利用ITS1和ITS4通用引物扩增香蕉枯萎病菌核酸片段鉴定其生理小种

利用真菌核糖体rDNA区通用引物ITS1和ITS4,扩增采集自香蕉的13株镰刀菌包括18S rDNA部分序列、ITS1-5.8S-ITS2全部序列和28S rDNA部分序列的片段,通过BLAST序列比对分析,确定13株菌为尖孢镰刀菌[Fusarium oxysporum]。采用最大简约法,以层出镰刀菌[F.proliferatum(EU151490)]和茄病镰刀菌[F.solani(GQ376116)]为外群,将13株菌的序列与BLAST检索获得的尖镰孢古巴专化型(F.oxysporum f.sp.Cubense)相应序列构建了系统发育树。系统发育分析结果显示,13株菌与NCBI登录的4个尖镰孢古巴专化型菌株一起被分成3个亚群,亚群聚类结果与回接鉴定结果及文献报道的生理小种结果完全一致。     

1株广谱抗真菌芽孢杆菌TR21的鉴定

利用API50CH鉴定系统、16S rDNA、gyrA和gyrB基因序列分析法,对1株分离自石斛兰叶片的广谱抗真菌芽孢杆菌TR21进行生化和分子鉴定。通过API50CH系统测试,TR21菌株与枯草芽孢杆菌相似性为90.3%,被鉴定为枯草芽孢杆菌。利用16SrDNA序列分析发现TR21菌株与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、B.subtilis subsp.subtilis、B.subtilis subsp.spizizenii和B.velezensis的相应核苷酸序列具有很高的同源性,其序列相似性皆为99%,而基于gyrA和gyrB基因序列构建的系统发育树显示,该菌株与枯草芽孢杆菌的相似性分别为96%和91%。结合16SrDNA、gyrA和gyrB基因序列分析,也确定该菌为枯草芽孢杆菌。比较API鉴定和基于不同基因的鉴定发现,分子鉴定更加快速、灵敏。     

粉叶金花的繁殖与栽培

2003年珠海市农业科学研究中心旅游观光区引进粉叶金花试种，经过多年栽培与研究。用作绿化装饰，景观欣赏，是一种深受人们喜爱的观赏植物。现将其栽培要点介绍如下：     

珠海香蕉枯萎病菌遗传多样性的AFLP分析

为了解广东省珠海地区香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f. sp. Cubense)的种群分化和遗传变异规律,采用AFLP技术对来自珠海、湛江、台山的20株尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)进行DNA指纹分析,以1株分离自粉蕉的木贼镰刀菌(F. equiseti)为外参。20株尖孢镰刀菌中17株来自珠海,包括3株非致菌、2株香蕉枯萎病1号生理小种、12株香蕉枯萎病4号生理小种,2株来自湛江的为香蕉枯萎病4号生理小种,1株来自台山的为香蕉枯萎病1号生理小种。8对AFLP引物对供试菌株扩增出253条带,其中多态性带97条,占总带数的38.34%,供试菌株的遗传距离变化在0.21~0.99间,平均为0.85。利用NTSYSpc软件中的UPGMA算法构建了21株镰刀菌的AFLP亲缘树状图,聚类结果表明：供试菌株被聚为3个大的类群,分别为1号生理小种、4号生理小种以及非致病性尖孢镰刀菌。亲缘关系分析结果表明：1号生理小种内菌株间的遗传分化大于4号生理小种,其聚类结果与菌株的地理来源有一定的相关性。总体而言,珠海地区香蕉枯萎病菌的遗传多样性较为丰富。     

香蕉枯萎病菌对不同香蕉品种防御酶系的影响

摘要：本文研究了不同香蕉品种在接种香蕉枯萎病菌后防御酶系的变化。结果表明,经病原菌接种后,SOD酶活性的大小与不同香蕉品种的耐、感病之间呈负相关;PO酶和内切几丁质酶活性的变化趋势与香蕉品种的抗病性之间不存在相关性;PAL酶、β-1, 3-葡聚糖酶和外切几丁质酶的活性变化趋势与香蕉品种抗、感病品种关系密切,可以作为香蕉品种抗枯萎病一个重要的生物化学指标。     

枯草芽胞杆菌TR21激发的广粉1号根系抗性信号物质累积

通过检测广粉1号根系中与抗性途径有关的信号物质NO、H_2O_2和SA含量变化,揭示枯草芽胞杆菌TR21菌株诱导的粉蕉系统抗性与SAR途径的关系。试验设置清水(CK)、TR21叶腋接种、香蕉枯萎病菌FOC004菌株根系接种和挑战接种(TR21叶腋接种24h后再根系接种FOC004)4种方式处理广粉1号种苗,测定4种方式接种后0、12、24、48、72、96h根系SA、NO、H_2O_2含量。结果显示:TR21处理和FOC004处理均在早期避免激活植物产生NO,而挑战处理则迅速激活植物根系产生NO并持续维持高水平;TR21处理和FOC004处理也在早期避免迅速激活植物产生H_2O_2,FOC004处理在24h才显著激发植物根系H_2O_2含量升高,而TR21处理需要到48h才使根系H_2O_2达到最高,但挑战处理在12h就显著激发了植物根系的H_2O_2,并一直维持较高水平;TR21处理早期显著激发植物根系游离SA的产生并避免植物产生结合态SA,FOC004处理则抑制植物根系在应答早期产生游离态和结合态SA,挑战处理主要激发植物长期稳定高水平产生结合态SA。试验表明,TR21叶腋接种的确可以激发广粉1号后期快速应答病原菌的入侵,对TR21进一步开发和大田生产应用具有意义。     

粉蕉种植土镰刀菌分离与鉴定

利用PPA培养基对粉蕉不同生长周期根际土壤中镰刀菌进行分离,通过形态学和分子生物学对分离的菌株进行描述与鉴定,并分析粉蕉不同生长周期根际土壤中镰刀菌群落变化.试验结果表明,在粉蕉不同生长期根际土壤中共分离出31株镰刀菌,经形态学和分子生物学鉴定,31株镰刀菌分属于茄病镰刀菌(Fus arium solani)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)、层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)和串珠镰刀菌(Gibberella moniliformis).随着粉蕉生长,粉蕉根际土壤中可分离的镰刀菌种类表现出先上升后下降的趋势,且菌株种类逐渐稳定.在生殖生长期,由于受到枯萎病病原菌的影响,土壤中镰刀菌种类产生显著变化,菌株种类数量显著增加.     

枯草芽胞杆菌 R31 的原生质体制备方法优化

枯草芽胞杆菌R31可用于香蕉枯萎病大田生物防治,但难以开展遗传操作,探讨适合R31的遗传转化方法有利于推动R31的防病分子机理研究。根据R31在LB培养基中的生长曲线和生长状态,对适合原生质体制备和再生所需的培养时间和溶菌酶浓度开展优化,结果显示,R31在LB培养基中培养3~6 h时处于对数生长期,培养7 h后进入稳定期;显微镜观察显示,在对数生长前期,R31菌体以游离方式生长,培养5.5 h左右菌体开始相互连接,并逐渐形成网状结构,培养8 h后菌体形成三维网状结构。游离方式的菌体有利于原生质体制备和再生,兼顾原生质体制备所需的菌体浓度,优化出的最佳培养时间为4~4.5 h,此时最佳的溶菌酶浓度为3.5 mg/m L,原生质体的形成率达到98.45%,再生率达到50.18%,再生细胞占初始细胞的比例达到49.40%。     

枯草芽胞杆菌R31影响巴西蕉根系活性氧产生及对枯萎病的防治效果

研究枯草芽胞杆菌R31接种浓度对香蕉根系活性氧产生、R31自身根系定殖和枯萎病防治效果的影响。首先检测了不同浓度R31接种对巴西蕉根系Mn-SOD活性和过氧化氢含量的影响,并研究了过氧化氢对不同细胞浓度R31生物被膜形成的影响,然后利用R31-gfp观察了不同浓度R31接种在香蕉根表定殖的差异,最后利用大田试验验证了不同浓度R31可湿性粉剂的枯萎病防效。研究结果显示,1.0×10~6和1.0×10~7 cfu/mL R31菌体灌根使巴西蕉根系Mn-SOD活性分别在0.76~5.99和0.81~6.55 U/g显著波动,根系过氧化氢含量显著增加,而1.0×10~8 cfu/mL R31菌体接种的根系Mn-SOD活性在4~5 U/g波动,不激发根系过氧化氢爆发。80和120μmol/mL以上过氧化氢分别抑制1.0×10~5和1.0×10~6 cfu/mL R31在24 h内形成薄皮,但分别显著促进2种浓度R31在72 h形成薄皮。40~240μmol/mL过氧化氢对1.0×10~7和1.0×10~8 cfu/mL R31 24 h的薄皮形成无影响,但显著促进2种浓度R31 72 h的薄皮形成。1.0×10~6 cfu/mL R31-gfp接种巴西蕉后第5 d才可以观察到根表产生荧光,而1.0×10~7和1.0×10~8 cfu/mL R31-gfp接种处理在第3 d即可观察到根表产生明显荧光。利用R31可湿性粉剂进行田间试验,以2.0×10~6和2.0×10~7 cfu/mL2000 mL灌根处理新植巴西蕉,施用4次后,枯萎病防效分别为35.41%和72.96%。R31低浓度接种能够激发香蕉根系免疫反应和活性氧产生,并延缓低浓度R31在根表定殖,最终影响其对枯萎病的防效。     

隐孢子虫病的诊断与防治措施

隐孢子虫病可引起人与脊椎动物呕吐、腹泻、脱水等临床症状,没有物种特异性,不同阶段的脊椎动物均可被感染,但年龄越小,感染后发病率越高,威胁着人类及牲畜健康,同时也可造成较大的经济损失。目前对隐孢子虫引发的隐孢子虫病还没有有效的治疗方法。该文主要从隐孢子虫病原体的特征、流行病学、发病机制、临床症状、诊断方法及防治措施6个方面对隐孢子虫进行综述,以期为隐孢子虫引发的各种疾病的综合防治提供理论参考。