向日葵柄锈菌效应子P2的定位及功能研究

由向日葵柄锈菌（Puccinia helianthi Schw.）引起的向日葵锈病严重威胁着向日葵的安全生产。效应子是一类病原菌侵染过程中分泌的蛋白，促进病原菌侵染或触发寄主免疫。为明确向日葵锈菌效应子P2在锈菌侵染过程中发挥的作用，对该基因序列进行了生物信息学分析；以向日葵锈菌夏孢子cDNA为模板，克隆了P2基因的编码序列，利用qRT-PCR技术分析了该基因在侵染过程中的表达特性；采用农杆菌瞬时表达系统在烟草上验证了P2的毒性功能，并在烟草上瞬时表达对其进行了亚细胞定位。研究结果表明，P2编码58个氨基酸，N端含24氨基酸的信号肽，无核定位信号及跨膜结构域，并在向日葵锈菌侵染早期上调表达。在本氏烟中瞬时表达P2可以抑制BAX诱导的细胞坏死，亚细胞定位结果表明P2定位在细胞膜及细胞核。     

TNF-α对IPEC-1细胞生长、屏障功能以及程序性坏死关键基因表达的影响

本试验探讨了肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激对猪小肠上皮细胞（IPEC-1）细胞生长、屏障功能以及程序性坏死关键基因表达的影响。IPEC-1细胞分别用0或50 ng/mL的TNF-α处理48 h，收集细胞和上清检测相关指标。结果表明：与对照组相比，TNF-α刺激使IPEC-1细胞活力下降（P<0.001），细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性升高（P<0.05），细胞数量减少（P<0.05）;TNF-α刺激使IPEC-1细胞跨上皮电阻降低（P<0.05），同时荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖4(FD4)通透性增加（P<0.05）;TNF-α刺激使咬合蛋白（Occludin）和闭合小环蛋白-1(ZO-1)的膜分布紊乱，Occludin(P<0.001)和ZO-1(P<0.05)的表达量降低；TNF-α刺激增加了程序性坏死关键因子受体相互作用蛋白激酶3(RIP3)和混合系激酶样结构域蛋白（MLKL）的mRNA表达量（P<0.05）。以上结果表明，TNF-α刺激诱导IPEC-1细胞损伤，破坏了细胞屏障，激活了细胞程序性坏死信号通路。