酶法提取云南萝芙木中阿吗碱的研究

研究3种纤维素酶法提取云南萝芙木中阿吗碱的最佳工艺。结果表明:酶解最适条件为:pH 5.0,酶用量5 mg/5g,时间2 h,温度50℃;酶解处理后的阿吗碱提取率比直接用甲醇提取提高了29.3%;说明酶解处理更有利于阿吗碱的提取。     

珙桐DiZF-CCCH1基因的克隆及表达分析

【目的】珙桐Davidia involucrata有性生殖能力弱是限制其自然更新的主要原因。为研究珙桐种子发育的分子机制,本课题组前期完成了珙桐种子转录组分析,筛选到1个编号为c37849.graph_c0的转录本,其在正常种子中高量表达,而在发育异常的种子中表达量很低,差异表达显著,因此将其作为研究目标。【方法】使用PCR克隆该转录本的全长序列,并利用在线分析工具对其编码氨基酸的序列特征、蛋白结构和系统进化等进行生物信息学分析预测,采用qRT-PCR检测目标基因在珙桐不同组织部位以及种子不同发育阶段中的表达情况。【结果】序列分析确定目标基因为一个编码CCCH型锌指蛋白转录因子的基因,将其命名为DiZF-CCCH1,该基因开放阅读框全长为711 bp,编码236个氨基酸,无内含子,相对分子量26.74 kDa,为不稳定蛋白,其氨基酸序列含有植物特有的RR-TZF结构域,与来源于甜橙Citrus sinensis的CCCH蛋白同源性最高。基因表达模式分析显示,DiZF-CCCH1在种子发育前期的表达量最高,后期表达量降低,在其他组织中仅有微量表达,推测其可能在种子发育过程中发挥重要作用。【结论】对珙桐DiZF-CCCH1基因进行了克隆与初步生物信息学分析,发现其编码的蛋白属于RR-TZF型锌指蛋白,且DiZF-CCCH1可能是珙桐种子发育过程中的重要调控基因,为进一步探索该基因在珙桐生殖发育过程中的功能奠定基础。     

林业院校生物工程专业多元化实验教学与创新型人才培养

为了培养生物工程专业高素质人才,近年来,我校加大资金投入力度,加强生物工程实验室建设。在不断整合优化实验资源的基础上改进教育教学方式,整合相关课程开设综合性实验,使学生能够自主完成课程实验；也可以根据自己的兴趣爱好参与科研项目,并且可以团队合作形式申请大学生创新性项目等开放性项目,这样的多元化实验教学模式不仅仅可以提高学生的专业实验热情,也能较好地激发了学生的创新潜能。     

绣球花花色相关基因HmF3H的克隆及其表达分析

花色是植物重要的观赏性状之一,而黄烷酮羟化酶是植物花色素物质积累的关键酶,对植物花色差异具有重要影响。本研究利用PCR技术从盛花期蓝色花绣球品种‘无尽夏’不孕花中克隆获得了Hm F3H基因的全长序列,该基因的ORF序列长度为1 095 bp,编码364个氨基酸,编码蛋白的理论分子量为41.08 k D,理论等电点为5.48,为亲水性蛋白,该蛋白属于PLNO2515超家族成员,具有2-酮戊二酸双加氧酶结构域。系统进化树分析表明,该蛋白与咖啡树和佛手瓜的亲缘关系最近。实时定量PCR分析表明,Hm F3H基因在绣球花不同组织器官中均有表达,红色绣球品种‘粉黛’盛花期不孕花比蓝色绣球品种‘无尽夏’盛花期不孕花中表达量高,说明Hm F3H基因对绣球花花色差异形成具有一定影响。本研究获得了绣球花Hm F3H基因序列及其表达情况,为探讨绣球花品种花色差异形成机制具有一定指导意义。     

抗鹅膏肽直链的固相合成分析

抗鹅膏肽直链由10个氨基酸组成.采用Fmoc固相合成法,以王氏树脂为固相载体,HBTU-HOBT为缩合试剂,50%哌啶的二氯甲烷溶液为脱保护试剂,50%醋酐的吡啶溶液为酰化试剂;配制三氟乙酸∶乙二硫醇∶水体积比为95.0∶2.5∶2.5,用其作为脱除试剂,将肽链从树脂上切割下来以后,用反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行分析,纯度为64.22%,质谱(MS)进行鉴定,分子量为1 165.结果表明:上述实验方法适合于抗鹅膏肽直链的合成.     

黑孢漆斑菌漆酶活性及培养条件的优化

在ABTS法检测漆酶酶活性的基础上对黑孢漆斑菌的生长条件进行摸索.采用生长曲线分析,正交多因素分析及单因素分析对初始酸碱度,培养时间,接种量,菌龄,摇床转速及光照条件进行研究.结果表明:最佳培养条件为初始pH 5.5,接种量7.5%,菌龄9天,摇床转速160 r/min,自然光照,培养9天.     

篦子三尖杉愈伤组织的诱导

为给今后大规模地细胞培养生产三尖杉"双酯碱"或利用愈伤组织进行悬浮培养提供理论与技术依据,以篦子三尖杉的嫩叶为外植体,应用正交设计法对其愈伤组织进行了诱导实验,结果表明:叶片用酒精浸泡30～40 s.经升汞溶液灭菌12 min,诱导效果最好;诱导叶片愈伤组织的最佳培养基配方为MS+2,4-D1.0 mg·L-1+NAA 2.0 mg·L-1+6-BA 0.5 mg·L-1+KT0.5 nag·L-1.还就叶片的取材部位和取材时间进行了比较实验.结果表明:叶片的叶基部分愈伤组织的诱导率较高;适宜的采样时间为8～10月.     

珙桐DiCCoAOMT1基因的克隆及生物信息学分析

种子休眠期长是导致珙桐自然繁殖力低下的重要原因之一。珙桐内果皮在发育后期快速木质化形成坚硬而致密的结构,可能是决定种子休眠时间的重要因素,而这一过程的调控机制尚不明确。本研究小组前期通过对珙桐内果皮发育的4个时期进行转录组测序,发现CCo AOMT基因家族与内果皮快速木质化关系密切。本研究从转录组中筛选到11个珙桐CCo AOMT基因家族基因,并利用生物信息学方法对筛选到的基因进行表达模式、序列特征、细胞定位和系统进化分析。分析显示,11个珙桐CCo AOMT基因根据表达模式可分为2种类型,筛选其中6个表达差异显著的CCo AOMT基因进一步分析其表达规律,最后确定其中差异表达最显著的Cluster-149.63013序列进行克隆及生物信息学分析。结果表明,该基因开放阅读框全长为744 bp,编码247个氨基酸,其氨基酸序列含有植物甲基化酶所共有的A、B、C基序及CCo AOMT蛋白特有的标志性序列D、E、F、G和H,其氨基酸序列与辣椒的CCo AOMT蛋白同源性最高,将其命名为Di CCo AOMT1。本研究克隆得到的Di CCo AOMT1基因可能是珙桐内果皮木质素快速积累的关键调控基因。     

木质层孔菌对不同染料脱色降解的研究

为探讨白腐真菌对偶氮类、三苯甲烷类、醌胺类等染料的脱色降解作用,用Fomes lignosus对偶氮类染料中的刚果红、醌亚胺类中的结晶紫和三苯甲烷类中的中性红的脱色作用进行了研究。结果表明:木质层孔菌对各种染料均有降解作用,而对醌亚胺类染料结晶紫的脱色率最高为55.27%(12 h),最佳添加时间为第4 d,最佳温度为35℃,脱色时间在32 h时脱色率达到75%以上。