马铃薯卷叶病毒缺失突变CP基因的原核表达及抗血清的制备

 利用RT-PCR扩增马铃薯卷叶病毒（PLRV）外壳蛋白（CP）基因（PLRV-CP）,回收大小约630 bp的特异性扩增片段并进行T-A克隆,测序表明该基因长度为627 bp,与已报道的36个PLRV-CP基因的核苷酸序列的同源性大于96%。以pBAD/Thio-TOPO为起始载体,构建了PLRV-CP基因的原核表达载体pBAD-LRCP。以pBAD-LRCP为模板,用PCR法删除了该基因富含精氨酸稀有密码子的第52 ~ 177核苷酸,获得了PLRV缺失突变CP基因的原核表达载体pBAD-LRCP-126。用阿拉伯糖诱导工程菌TOP10（pBAD-LRCP-126）,获得了34 kD的诱导表达的融合蛋白（重组CP）。用镍离子亲和层析法从包涵体中纯化出了高纯度的重组CP,用纯化的重组CP作抗原免疫家兔获得了PLRV特异性的抗血清,间接ELISA检测显示效价为1︰12 800。本研究结果为利用重组CP作抗原大量制备PLRV抗血清奠定了基础。     

2020年猪场蓝耳病临床抗体检测分析与防控建议

为了对猪蓝耳病病毒的抗体进行检测,2020年齐鲁动物保健品有限公司对全国18个省（区、市）采集的3 857份生猪血清样品进行了抗体检测。检测数据显示,蓝耳病平均抗体合格率为74.3%,反馈了临床上蓝耳病的严重程度。造成猪群发生蓝耳病的主要原因是种猪质量不高、后备驯化缺失、免疫不科学、不尊重免疫学规律等。提升种猪群质量,重视后备猪管理与驯化,尊重免疫学规律是解决养猪场发生蓝耳病问题的重要途径。     

白籽插接商品种苗在山东设施黄瓜生产上的推广应用

正白籽插接商品种苗的推广应用改变了山东设施黄瓜的栽培模式,将传统的越冬长季节栽培变为秋冬茬和早春茬连茬栽培,大大降低了长季节栽培过程中促控结合的管理难度,生产的黄瓜具有果皮油亮、品质优良、丰产抗逆、畅销度好、增效显著的优势。嫁接技术作为设施黄瓜栽培的主要配套技术在山东被广泛应用。近几年随着山东工厂集约化育苗的兴起,黄瓜嫁接方法从传统靠接方式转变为插接方式,砧木品种白籽南瓜替代了传统的黑籽南瓜。     

马铃薯GLDH基因的克隆及序列分析

 以马铃薯品种‘Favorita’叶片中的cDNA为模板,采用RT-PCR、巢式PCR、3′RACE和5′RACE技术,获得了L–半乳糖酸–1,4–内酯脱氢酶（EC 1131213,GLDH）基因cDNA 2 563 bp的全长序列,命名为StGLDH（GenBank：FJ755844）。序列分析表明,该基因编码区长1 773 bp,编码590个氨基酸,与其他植物GLDH氨基酸序列具有很高的同源性,尤其与番茄、辣椒、烟草GLDH 氨基酸序列具有90.6% ~ 95.9%的同源性。荧光定量分析表明,该基因在马铃薯不同器官中均有表达,在幼叶和功能叶中表达量最高,在茎中表达量最低;除匍匐茎外,其它器官中抗坏血酸（ascorbic acid,AsA）含量与StGLDH的表达高度一致。     

甘露糖结合凝集素相关的丝氨酸蛋白酶1研究进展

甘露糖结合凝集素途径是补体激活的一个重要途径,在无特异性免疫应答的生物体内或在机体发生免疫应答之前,凝集素补体途径可发挥主要的防御作用。甘露糖结合凝集素相关的丝氨酸蛋白酶（mannose-binding lectin-associated serine protease,MASP）是凝集素途径的中心蛋白酶分子。甘露糖结合凝集素（mannose-binding lectin,MBL）或纤维胶凝蛋白（ficolin）分子通过其胶原样区（collagen-like region,CLR）与MBL相关丝氨酸蛋白酶MASP-1或MASP-2结合形成复合物,在其C端糖识别域（carbohydrate recognition domain,CRD）识别、结合病原微生物的糖结构后,可活化MASPs酶原,从而激活补体凝集素途径而发挥天然抗感染免疫效应。     

马铃薯卷叶病毒CP基因水溶性原核表达的研究

采用两种策略增强了马铃薯卷叶病毒(PLRV)CP基因的水溶性原核表达。首先,用5种可表达出分子伴侣的质粒分别转化重组菌TOP10(p BAD-LRCP),获得了既含p BAD-LRCP又含分子伴侣质粒的转化子;诱导转化子中PLRVCP基因与分子伴侣基因同时表达,SDS-PAGE结果表明,从转化子提取的水溶性蛋白中有明显的PLRV重组CP条带,即分子伴侣增进了重组CP的水溶性表达。其次,将PLRV-CP基因定向插入p ColdⅠ中构建了该基因的冷激诱导原核表达载体p Cold-LRCP,15℃、IPTG诱导24h,SDS-PAGE分析表明,从重组菌BL21(p Cold-LRCP)提取的上清蛋白中有明显的PLRV重组CP条带。试验结果表明,分子伴侣与冷激蛋白基因csp A的启动子均可提高PLRV-CP基因的水溶性表达,且后者的表达水平高于前者。     

不同种植方式对甘薯健康种薯繁育的影响研究

为筛选出适宜冷凉地区甘薯健康种薯的繁育种植模式,以济薯26、烟薯25、济薯25的试管苗扩繁的薯苗为材料,开展不同种植方式对种薯繁育的影响研究。结果发现平栽法下三个品种的块根产量、结薯数以及中薯率均高于斜插法。相同的栽插方式和栽植密度条件下,随着栽插时间的推迟种薯产量和大薯率逐渐降低。不同的栽植密度下,三个品种的块根产量、干物率差异不显著,其中在T4(5 500株/667 m²)和T5(6 000株/667 m²)种植密度下其种薯的中薯率达到70%以上。综合种薯的各种性状表现,按照5 500～6 000株/667 m²的密度在5月20日采用平栽法进行种植其种薯产量和中薯率最优。     

旱地棉花施肥技术与机理研究

以中棉所 1 9号为材料研究了旱作条件下的施肥技术及其生理学依据。结果表明 ,旱地棉花不同施肥处理的生育期、衣分等无明显差异 ,而棉花株高增长、总铃数、铃重等则因施肥处理不同有明显差异 ,以每公顷纯N1 5 0kg、P2 O51 2 0kg、K2 O1 2 0kg全部基施的产量最高。形态学观察和生理学测定表明 ,基施氮肥有利于前期营养体的生长而较早搭起丰产架子 ;配合基施磷、钾肥促进了棉花根系发育 ,使功能叶片中K+ 含量和POD活性升高 ,增强了棉花的耐旱能力。     

几种生物制剂对小麦根腐病菌的毒力

为探索生物制剂对小麦根腐病的防控效果,采用菌丝生长法测定了6种生物制剂对禾谷镰刀菌、刺腐霉菌和小麦离蠕孢菌的毒力。结果表明,申嗪霉素、乙蒜素和春雷霉素具有良好的抑菌效果,其中申嗪霉素的毒力最强,对禾谷镰刀菌、刺腐霉菌和小麦离蠕孢菌的EC₅₀值分别为0.350 2 mg·L^-1、0.864 5 mg·L^-1和0.134 1 mg·L^-1,乙蒜素对刺腐霉菌和小麦离蠕孢菌的EC₅₀值分别为2.957 3 mg·L^-1和2.342 7 mg·L^-1,春雷霉素对刺腐霉菌和禾谷镰刀菌的EC₅₀值分别为0.864 5 mg·L^-1和5.090 9 mg·L^-1。室内盆栽试验表明,申嗪霉素和乙蒜素对禾谷镰刀菌的防治效果显著优于春雷霉素,防治效果分别为75.73%和74.68%;乙蒜素对刺腐霉菌的防治效果最好,防效为86.28%;申嗪霉素和乙蒜素对离蠕孢菌的防效分别为87.68%和83.25%。综上所述,申嗪霉素和乙蒜素能有效抑制禾谷镰刀菌、刺腐霉菌和小麦离蠕孢菌三种病原菌的生长,对小麦根腐病防治具有很大应用潜力。     

小麦成熟期QTL定位与分析

小麦成熟期对粮食周年丰产具有重要的决定作用。为了给小麦分子标记辅助育种提供可用的分子标记,本研究以人工合成六倍体小麦(Turtur)和T.spelta L.衍生系(Bubo)为亲本创制的包含186个家系的RIL群体(F6)为材料,构建了包含5 301个标记(4 120个DArT标记、621个SNP标记和560个传统DArT标记),总长为2 464cM的遗传连锁图谱,利用Windows QTL Cartographer 2.5软件的复合区间作图法对在3年4点环境下的成熟期性状进行QTL检测,在LOD2.5水平下,共定位到15个QTL,分布于小麦的1A、2B、2D、3A、4A、4B、5B、7A和7B染色体上,可解释4.42～12.67的表型变异。其中在1A染色体上控制小麦成熟期的QTL贡献率最大;4B染色体的1215714-1068877F0-44CG区间内3年3点均检测到的QTL与1215714标记遗传距离为0.01cM,近乎共分离,为下一步分子标记辅助选择的精准性提供了坚实的基础。