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依据马铃薯病毒PVS、PVX、PLRV、PVA的CP保守序列设计特异性引物,从马铃薯病叶组织中提取出病毒总RNA,进行cDNA合成和PCR扩增,得到了与预期片段长度一致的PCR特异扩增产物,建立了能够同步检测PVS、PVX、PLRV、PVA的RT-PCR多重检测体系。该方法对PVS、PVX、PLRV、PVA扩增出的靶带大小分别为435、625、222、300 bp,凝胶电泳易辨别区分。研究结果表明,该方法特异性好、灵敏度高、快速简便,为马铃薯病毒的高效检测提供了有效手段。 相似文献
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依据马铃薯X病毒、S病毒、A病毒及卷叶病毒的基因组RNA保守序列设计特异性引物对,从反转录反应中dNTPs浓度、退火温度、PCR反应中Mg2+浓度、循环条件4方面优化三重RT-PCR反应条件,可以同步扩增出上述4种病毒,分别得到620bp(PVX)、435 bp(PVS)、300 bp(PVA)、222 bp(PLRV)大小的扩增片段。结果表明,反转录反应中dNTPs浓度和PCR反应中Mg2+对整个反应的影响最大;其次是退火温度;循环条件对RT-PCR影响较小。优化的三重RT-PCR反应体系为马铃薯病毒的检测提供了一种快速、灵敏、简便的方法,对马铃薯病毒的早期检测和防治提供了有效手段。 相似文献
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