不同番茄品种对5种植物双生病毒的抗病性鉴定

 由粉虱传双生病毒引起的番茄曲叶病［1］在我国最初仅分布在海南、云南、广东和广西,自2006年上海市和浙江省先后在番茄上发现番茄黄化曲叶病毒（Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV）以来,该病害蔓延迅速,在多个省份的番茄上暴发成灾［2］。引起番茄曲叶病害的病原较复杂,在我国其主要病原为TYLCV、中国番木瓜曲叶病毒（Papaya leaf curl China virus, PaLCuCNV）、中国番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl China virus, TYLCCNV)、泰国番茄黄化曲叶病毒（Tomato yellow leaf curl Thailand virus, TYLCTHV）和台湾番茄曲叶病毒（Tomato leaf curl Taiwan virus, ToLCTWV）［2~5］,而浙江省的主要病原为TYLCV和ToLCTWV。选育抗病品种是防治番茄黄化曲叶病最有效的手段。了解番茄品种对不同双生病毒的抗性,对因地制宜布局抗病品种具有重要意义。浙杂502、浙粉701、浙粉702是浙江省大规模种植的番茄品种,为了解这些品种对上述5种病毒的抗性,本研究利用5种病毒的侵染性克隆,在人工接种条件下,综合评定分析这3个番茄品种的抗病指标。     

葡萄扇叶病毒杭州分离物 (GFLV-H) P38蛋白基因克隆及序列分析

为了证实GFLV-H P38蛋白的性质及其在寄主扩散中的作用,根据葡萄扇叶病毒(Grapevine fanleaf virus, GFLV)法国分离物F13 RNA2序列合成特异性引物,利用RT-PCR从GFLV-H基因组中扩增出P38蛋白基因的cDNA片段,并克隆到pGEM-T-easy vector上.序列分析表明该基因包含1044个核苷酸,编码347个氨基酸.序列比较发现GFLV-H P38蛋白基因与GFLV-F13对应基因核苷酸和氨基酸的同源性分别为90%和96%;与线虫传多面体病毒属中的南芥菜花叶病毒(Arabis mosaic virus, ArMV)和番茄环斑病毒(Tomato ringspot virus, TomRSV)对应基因氨基酸同源性分别为85%和38.6%,与烟草黑环病毒(Tabacco black ring virus, TBLV)、葡萄铬色花叶病毒(Grapevine chrome mosaic virus, GCMV)和树莓环斑病毒(Raspberry ringspot virus, RRSV) 的同源性均低于30%.     

BBTV单克隆抗体的制备及其检测应用

香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)是危害香蕉(Musa paradisiaca)生产的重要病毒.本研究旨在以制备的抗BBTV特异性单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)为核心建立检测BBTV的血清学方法,从而为该病毒的诊断和科学防控提供技术支撑.通过改进提纯方法获得了提纯的BBTV,以BBTV病毒粒子为抗原免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),经细胞筛选和克隆,获得1株分泌抗BBTV单克隆抗体的杂交瘤细胞22E3,并制备其单抗腹水.用间接酶联免疫吸附试验(indirect-enzyme-linked immunosorbent assay,in-ELISA)方法测定制备的单抗腹水效价达到10-7,抗体类型及亚类为IgG1,κ轻链.Western blot检测表明,该单抗与BBTV外壳蛋白亚基有特异性反应.利用制备的单抗建立了检测BBTV的斑点酶联免疫吸附试验(dot-ELISA).该方法检测感染BBTV香蕉植物组织粗提液呈特异性阳性反应,而和健康香蕉组织呈阴性反应,说明建立的dot-ELISA方法能特异性地检测香蕉植物组织中的BBTV.灵敏度分析表明,以22E3单抗为核心建立的dot-ELISA方法检测香蕉病组织的灵敏度达1∶640(W/V,g/mL).田间样品检测结果表明,建立的dot-ELISA方法能准确、可靠地用于香蕉中BBTV病毒的检测.BBTV单克隆抗体的制备及其dot-ELISA血清学检测方法的建立为我国香蕉上BBTV的诊断、无毒苗的生产及科学防控提供了物质和技术支撑.     

SrMV和SCMV侵染玉米的细胞超微病变比较研究

运用超薄切片电镜技术比较观察了高粱花叶病毒(SrMV)和甘蔗花叶病毒(SCMV)侵染玉米叶片细胞的超微结构变化,结果显示:线状SrMV和SCMV粒子分散或成束分布在感病细胞的细胞质内,同时在细胞质中产生大量柱状内含体.SrMV引起风轮体和卷筒体,属于Edwardson等划分的第Ⅰ型,一些内含体分布于细胞壁附近,有的直接与细胞壁胞间连丝相接.SCMV引起风轮体、卷筒体和片层聚集体,属于第Ⅲ型,一些成束的病毒粒子和内含体存在于筛管中.对两种病毒的细胞病理学效应作了比较,并对可能与病毒胞间运动相关的超微结构进行了讨论.     

侵染丝瓜的黄瓜黄叶病毒研究

１９９３年６月从温州市郊区丝瓜病株上获得一病毒分离物Ｌ－９３，人工摩擦接种５科２２种植物，Ｌ－９３能侵染５科１８种植物。Ｌ－９３在多种葫芦科植物上具有很强的侵染力。提纯病毒粒体为球形，直径约２８ｎｍ。在琼脂双扩散试验中，Ｌ－９３与ＣＭＶ抗血清具有密切的血清学关系。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得其衣壳蛋白亚基分子质量为１９０００ｕ，分析植物组织中ｄｓＲＮＡ，发现有４条ｄｓＲＮＡ条带，长度分别为含３．     

蚕豆萎蔫病毒RNA-2编码的多聚蛋白切割位点分析

 Broad bean wilt virus (BBWV) is the type species of the genus Fabavirus.     

柑橘病毒与类似病毒分子生物学和抗病毒基因工程研究进展

常见危害柑橘的病毒与类似病毒病有１０余种，我国已报道的有７种。综述了近年来有关柑橘衰退病、碎叶病、温州蜜柑萎缩病、环斑－鳞皮病、裂皮病、黄龙病和枯萎病病原性质和分子生物学研究方面的最新进展，总结了柑橘遗传转化的研究成果以及抗病毒基因工程对柑橘抗病育种的作用和意义。     

植物抗病毒基因工程研究进展

植物病毒是植物病害的重要病原。长期以来,植物病毒病控制主要靠抗病育种、防治媒介昆虫、组织脱毒及合理栽培管理等措施,这些方法所需的时间较长或成本较高,且效果不理想。近年来,病毒分子生物学知识的积累并结合近代植物基因工程技术又在控制植物病毒病这一重要领域里开辟了新的途径,有的已取得了令人瞩目的成就。     

湖南省番茄和牵牛花上双生病毒的分子鉴定

双生病毒是一类在全世界范围内广泛发生的单链环状DNA病毒。本文对从湖南采集到的6例(洋姜、番茄、萝卜、赛葵、甘薯、牵牛花)疑似双生病毒侵染的植物叶片进行了分子鉴定。利用滚环扩增技术(RCA)对样品DNA进行扩增,分别对其RCA产物进行酶切,并将酶切得到的片段测序后进行BLAST比对,结果显示番茄样品中的病毒分离物与番茄黄化曲叶病毒相似性最高(99%),牵牛花样品中的病毒分离物与甘薯卷叶病毒相似性最高(99%),证明这两个分离物是单组分DNA-A双生病毒。这是在湖南省首次发现并报道双生病毒的全核酸序列。