RAPD分子标记方法及在蔬菜研究中的应用

总结了RAPD（random amplified polymorphic DNA)标记技术的原理、特点及在使用过程中的注意事项。综述了目前蔬菜研究、生产在品种(杂种)鉴定、分子标记辅助育种、亲缘关系和遗传多样性方面的研究,以及在遗传图谱构建等方面的应用情况及其前景。     

臭椿雄蕊的发育和雄配子体的形成

利用常规石蜡制片技术,对臭椿[Ailanthus ahissima (Mill. ) Swingle]的小孢子发生及雄配子体形成过程进行了观察.结果表明:(1)雄株的小孢子发生和雄配子体发育过程正常,花药4室,花药壁由5～6层细胞组成,分别为表皮、药室内壁、中层(2～3层)和绒毡层.药壁的发育属于基本型,腺质绒毡层.(2)孢原细胞为多孢原起源.小孢子母细胞减数分裂过程中的胞质分裂为同时型,形成的四分孢子大多为四面体型,偶尔有左右对称型.同一药室的小孢子母细胞减数分裂几乎完全同步.(3)成熟花粉粒为二细胞型,具3个萌发孔.(4)两性花植株的小孢子母细胞未进行减数分裂就已退化,而且绒毡层细胞液泡化,细胞质稀少以及过度膨胀.开花时花粉囊空瘪,无花粉形成.两性花中花药败育发生在小孢子母细胞减数分裂之前,因此臭椿为形态上的雄花和两性花异株,实为功能上的雌雄异株.     

昆虫病原线虫对韭蛆和土壤线虫群落的影响

防治韭菜的主要地下害虫韭蛆(迟眼蕈蚊Bradysia odoriphaga)是造成韭菜农药残留超标主要原因。室内实验表明,生物天敌昆虫病原线虫Steinernema feltiae处理60h后,韭蛆杀死率显著高于使用农药的对照组。2010年4月18日在山东省寿光市丰城地区韭菜地施用昆虫病原线虫以防治韭菜的主要害虫韭蛆,同时以施用化学农药辛硫磷作为对照,处理后第35d和第175d调查结果表明,昆虫病原线虫处理组的昆虫病原线虫多度显著高于化学对照组,其中第175d调查结果表明,经昆虫病原线虫处理后的韭菜鲜重比化学农药处理的对照组增加了10.4%,但差异未达到显著效果。上述结果表明,昆虫病原线虫能够有效控制韭蛆危害。第35d取样结果表明,昆虫病原线虫处理组的土壤线虫群落Shannon多样性指数高于化学农药处理组;第175d调查结果表明,两种处理之间土壤线虫群落各指标相近。试验结果表明昆虫病原线虫能够有效防治韭蛆。     

芽孢杆菌L4菌株角蛋白酶的酶学性质研究

采用室内实验方法,对芽胞杆菌L_4菌株产生的角蛋白酶进行了系列的酶学性质研究.结果表明,以角蛋白溶液为底物时该酶的最适酶促反应温度为40℃,最适酶促反应pH为7.0,其Km值为1.88 mmol·L~(-1),Vmax为2.72×10~(-2)mmol·L~(-1)·s~(-1).利用不同的蛋白酶抑制剂进行酶活性抑制实验,发现该酶受邻啡罗啉和EDTA的抑制,推测该酶可能是一种含Zn~(2+)的金属蛋白酶.微量元素对该酶活力的影响显著,Ca~(2+)和Mg~(2+)对酶活力有促进作用,高浓度的Fe~(2+)和Cu~(2+)明显抑制角蛋白活力.     

渤海鱼类复殖吸虫多样性分布特征

通过整理1983~1986年采集的渤海鱼类复殖吸虫标本,共发现复殖吸虫14科48属84种,主要分布在内海的塘沽、秦皇岛、黄骅等地。复殖吸虫多样性分布特征呈现由内海到外海逐渐递减的变化趋势。这种变化趋势受物种数、优势种的聚集强度、鱼类多样性、水环境等因素的影响。     

转基因棉花对根际土壤微生物多样性的影响

本研究应用PCR、T/A克隆、RFLP等分子生物学研究方法分析了两种大田栽培的转基因抗虫棉(SGK321、中棉所41)苗期、花铃期、衰老期根际土壤微生物特异性DNA序列变化,探讨转基因棉花种植对根际土壤微生物区系组成多样性的影响.16S rDNA和5.8S ITS PCR扩增产物经T/A克隆分别得到1 066、563个阳性克隆,根据酶切图谱进行聚类分析.结果表明,相同生育期的棉花根际土壤微生物区系相似性远高于转基因棉花根际微生物间的相似性.这表明转基因棉花对根际土壤微生物的影响不明显,棉花根际土壤微生物区系差异主要受生育期影响.     

现代农业科技革命与农技推广人才队伍发展

现代农业科技革命的标志是现代高新的生物技术和信息技术在农业领域的具体应用。面向现代农业科技革命的农技推广人才队伍发展对策是：加大政策扶持力度,提高农技推广人才的社会地位;加强培训工作,提高农技推广人才的素质;增强创新意识,提高农技推广人才解决实际生产问题的能力。     

不同施用方式下昆虫病原线虫对小地老虎的防治作用

小地老虎是重要的地下害虫,严重为害烟草、玉米、棉花等作物。为促进昆虫病原线虫在小地老虎防治中的使用,以云南当地品系与商业品系为材料,调查了3种施用方式（悬液、悬液+覆盖刨花、虫尸剂）下昆虫病原线虫防治小地老虎保护烟苗的效果,并根据后续埋入的大蜡螟死亡情况评估昆虫病原线虫在土壤中的存活情况。盆栽试验结果表明,喷施悬液7 d后,两个商业品系的昆虫病原线虫Steinernema carpocapsae All(Sc All)和Heterorhabditis indica LN2(Hi LN2)保苗效果显著。各施用方式处理保苗效果由高到低为悬液>悬液+覆盖刨花>虫尸剂。田间试验结果表明,处理7 d后,Sc All悬液处理效果优于所有品系的虫尸剂处理效果,烟苗死亡率与化学农药氯氰菊酯相当,直接施用Sc All悬液能较好地抑制小地老虎对烟苗的为害,而虫尸剂释放的昆虫病原线虫存活时间较长,可针对不同的防治窗口期结合应用。     

川西獐牙菜SmGES基因的克隆、生物信息学分析与原核表达

研究藏药川西獐牙菜中环烯醚萜合成途径中的关键酶香叶醇合成酶的功能,并探讨其在香叶醇、龙胆苦苷和獐牙菜苦苷生物合成中的作用。以川西獐牙菜叶片为材料,提取RNA并反转为cDNA,通过川西獐牙菜转录组相关信息,用RT-PCR技术克隆得到了川西獐牙菜香叶醇合成酶基因,并命名为SmGES基因。将SmGES基因片段通过分子生物学的方法连接到原核表达载体pET-28a上并转化到Escherichia coli Rosetta(DE3)原核表达感受态中,进行相关的诱导表达。通过生物信息学进行相关分析得出,SmGES基因长1761 bp,编码586个氨基酸;SmGES蛋白等电点为5.35,相对分子质量为67.78 kDa。分析表明SmGES基因带有叶绿体转运肽,预测其是定位于叶绿体的亲水蛋白。文章还分析了该蛋白的细胞内定位、结构域、二级和三级结构。进化关系分析表明,SmGES基因与滇龙胆的GES基因具有较近的亲缘关系。诱导得到重组蛋白分子质量67.78 kDa的蛋白条带,与预期大小一致。研究结果为进一步阐明川西獐牙菜中环烯醚萜合成途径提供参考。     

双色荧光 PCR 检测醉马草内生真菌(Neotyphodium gansuense)(英文)

醉马草内生真菌(Neotyphodium gansuense)曾对我国的畜牧业造成过巨大损失,目前其鉴定仍是基于表型和分离培养的检测技术。本研究以与 N. gansuense 形态非常相似的同属种 N. coenophialum、N. lolii、N. huerfanum、N. chisosum 和 N. aotearoae 等共 6 种 7 个标准菌株,以及采自新疆的醉马草种子为环境材料,扩增和测定了它们的β-Tub 基因约 430 bp 的序列。根据序列分析结果,设计了 Neotyphodium 属的通用Taqman 探针和引物以及 N. gansuense 的特异探针和引物,基于双色荧光 PCR 技术成功建立了快速、敏感的分子检测方法。所建立的检测技术可实现对 N. gansuense 菌丝培养物、单粒醉马草种子中 N. gansuense 的检测,并且检测时间只需 7 h。该检测技术能很好弥补传统检测鉴定方法的不足,可直接应用于国内外畜牧业种子和草坪草种子中 N. gansuense 带菌率的检测。