山羊转人乳铁蛋白基因成纤维细胞和乳腺上皮细胞单克隆的制备及扩大培养

[目的]为探索单个转基因阳性细胞快速扩大培养成为细胞克隆的技术体系。[方法]对转染人乳铁蛋白(Human lactoferrin,hLF)基因乳腺特异性表达载体pBLM-C1的单个山羊胎儿成纤维细胞(Fetal Fibroblasts,FF)和乳腺上皮细胞(Mammary Gland Epithelial,MGE)细胞进行克隆。在96孔板中,首先用3种浓度(V/V:0、50%和100%)的适应性条件培养基对单个转染细胞进行细胞单克隆的制备,进而把转染细胞单克隆与非转染细胞共培养进行扩大培养,neo基因被用于筛选基因,以PCR方法鉴定转染细胞基因组DNA。并对单克隆细胞进行染色体核型分析。[结果]与非适应性条件培养基相比,100%适应性条件培养基能够显著提高细胞单克隆存活率;与对照相比,转染细胞单克隆与非转染细胞共培养,显著提高了转染细胞单克隆扩大培养后的比率(FF:53.33%vs.10.00%;MGE:33.33%vs.6.670%),且明显缩短了扩大培养汇合时间(20～30 d);PCR鉴定结果表明,上述方法获得的克隆细胞整合有hLF目的基因;核型分析表明,大部分细胞克隆染色体正常。[结论]该研究可为分离转基因细胞、理想载体的插入及诊断提供一种可靠的方法,并能节省转基因动物生产的及费用时间。     

提土-全膜面覆土装置作业参数优化与试验

为进一步研究提土-全膜面覆土装置作业参数对其覆土性能及质量的影响,解析膜顶覆土过程与规律,建立了提土-覆土过程关键参数方程,确定了试验因素及其取值范围。以刮板升运带式提土器线速度、联合机前进速度和水平双向螺旋覆土装置转速为自变量,覆土合格率为响应值,进行二次旋转正交组合试验,构建各因素与覆土合格率之间的数学模型,并结合响应曲面对各因素交互作用进行分析,探知试验因素对覆土合格率影响的主次顺序为水平双向螺旋覆土装置转速、刮板升运带式提土器线速度和联合机前进速度,获得提土-全膜面覆土装置最优作业参数:水平双向螺旋覆土装置转速为432 r/min,刮板升运带式提土器线速度为1.56 m/s,联合机前进速度为0.50 m/s。田间验证试验表明,提土-全膜面覆土装置覆土合格率均值为99.6%,较优化前有显著提升;应用离散单元法进行提土-全膜面覆土装置在最优参数条件下的"提土-输土-覆土"动态作业过程模拟,仿真结果与田间试验验证工况基本一致,表明该装置作业参数的优化计算准确可靠。     

秋茬青梗小白菜品种（系）比较试验

以上海青、华冠2个品种为对照,对6个青梗小白菜新品种（系）进行比较,选出产量、品质、抗病性等综合性状优良的新品种（系）。试验结果表明,T5×T6和白叶C×四月慢22—5是综合性状优良的青梗小白菜新品种（系）,适合苏州及周边地区秋茬栽培,但T5×T6需注意防治霜霉病。     

2012年秋季菜心品比试验初报

针对太湖地区缺少菜心优良品种的现状,对引进或自主选育出的6个菜心新品种(系)进行了田间品种比较试验,结果初选出"油绿粗苔"、"油绿501"、"08Z144"3个菜心品种在产量、商品性等方面表现较好,具有一定的优势,可进入下一轮试验做进一步观察。     

鸭坦布苏病毒灭活油乳苗的制备及免疫效力测定

鸭坦布苏病毒(DTMUV)为新出现的病毒,主要引起鸭的产蛋量急剧下降,甚至绝产。为评价其灭活疫苗的免疫效力,本实验从产蛋下降综合征的病鸭中分离鉴定到一株DTMUV,经鸭胚增殖,测定其尿囊液中病毒含量为5×102.25ELD50/mL;采用该尿囊液按照常规方法制备灭活油乳苗。将10日龄雏鸭分成4组,每组20只,分别免疫0.2 mL,0.5 mL,0.8 mL疫苗,以及PBS对照组,并于免疫后28 d攻毒。通过间接ELISA法检测鸭血清中抗体水平,结果显示,在免疫后7 d～21 d内,其中0.5 mL免疫组抗体水平与对照组相比差异极显著(p<0.01);免疫21 d时,E玫瑰花环试验检测鸭血清中T淋巴细胞数量,结果 0.5 mL组玫瑰花环形成率为67.09±1.23%,极显著(p<0.01)于对照组(51.86±1.14%);攻毒保护试验结果显示,0.2 mL组免疫保护率为80%,0.5 mL和0.8 mL组疫苗保护率均为100%,而对照组雏鸭均表现为典型的DTMUV感染症状,其中3只死亡。实验结果表明,本研究制备的鸭坦布苏病灭活疫苗能够有效诱导抗体和细胞免疫反应,为进一步研究鸭坦布苏病疫苗提供了实验数据。     

鹅胚胎体外培养的研究

以蛋重为 (12 4 .90± 0 .91) g(A组 )、(130 .30± 0 .99)g(B组 )、(134.5 6± 1.0 1) g(C组 )的豁鹅蛋壳作为代用蛋壳 ,将第 1次换壳后的鹅胚转移至其中进行孵化 ,记录孵化第 3～ 4 .5天和第 6 ,15 ,31天的活胚数 ,同时分析代用蛋壳大小对孵化效果的影响。结果表明 :在整个孵化过程中 ,C组代用蛋壳优于B组和A组 ,尤其在孵化中期 (第 6～ 15天 ) ,A组与C组对照差异显著 (P <0 .0 5 )。结果表明 ,在鹅胚体外操作中 ,第 2次换壳所用的代用蛋壳的大小以大于或等于(134.5 6± 1.0 1) g为宜。     

草菇林地栽培技术

草菇经济林地栽培是当前发展草菇生产的有效途径。文章介绍了一整套适应天津地区合理利用经济林地栽培草菇的实用技术,可为农民提供可行的指导,并为天津市现代农业发展提供技术支撑,促进农业增效,农民增收。     

锌、铜对钼中毒绵羊免疫功能的影响

选择健康小尾寒羊20只,随机分为5组,每组4只,分别口服钼、铜和锌,Ⅰ组30 mg/(kg·d)钼,Ⅱ组30 mg/(kg·d)钼+15 mg/(kg·d)/铜、Ⅲ组30 mg/(kg·d)钼+15 mg/(kg·d)锌、Ⅳ组30 mg/(kg·d)钼+15 mg/(kg·d)铜+15 mg/(kg·d)锌、Ⅴ组单口服无离子水,试验期75 d.定期采血,测定血液T、B淋巴细胞百分率及其绝对值和血清α、γ球蛋白含量.结果表明,高剂量钼(钼≥30 mg/(kg·d))可引起绵羊T、B淋巴细胞百分率下降,造成免疫损伤.其中B淋巴细胞较敏感.30 mg/(kg·d)钼降低了血清γ球蛋白和α球蛋白含量.锌对钼中毒绵羊免疫功能有一定的保护作用,而铜的保护作用不明显;15 mg/(kg·d)锌和15 mg/(kg·d)铜协同对30 mg/(kg·d)钼所致绵羊的免疫损害有很好的保护效果.     

保护地番茄蚜虫发生规律初探

番茄病毒病的发生往往会引起大幅减产，直接影响菜农收益。蚜虫作为番茄病毒病的传媒昆虫，其间接传毒的危害更甚于直接刺吸危害，为此笔者进行了保地护番茄蚜虫发生消长规律的研究。