广灵驴FTO基因克隆、序列分析及组织差异表达

[目的] 对广灵驴脂肪和肥胖相关基因（fat mass and obesity-associated gene,FTO）进行克隆及序列分析,同时检测其在广灵驴各组织中的表达差异,以探究广灵驴FTO基因结构对其生理代谢功能的影响。[方法] 运用RT-PCR技术扩增并克隆广灵驴FTO基因CDS序列,进行基因及蛋白质功能分析,同时运用实时荧光定量PCR方法检测FTO基因在广灵驴7种组织（心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌及皮下脂肪）中的差异表达。[结果] 广灵驴FTO基因CDS区序列长1 518 bp,编码505个氨基酸,序列提交至NCBI,登录号：MZ169553。广灵驴FTO基因与马、猪、牛、人、羊驼、绵羊和山羊的相似性为99.3%、90.3%、89.5%、90.8%、90.7%、89.2%和89.2%;系统进化树分析发现,广灵驴与马的亲缘关系最近。FTO蛋白分子质量为58.35 ku,理论等电点为5.07,脂肪系数为80.36,不稳定系数为48.82,平均疏水指数为-0.550,为不稳定的酸性亲水蛋白。FTO蛋白无信号肽和跨膜区,主要定位于细胞质中,具有34个磷酸化位点与5个糖基化位点。FTO蛋白二级结构主要以α-螺旋（43.96%）和无规则卷曲（37.82%）为主。实时荧光定量PCR分析发现,FTO基因在广灵驴7个组织中均有表达,其中在肺脏和皮下脂肪中的表达量极显著高于其他组织（P<0.01）,在背最长肌中表达量最低。[结论] 本试验结果可为下一步基因表达与调控脂肪沉积机制及改善驴肉品质的研究奠定基础。     

2种头孢氨苄片在比格犬体内的药代动力学及生物等效性试验

[目的] 研究头孢氨苄片受试制剂和参比制剂在比格犬体内的生物等效性。[方法] 采用双周期和双序列交叉设计,将22只健康比格犬随机分成2组,按30 mg/kg BW分别单剂量口服头孢氨苄片受试制剂Trolevis^®300和参比制剂Rilexine^®300,于给药前（0 h）和给药后0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、12、17和24 h从臂头静脉采血。对超高效液相色谱串联质谱（UPLC-MS/MS）方法进行特异性、线性、检测限、准确度、精密度、稳定性等方法学考察。利用建立好的UPLC-MS/MS方法测定血浆中的药物浓度,并用WinNonlin^TM 8.1软件对药代动力学参数进行分析计算。[结果] 方法学结果显示,在100~5 000 ng/mL浓度范围内相关性良好,相关系数（R²）≥ 0.99,标准曲线方程为y=10.6828x-176.481;高、中、低3个浓度的相对回收率平均值分别为105.63%、104.35%和102.40%;日内和日间变异系数均<15%;检测限为50 ng/mL,定量限为100 ng/mL。药代动力学结果显示,参比制剂组和受试制剂组药代动力学参数如下：T_max分别为（1.77±0.55）和（2.70±4.68）h;C_max分别为（28.09±5.09）和（26.82±7.94）μg/mL;T_1/2分别为（3.39±1.43）和（3.12±1.05）h;AUC_0-t分别为（121.81±25.80）和（116.34±36.30）μg·h/mL。受试制剂与参比制剂药时曲线相似,且受试制剂与参比制剂C_max、AUC_0-t和AUC_0-∞几何均数的比值分别为99.51%、99.27%和99.30%,其90% CI均在80.00%~125.00%之间。[结论] 本试验建立的UPLC-MS/MS方法准确、可靠,可用于头孢氨苄的浓度测定,且头孢氨苄受试制剂与参比制剂是等效的,临床上均可用于相关疾病的治疗。     

NaOH溶液脱绒对白羊草种子活力的影响

[目的] 探究NaOH溶液脱绒处理对白羊草（Bothriochloa ischaemum）种子活力的影响,为机械化播种提供便利条件。[方法] 分别利用浓度为10%、20%、30%、40%、50%（W/V）的NaOH溶液对白羊草种子进行脱绒处理0（CK）、1、5、10、15 min,分析其对发芽率（Gp）、发芽指数（Gi）、平均发芽时间（MGT）、幼苗活力指数（SVI）的影响,筛选白羊草种子NaOH溶液脱绒的最佳条件。[结果] NaOH溶液浓度及处理时间均对白羊草种子活力具有极显著（P<0.01）影响。相同处理时间下,白羊草种子脱绒1~10 min后Gp、Gi随NaOH溶液浓度的增加而增加,脱绒1 min和10 min后SVI随着NaOH溶液浓度的增加而增加,脱绒5 min后SVI随NaOH溶液浓度的增加呈先降低后升高的趋势,脱绒15 min时Gp、Gi和SVI随NaOH溶液浓度的增加呈先升后降的趋势;在20%~50%的NaOH溶液浓度下,脱绒后白羊草种子Gp、Gi和SVI随处理时间的增加呈先升后降的趋势。经NaOH溶液脱绒处理后白羊草种子的MGT均高于CK。[结论] 适宜浓度的NaOH溶液浸种能有效脱去白羊草种子表面的绒毛,提高白羊草种子的活力。浓度为50%的NaOH溶液浸种5 min对白羊草种子活力的促进效果最好。     

黑种草子提取物对小鼠酒精性肝损伤的修复作用及机制研究

【目的】验证黑种草子提取物对小鼠酒精性肝损伤的修复作用并探究其机制,为其临床开发研究提供理论依据。【方法】将56只3周龄昆明小鼠随机均分为7组：空白对照组,模型组,黑种草子提取物高、中、低剂量组,黑种草子粉剂组及水飞蓟宾阳性对照组,每组8只。除空白对照组外,其余各组均以10 mL/kg 60%酒精灌胃,每天1次,连续15 d。第16天,黑种草子提取物高、中、低剂量组分别给予8、4、2 mL/kg黑种草子提取物,每天1次,连续10 d后处死小鼠。计算各组小鼠肝脏指数;检测血清中谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活力;制备肝脏石蜡切片观察其病理变化;Western blotting检测NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1（cysteinyl aspartate specific proteinase 1,Caspase-1）和白细胞介素1β（interleukin-1β,IL-1β）的蛋白表达水平。【结果】与空白对照组相比,模型组小鼠肝脏指数显著上升（P<0.05）,肝细胞出现明显颗粒变性,水泡变性,核溶解,界限区分不清,肝索消失;血清ALT、AST活力显著上升（P<0.05）,SOD、CAT、GSH-Px活力显著下降（P<0.05）,说明肝损伤模型建立成功,且肝脏组织中NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。与模型组相比,黑种草子提取物各剂量组血清ALT、AST活力均呈下降趋势,SOD、CAT、GSH-Px活力均呈上升趋势,其中高剂量组上述各指标均呈显著差异（P<0.05）,肝脏组织结构明显改善,NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白表达水平均显著下降（P<0.05）。【结论】高剂量（8 mL/kg）黑种草子提取物可显著提高肝损伤小鼠的抗氧化水平,且可以通过抑制NLRP3炎性小体的表达而减少IL-1β的合成,从而改善肝脏功能和修复受损的肝脏组织结构。     

‘晋农1号’达乌里胡枝子根瘤内生解磷菌的鉴定及特性研究

根瘤内生解磷菌具有促进豆科植物结瘤固氮,提高植物抗逆性等作用。本研究以‘晋农1号’达乌里胡枝子(Lespedeza daurica ‘Jinnong NO.1’)为试验材料,采用“划线法”分离其根瘤内生菌,筛选具有解磷能力的菌株,测定其解磷能力,并对其抗逆和促生特性进行研究。结果表明：达乌里胡枝子根瘤中共分离出88株内生菌,其中11株具有解磷能力;TG41,TG43,TG47和TG68解有机磷量为0.73~1.29μg·mL^-1,TG47和TG68解无机磷量为72.97和1.29μg·mL^-1,为有效解磷菌;经鉴定,TG41和TG43为Bacillus zanthoxyli,TG47为Phyllobacterium zundukense,TG68为Pantoea agglomerans;TG41,TG43和TG68在盐浓度0.01%~9.00%和pH4~pH12条件下均可生长;4株菌不耐高温,TG47和TG68能在4℃生长;TG41,TG43和TG68能分泌铁载体和有机酸。综上,达乌里胡枝子根瘤中存在丰富的内生菌,部分具有解磷功能、抗逆和促生潜力,可用于研发适合黄土高原地区胡枝子建植的根瘤微生物复合菌剂。     

仁用杏营养元素循环研究

对仁用杏林生物量及９种营养元素生物循环的研究结果表明：仁用杏林（４年）生物量为５．７８４９ｔ／ｈｍ２。不同器官营养元素含量差异较大，Ｎ、Ｐ、Ｋ、Ｍｇ的含量叶中最高；Ｆｅ、Ｚｎ、Ｃｕ、Ｍｎ的含量吸收根中最高；不同营养元素吸收、存留、利用排序相同，归还排序不同。     

水分胁迫对新红星苹果幼树光合作用的影响

水分胁迫对新红星苹果幼树光合作用影响的研究表明:水分胁迫条件下,新红星苹果幼树净光合速率随叶片水势的降低存在阈值现象,叶片净光合速率下降的临界水势为-2.03MPa.对新红星苹果幼树灌溉的临界土壤含水量轻壤土为9.78％;暗呼吸及光呼吸速率与叶水势降低的关系,呈现先升高而后下降的曲线类型;严重的水分胁迫可以引起叶绿素含量下降。     

地肤提取物对山楂叶螨体内几种酶活性的影响

采用生化方法测定地肤三氯甲烷提取物对山楂叶螨体内谷胱甘肽-S-转移酶、羧酸酯酶、单胺氧化酶、Ca2 -ATP酶活性的影响.结果表明:地肤提取物处理山楂叶螨后,螨体内谷胱甘肽-S-转移酶、羧酸酯酶等解毒酶活性被激活,谷胱甘肽-S-转移酶、羧酸酯酶都是昆虫体内重要的代谢解毒酶系,它们参与了昆虫对内源或异源有毒物质的代谢解毒,特别是对杀虫剂的解毒,这表明地肤提取物中存在对山楂叶螨有毒的物质,从而引起了螨体的解毒作用,来维持正常的生理功能.而单胺氧化酶、Ca2 -ATP酶的活力受到一定程度的抑制.Ca2 -ATP酶的被抑制,可能会破坏细胞内外Ca2 的平衡,影响神经细胞的兴奋和传导,引起神经传递的阻断;单胺氧化酶被抑制,使螨体内神经胺积累,也会造成神经传递的阻断,从而导致螨体的死亡.以上结果表明地肤作为新型植物源农药具有良好的开发前景.     

不同覆盖处理对元宝枫叶生物活性物质含量的影响

以2年生元宝枫苗为试材,对其进行不同覆盖处理,测定叶内黄酮、绿原酸、叶绿素、SOD活性酶和丙二醛的含量,并进行方差分析和多重比较.结果表明:不同覆盖处理对元宝枫叶中生物活性物质含量的影响十分明显,黄酮含量在白膜覆盖下最高,绿原酸和叶绿素含量在绿膜覆盖下最高,SOD酶活性和丙二醛含量在红膜覆盖下最高,黄酮、叶绿素、丙二醛含量在不同覆盖处理下均以α=0.01水平上差异极显著,SOD酶活性和绿原酸含量以α=0.05水平上差异显著.