人B7-H4慢病毒表达载体的构建

目的构建人B7-H4慢病毒表达载体。方法将RT-PCR扩增的B7-H4基因全长编码序列克隆到慢病毒转移载体,通过脂质体转染293细胞,包装成人B7-H4慢病毒颗粒。RT-PCR、流式细胞术和Western blot鉴定B7-H4在重组慢病毒感染293细胞中表达,50%组织培养感染剂量法（TCID50法）检测重组慢病毒滴度。结果成功构建了pMD18-T-hB7-H4质粒和pEZ-Lv105-hB7-H4质粒。基因测序分析证实人B7-H4编码序列成功整合到质粒载体。TCID50法测定Lenti-hB7-9H4慢病毒滴度为1.7×10^9 copies/mL。RT-PCR、流式细胞术和Western blot证实Lenti-hB7-H4慢病毒转染细胞后可有效表达人B7-H4 mRNA和蛋白质。结论成功构建了表达人B7-H4的慢病毒颗粒。     

黄连水提物抗甲型流感病毒活性初步研究

目的观察黄连水提物对甲型流感病毒（IAV）活性的影响。方法 CCK-8法检测黄连水提物对狗肾传代（MDCK）细胞的毒性作用。采用反向遗传8质粒病毒拯救系统制备IAV后,CCK-8和CPE法检测黄连水提物抗IAV活性。利用荧光素酶编码基因报告系统研究黄连水提物对IAV感染性和RNA聚合酶活性的影响。结果黄连水提物在0.25~2.0g/L质量浓度内,对MDCK细胞有一定安全性。黄连水提物有较好的抗IAV作用。与对照组比较,黄连水提物处理组细胞的相对荧光强度明显降低（P〈0.01）。结论黄连水提物对IAV活性及感染性有较强抑制作用,可能与抑制病毒RNA聚合酶活性有关。     

骨质疏松症患者生命质量量表研制中的条目筛选

目的针对骨质疏松症患者开发生命质量量表的特异模块。方法采用核心小组和议题小组的程序化决策方式,并参照国内外制定量表的经验研制本量表。通过定量调查和定性访谈相结合的方法对条目进行评价、修改和初筛,制定初步量表。对25例骨质疏松症患者和25名医护人员进行问卷调查和访谈,采用变异系数法、医生重要性评分、患者重要性评分、相关分析、因子分析对结果进行分析。结果按以上5种方法分别选出14、15、15、13、13个条目,最终得出14个条目的特异模块,包含症状、药物副作用和心理等3个方面。结论按严格程序筛选得出了骨质疏松症患者生命质量量表的特异模块。     

慢性病患者生命质量测定量表体系之慢性肾功能衰竭量表QLICD-CRF的效度评价

目的对慢性病患者生命质量测定量表体系之慢性肾功能衰竭量表QLICD-CRF的效度进行分析评价。方法164名确诊为慢性肾功能衰竭患者填写QLICD-CRF量表及SF-36量表,采用专家评价法分析内容效度,条目维度相关性分析和探索性因子分析法进行结构效度分析,以SF-36为校标计算效标效度。结果各条目可反映和覆盖量表理论框架;各领域及其所属条目的相关系数多数都较高;特异模块因子分析累积方差贡献率为57.36%,提取的3个公因子反映了其3个侧面;以SF-36量表为校标,基本上都是相同和相似领域相关系数大于不同和不相似领域的相关系数。结论QLICD-CRF量表具有较好的效度,可以作为慢性肾功能衰竭患者生命质量的测评工具。     

人成纤维细胞生长因子-21的拟南芥油体表达系统构建

【目的】利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)油体系统表达人成纤维细胞生长因子-21(Fibroblastgrowth factor-21,FGF21),为利用植物油体表达系统规模化生产FGF21奠定基础。【方法】以磷酸甘露糖异构酶(PMI)基因作为转基因植物的安全筛选标记,将带有组氨酸标签的人源FGF21基因与大豆油体蛋白基因融合,克隆至大豆油体蛋白启动子驱动的表达载体pCAMBIA1390MDo(p1390MDo)上,构建植物双元表达载体p1390MDoFGF21。采用冻融法将植物双元表达载体p1390MDoFGF21转入农杆菌GV3101,花粉管导入法转化拟南芥,采用PCR检测、Southern blot筛选转基因拟南芥阳性植株(T0),并对FGF21蛋白在转基因拟南芥种子(T1)中的表达进行Western blot分析。【结果】成功构建了带PMI安全筛选标记的植物双元表达载体p1390MDoFGF21。PCR扩增和Southern blot分析结果表明,重组FGF21融合基因以单拷贝和多拷贝2种方式已整合到转基因拟南芥基因组中。BandScand 5.0软件和Western blot分析结果显示,FGF21融合蛋白约占转基因拟南芥种子可溶性蛋白的3.76%,并具有良好的免疫原性。【结论】FGF21融合基因已经转入拟南芥中,并在以PMI为选择标记的转基因拟南芥种子中成功高效表达。