全文获取类型
收费全文 | 1025篇 |
免费 | 15篇 |
国内免费 | 87篇 |
专业分类
林业 | 7篇 |
农学 | 36篇 |
基础科学 | 2篇 |
77篇 | |
综合类 | 427篇 |
农作物 | 30篇 |
水产渔业 | 22篇 |
畜牧兽医 | 500篇 |
园艺 | 10篇 |
植物保护 | 16篇 |
出版年
2024年 | 2篇 |
2023年 | 13篇 |
2022年 | 15篇 |
2021年 | 13篇 |
2020年 | 17篇 |
2019年 | 22篇 |
2018年 | 13篇 |
2017年 | 13篇 |
2016年 | 21篇 |
2015年 | 21篇 |
2014年 | 38篇 |
2013年 | 28篇 |
2012年 | 73篇 |
2011年 | 73篇 |
2010年 | 69篇 |
2009年 | 84篇 |
2008年 | 79篇 |
2007年 | 76篇 |
2006年 | 67篇 |
2005年 | 59篇 |
2004年 | 51篇 |
2003年 | 45篇 |
2002年 | 22篇 |
2001年 | 20篇 |
2000年 | 31篇 |
1999年 | 25篇 |
1998年 | 20篇 |
1997年 | 16篇 |
1996年 | 8篇 |
1995年 | 17篇 |
1994年 | 20篇 |
1993年 | 8篇 |
1992年 | 9篇 |
1991年 | 11篇 |
1990年 | 12篇 |
1989年 | 4篇 |
1988年 | 5篇 |
1987年 | 5篇 |
1986年 | 2篇 |
排序方式: 共有1127条查询结果,搜索用时 62 毫秒
91.
92.
在伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)上海株gI基因和gE基因克隆鉴定的基础上,进一步构建了转移载体质粒,为PRV-SH的gE-gI基因部分缺失毒株的构建作准备,将gI和gE基因克隆入pUC18中构建pgEI载体,利用gE基因中的酶切位点缺失掉gE基因5′端363bp,并把录色荧光蛋白(GFP)基因表达盒插入到缺失部分。通过酶切鉴定,表明GFP基因已3插入到pgEI中,构建了含GFP的缺失转移载体pgEI-GFP。用DOTAP试剂将pgEI-GFP转染感染了PRV-SH株的兔肾(RK)细胞,待出现80%以上的细胞病变时收获病毒,并以GFP为标志,通过蚀斑法得到纯化重组病毒,命名为PFDE/DI。 相似文献
93.
94.
为制备质量和数量都较高的质粒DNA,在提取方法和程序上,完善出一套用煮沸裂解法大量提取质粒DNA的方法,该方法提取步骤简单,经电泳检测和定量分析,提取效果好,易于推广使用。 相似文献
95.
用PCR方法从酵母(Saccharomycescerevisiae)AH109中扩增出α-半乳糖苷酶的Mel1基因,将其克隆至整合型载体pGAPZαA中构建成组成型分泌表达酶产物的重组质粒pGAPZα-Mel1。将线性化的重组质粒pGAPZα-Mel1电击转化至毕赤酵母(Pichiapastoris)KM71,在含有100mg/mLzeocin和预先涂布有X-α-gal的YPDS平板上选择蓝色阳性菌落。发酵培养酵母的上清经SDS-PAGE分析,在53kD处有特异带;经非变性PAGE凝胶电泳,与显色底物的反应,检测到α-半乳糖苷酶活性带。重组菌pGAPZα-Mel1/KM71摇瓶发酵6d后,培养液α-半乳糖苷酶粗酶活性为12U/mL。 相似文献
96.
为了研究导入GRF基因质粒对犊牛生长性能的影响,选取36头体重为约102kg西门塔尔杂交牛,随机分成四组每组9头,分别注射含有0mg,3.37mg,6.74mg,10.11mg质粒的5ml生理盐水。在试验过程中,定期进行增重,饲料采食量和生长激素水平的测定。试验结果表明,各处理组均在一定程度上提高了动物的日增重和饲料转化率,其中6.74mg处理组效果最好,日增重比对照组高出17.33%(P<0.01),饲料转化率提高18.05%(P<0.01)。屠宰后进行组织质粒残留检测,未发现有残留。 相似文献
97.
膜蛋白是禽传染性支气管炎病毒的主要结构蛋白,可能存在着具有重要免疫作用的抗原决定簇,能诱导细胞介导的免疫反应,但其免疫生物学功能尚不清楚.本研究选择禽传染性支气管炎病毒中国分离株SAIBWJ,通过RT-PCR扩增获得其膜蛋白基因M基因并插入到PGEM-T载体中,获得重组质粒PGEM-M,将重组质粒中的克隆片段进行序列测定及分析.对PGEM-M进行双酶切获得M基因片段,克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,通过菌落PCR、双酶切证明获得了M基因的真核表达质粒.利用DNAstar软件将IBV SAIBwj株的膜蛋白基因的核苷酸序列与GenBank中的国内外参考毒株进行比较,其核苷酸序列的同源率为91.6%~98.8%,氨基酸序列的同源率为91.6%~99.6%.糖基化位点的增加和减少对M蛋白的抗原性产生很大的影响.在M蛋白近N端含有两个糖基化位点,第一个跨膜疏水区距离亲水区大约20个氨基酸.SAIBwjM基因核苷酸、氨基酸进化关系可以看出,SAIBwjM与国内外参考株的同源性均较高,因此可能具有交叉保护性抗原,可望用于制备诊断试剂及制备基因工程疫苗.由于IBV变异较大,常规疫苗不能产生完全保护力.在IBV的免疫保护机制中,细胞免疫起着关键的作用,近年来一些研究者已经进行了IBVDNA疫苗的研究,并取得了一定的进展.IBV的S1基因真核表达质粒可同时诱导机体形成针对IBV的细胞免疫和体液免疫反应,由于S1基因经骨骼肌细胞内源性表达后主要通过MHCI类分子提呈抗原,特别有利于CD8+细胞毒T淋巴细胞的激活,对IBV免疫保护极有意义.陈洪岩等将鸡传染性支气管炎病毒肾型T株S1基因cDNA连接于pcDNA3构建了真核表达质粒,经肌肉注射免疫SPF鸡后血清IgG抗体逐渐升高,至35日龄左右达到高峰,但血清IgG抗体升高幅度不及IB油苗.质粒DNA免疫攻毒后有40%的鸡可耐过强毒的攻击,说明S1基因在体内获得了表达并使鸡产生了一定的免疫力.刘思国等将鸡传染性支气管炎HB株的核蛋白基因(N基)亚克隆到pcDNA3,构建了真核表达质粒pcDNA-N.用该质粒两次免疫SPF雏鸡一周后进行攻毒试验,结果保护率为40%,表明N蛋白介导的细胞免疫在抗感染中发挥了作用.现在的DNA疫苗研究主要集中在免疫原性较高的N基因和S基因,对免疫原性较低的M基因的研究,国内未见报道.国外有报道M蛋白也能刺激机体产生低水平的抗体,M蛋白上可能存在着具有重要免疫作用的抗原决定簇,本研究将为进一步研究M基因的免疫原性及其在IBV中的作用基础材料. 相似文献
98.
99.
根据引物设计的一般原则,参照伊氏锥虫HGPRT基因的核苷酸序列设计、合成一对引物,PCR扩增伊氏锥虫HGPRT基因cDNA。低熔点琼脂糖回收:PCR产物,并将其克隆至pGEM—T Easy载体中,经酶切、PCR鉴定和序列分析,获得重组中间质粒pGEM/HGPRT。重组中间质粒pGEM/HGPRT经Nco I和Sal I双酶切,回收目的片段HGPRT,以非融合形式插入原核表达质粒pBV220构建表达质粒pBV/HGPRT,转化大肠杆菌DH5a,42℃诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳和薄层扫描分析,表达产物HGPRT的分子量约为23kD,与理论推算值相符,表达率占总菌体蛋白的19%,经间接ELISA检测,表达产物能被伊氏锥虫阳性血清所识别。 相似文献
100.
利用反转录和套式PCR技术,从猪瘟病毒(CSFV)石门血毒中扩增出了E2基因,将其用N0tⅠ和XhoⅠ双酶切后,与同样处理的真核表达载体pBudCE4.1相连,获得了pBudCE Es2-22的阳性质粒。对后者再以HindⅢ和XbaⅠ双酶切,并与来自质粒pBudCE lacZ/CAT的lacZ基因片段连接,获得了含CSFV E2基因与lacZ报告基因的真核双表达质粒pBudCE lacZ/Es2—22。该质粒转染BHK21细胞后,用β-Gal Staining试剂盒原位染色可见许多着染蓝色的细胞;用CSFV Antigen试剂盒检测转染细胞的上清液和细胞沉淀,均可检测到含CSFV E2抗原。结果表明,构建的真核质粒pBudCE lacZ/Es2—22实现了2个外源基因的共表达。 相似文献