间接抑制酶联免疫吸附法测定大豆凝集素方法的建立

本研究用标准抗原、纯化抗体和辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG ,建立间接抑制酶联免疫吸附法 ,测定了几种不同品种生大豆和豆粕产品的凝集素含量。结果表明 ,间接抑制ELISA检测大豆制品中的凝集素含量变异系数小于 15 % ,样品回收率误差在 15 %以内 ;抑制率在 2 0 %～ 70 %范围内 ,曲线呈现良好的线性关系 ,提取液中的大豆凝集素检测下限为 10mg mL。因此本研究建立的间接抑制ELISA法检测生大豆和大豆加工产品中的凝集素含量是可行的     

中华绒螯蟹血清凝集素的分离纯化与性质研究

运用硫酸铵盐析和GlcNAc-Sepharose 6B亲合层析等方法从中华绒螯蟹的血清中分离出一种天然的凝集素,经SDS-PAGE测得其分子量约为82 kD,由单一亚基组成,由等电聚焦凝胶电泳测得其等电点(pI)为5.4.糖凝集抑制试验中检测到葡萄糖、半乳糖、甘露糖、乳糖、果糖和蔗糖对中华绒螯蟹血清凝集素均没有抑制作用,但N-乙酰氨基糖GIcNAc、GalNAc和ManNAc等能抑制其凝集活性.热变性试验结果表明,温度为10～50℃,凝集素仍保持强的凝集活性,但温度升至60℃后,凝集活性迅速下降,至80℃失去凝集活性,在pH 4.0～8.0的各缓冲液中保持较强的凝集活性,而在此pH范围外,凝集活性均有不同程度的下降.中华绒螯蟹血清凝集素可使外源红血细胞发生凝集,还具有凝集细菌或抗菌作用.     

大豆凝集素处理对肉仔鸡生长性能及小肠发育的影响

选用1日龄健康艾维茵肉仔鸡,从7日龄开始,分别进行饲喂基础日粮(对照组)和基础日粮添加大豆凝集素处理,以研究不同大豆凝集素添加水平对肉仔鸡生长性能、小肠发育的影响。结果表明:日粮中添加不同水平的大豆凝集素显著降低了肉仔鸡的平均日采食量(P0.05);0.05%和0.10%大豆凝集素添加组肉仔鸡的平均日增重、绝对增重和相对增重无显著影响(P0.05);肉仔鸡小肠长度和重量随着日粮中大豆凝集素添加水平的升高而呈线性增加,日粮中添加0.10%大豆凝集素显著增加了肉仔鸡的小肠长度及重量。研究结果提示,日粮中添加不同水平大豆凝集素,影响了肉仔鸡生长性能和小肠发育,对动物产生了抗营养作用。     

热处理条件参数对豆粕中大豆凝集素活性影响

利用二因子析因试验方法,初步研究了通过不同的干热温度和不同的处理时间对提异黄酮前后豆粕中大豆凝集素活力和蛋白质溶解度影响,通过系列试验得出结论:对普通豆粕经过干热130℃15 min和140℃5 min;对于提异黄酮豆粕干热130℃10 min,不但可使凝集素活力达到最低,而且可达到动物对豆粕中蛋白质利用率最高,如果在实际中应用可以广泛地提高豆粕的有效利用率。     

转抗蚜GNA基因苜蓿的研究

将雪花莲凝集素基因GNA插入双元载体pBI121中的GUS基因的上游,得到植物表达载体pLG66m。GNA与GUS基因构成融合基因,共用一个CaMV35S启动子。将该表达载体导入农杆菌LBA4404,得到LBA4404／pLG66m菌株。利用LBA4404／pLG66m菌株培养液直接浸泡萌动的苜蓿种子,组织学检测表明GUS在种苗上3 d的瞬时表达效率超过90％。待苜蓿长出第3片真叶后检测,GUS表达效率明显下降。GNA基因在种苗期间的短期表达也积累GNA毒蛋白在苜蓿体内的含量,为苜蓿在苗期抗蚜起到一定作用。     

大豆凝集素单克隆抗体的制备及鉴定

为获得分泌抗大豆凝集素(SBA)单克隆抗体的杂交瘤细胞,以纯化的SBA为抗原,免疫BALB/c小鼠,加强免疫3 d后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,应用有限稀释法和间接ELISA 方法克隆筛选出2株分泌抗SBA单克隆抗体的杂交瘤细胞系A7、F12。细胞上清抗体效价均在1∶2×10³以上,腹水抗体效价均为1∶1×10⁶,单抗亚型鉴定结果均为IgG2b型,分子质量为189.6 ku,亲和常数为7.1×10⁷ mol/L,Western blotting结果表明,2株单抗具有较高的特异性。该McAb的制备为建立SBA定量检测方法奠定了基础。     

不同加工处理大豆制品对鲤鱼鱼种生产性能的影响

选择健康的体质量为(5.89±0.36)g鲤鱼Cyprinus carpio鱼种为试验鱼,以生大豆粉和不同处理的大豆制品分别替代鱼粉,大豆蛋白分别替代鱼粉蛋白的50%,配制5个等蛋白(可消化蛋白质量分数为30%)、等能(可消化能15 MJ.kg-1)的半精制饲料,探讨饲料中不同处理的大豆制品对鱼粉蛋白的替代对鲤鱼生长、饲料利用和体组成的影响.结果表明:平均增质量率热处理大豆组与对照组差异不显著(P0.05),生大豆组显著低于对照组(P0.05),化学钝化组、热处理大豆组和热乙醇浸提组之间没有显著差异(P0.05),但都显著高于生大豆组(P0.05).化学钝化组和热处理大豆组的蛋白效率与对照组差异不显著(P0.05),生大豆组的蛋白效率显著低于对照组、化学钝化组和热处理大豆组(P0.05),但与热乙醇浸提组没有显著差异(P0.05).热处理大豆组的饲料系数与对照组差异不显著(P0.05),但显著低于其他各组(P0.05),其他各组之间没有显著差异(P0.05).生大豆组显著影响鱼类的水分、脂肪和灰分的含量(P0.05).在该试验条件下,热处理大豆组要好于其他各处理组.大豆抗营养因子对鱼类负面影响程度的顺序是抗胰蛋白酶抑制因子凝集素大豆抗原蛋白,降低抗营养因子的负面影响程度的处理顺序是热处理化学钝化热乙醇浸提.     

Insecticidal effect of recombinant endophytic bacterium containing Pinellia ternata agglutinin against white backed planthopper, Sogatella furcifera

White backed planthopper (WBPH; Sogota furcifera Horvath) has become the major threat to rice crops throughout Asia, damaging plants both through its feeding behavior and by acting as a virus vector. Here, we developed a novel method for biologically controlling WBPH by using endophytic bacterium to express anti-pest plant lectins. Strain SJ-10 of an endophytic bacterium, characterized as Enterobacter cloacae by morphological, physiological, biochemical and 16s rDNA characteristics, was isolated from rice seedlings. The Pinellia ternate agglutinin (PTA) gene was cloned into SJ-10 for expression. The positive transformant, selected by antibiotic resistance, was evaluated using PCR, SDS-PAGE and Western blot assay. After inoculation, rSJ-10 could colonize rice plants so that they expressed PTA, and then the rice was shown to have insecticidal activity against WBPH. The results showed that rSJ-10 could significantly decrease the survival and fecundity of WBPH fed on rice seedlings (p < 0.01). At day 19, the fecundity of WBPH inoculated with rSJ-10, or with wild-type SJ-10 was decreased by 86.1%, and 25.6%, respectively. At day 22, numbers of WBPH on rice in the control were 19.4 times greater than on rice inoculated with rSJ-10. At day 26, the rice seedlings all died in the control group, but the seedlings inoculated with rSJ-10 grew well. The results showed that the rice seedlings inoculated with rSJ-10 expressing PTA protein were endowed with the anti-pest activity against WBPH. Further work is needed to investigate whether the rice plants expressing rPTA are toxic to mammals. This research highlights a way to biologically control planthoppers by recombinant endophytic bacteria expressing plant lectins.     

三疣梭子蟹血清凝集素的生物学特性

对三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)血清凝集素的凝集特性进行了研究.结果表明:三疣梭子蟹血清凝集素对鲫鱼、中华鳖、草鱼、鸡和人类A、B、0型血细胞没有凝集作用,但是对小鼠、兔的血细胞表现出较强的凝集活性,其中对小鼠血细胞的血凝活性达到210,对兔血细胞的血凝活性达到28;盐度对其凝集活性有较大影响,NaCl浓度在0.6 mol/L以上时基本失活;凝集素活性最适pH值为6.0～7.4;血清凝集素对Ca2+、Mg2+离子有明显的依赖性,EDTA可以明显抑制其凝集活性;糖抑制结果表明,血清凝集素活性能被N-乙酰葡萄糖胺及N-乙酰甘露糖胺特异性抑制;对血清凝集素进行硫酸铵分级沉淀分离后,发现凝集素活性主要分布在25％饱和度硫酸铵沉淀区;聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)结果表明,主要蛋白条带在72～95 ku.     

农杆菌介导pta和sb401基因共转化水稻的研究

利用农杆菌介导法,将半夏凝集素(pta)基因和高赖氨酸蛋白(sb401)基因导入水稻中,经潮霉素抗性筛选,得到70株独立再生植株.通过PCR检测,从中筛选出18株转基因植株.对这些转基因植株当代进行Southern blotting分析表明:pta 基因和sb401基因已经共转化并整和到受体基因组中.对转基因植株后代的叶片进行RT-PCR分析表明:pta基因在转录水平上得到了有效的表达.测定10株T0转基因植株成熟种子的赖氨酸和总蛋白质量分数表明,与对照相比,赖氨酸和总蛋白的提高率分别为8.48%～35.34%和4.55%～32.74%,表明sb401基因在大部分转基因植株成熟种子中的蛋白质水平上得到了比较有效的表达.