Hyal2细胞分别设为pEGFP-C1-env转染组、pEGFP-C1转染组和未转染组。利用实时荧光定量PCR和ELISA方法对TGF-α、VEGF的表达水平进行检测。实时荧光定量PCR检测结果表明,相比对照组（pEGFP-C1转染组及未转染组）,在转染pEGFP-C1-env的两细胞组中VEGF mRNA的表达量均显著升高（P<0.05）;而两细胞组中TGF-α mRNA的表达量均极显著升高（P<0.01）。ELISA检测结果表明,同两对照组相比,转染pEGFP-C1-env的TC-1-Hyal2细胞上清液中VEGF、TGF-α蛋白浓度均极显著升高（P<0.01）;且VEGF在相同转染处理的TC-1细胞组中其蛋白浓度也极显著升高（P<0.01）,而TGF-α的蛋白浓度呈显著升高（P<0.05）。比较pEGFP-C1转染和未转染各细胞组中TGF-α、VEGF的mRNA和蛋白表达量,结果均无显著差异（P>0.05）。本研究发现,通过实时荧光定量PCR和ELISA方法检测经JSRV-Env诱导转染上述两细胞系后TGF-α、VEGF的mRNA和蛋白表达量均升高,结果提示JSRV-Env可能上调两细胞因子,进而可推测TGF-α、VEGF的表达变化与OPA发病存在一定的关联性,由此为衍生出的OPA针对二者进行基因靶向治疗方案提供重要的理论依据。     

真菌线粒体基因组大小变化

近年来研究表明,真菌线粒体基因组大小存在明显变化,范围在10 kb到100多kb之间。这种变化引起了真菌学家、遗传学家及进化生物学家的浓厚兴趣。该研究综述了影响真菌物种内及物种间线粒体基因组大小变化的一些因素,包括内含子、线粒体质粒和其他可移动遗传因子。了解和认识真菌线粒体基因组的遗传变化,可以更好地帮助理解真菌乃至其他真核生物的进化。     

转基因水稻标准质粒分子的构建与分析

针对目前转基因(GM)产品检测标准分子的缺乏,构建适用于转基因水稻的标准质粒分子pMDSPS和pMDTheli,其中包含水稻内源基因SPS通用序列,耐盐基因ThST3和Ubiquitin启动子序列的构建特异性Theli序列。对其特异性及制备标准曲线的可靠性进行鉴定研究,研究结果显示,在进行普通PCR扩增时,采用质粒标准分子为阳性对照,均能特异扩增目的条带。以标准质粒分子构建的标准曲线,SPS基因的定量标准曲线的相关系数平均为0.9993,PCR扩增效率在1.0004~1.034之间;ThST3基因的定量标准曲线的相关系数平均为0.9937,PCR扩增效率在0.9358~0.9486之间。因此,构建的标准分子pMDSPS和pMDTheli既能作为普通PCR的阳性对照,也能用于定量标准曲线的构建,为转基因水稻的定量检测提供简便、价格低廉的标准分子打下基础。