基因特异性分子标记在植物育种中的研究进展

基因特异性分子标记是基于基因序列中功能性单核苷酸多态性(SNP)或插入和缺失(InDels)位点开发而成,具有选择效率高、共显性、与目标基因共分离、不受遗传背景影响等优点,且与生物表型性状高度相关,在生物表型性状的鉴定中更突显出其准确性和直接性,可以准确地跟踪、定位不同遗传背景下的目标等位基因,是农作物分子标记辅助选择育种中理想的分子标记类型。对基因特异性分子标记的原理、开发及在植物育种的应用进行论述,并探讨了基因特异性分子标记的发展趋势,以期为分子标记辅助育种提供参考依据。     

怀地黄SRAP分子标记优化体系的建立

为了建立适宜怀地黄的SRAP反应体系,以22个不同类型的怀地黄品种为材料,研究了PCR反应体系的主要成分对SRAP扩增结果的影响.对SRAP反应体系中的DNA模板浓度、TaqDNA聚合酶浓度、Mg2+浓度、引物浓度以及dNTP浓度进行了探索,确立的适合怀地黄SRAP反应的体系为:在25 μL的反应体系中,模板DNA20 ng、2.5 mmol·L-1 Mg2+、0.32 μmol·L-1的上下游引物、0.30 mmol·L-1的dNTPs以及2.5U Taq酶.并利用该反应体系对怀地黄22个不同品种进行了SRAP反应,发现不同品种间的DNA谱带多态性丰富,证实该体系稳定可靠,可以用于怀地黄的分子标记研究.     

决明原生质体的分离与培养研究

用决明（ＣａｓｉａｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａＬ．）子叶和下胚轴为材料,游离和培养原生质体。结果表明,１５日龄无菌苗的子叶和下胚轴比较适于游离原生质体,每１ｇ材料的原生质体产量高达１．６×１０４个;ＰｅｃｔｏｌｙａｓｅＹ－２３是分离原生质体所必需的;用含２,４－Ｄ０．４ｍｇ／Ｌ（以下单位同）,ＮＡＡ１．０与ＫＴ０．１的ＫＭ８Ｐ漂浮培养利于原生质体的分裂。培养４ｄ后,原生质体开始分裂,１５ｄ后其植板率约为１９．２％,３０ｄ形成了细胞团或小愈伤组织。增殖愈伤组织在分化培养基上培养,可分化出芽。芽在生根培养基上培养１４ｄ生根,从而再生决明小植株。     

花生种子的黄曲霉抗性物质成分和基因研究进展

为花生黄曲霉的抗性研究和建立快速有效的鉴定方法提供参考,对花生种子的白藜露醇、脂肪氧化酶、苯丙氨酸解氨酶、胰蛋白酶抑制剂、几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶等黄曲霉抗性物质、膜质过氧化反应、种皮超微结构和抗性成分及抗黄曲霉基因进行了综述,同时对花生抗黄曲霉成分和基因研究进行了展望.     

基于SRAP分析怀地黄种质的遗传多样性

为准确鉴定怀地黄药材,克服传统鉴定方法不易区分品种的不足,为其新品种选育和育种提供分子依据,采用相关序列扩增多态性(SRAP)分子标记对23种不同怀地黄种质资源进行遗传多样性分析。结果表明:1)有13对引物全部扩增出多态性条带,多态性引物比率达91.71%,共获得310个多态性位点,平均每对引物产生23.8个多态性位点。Jaccard遗传相似系数在0.335～0.703。2)将23个品种划分为4个类群。3个北京系列和野生1号、9104、9302、串地龙、金状元、85-5、武陟1号、农家、小黑英聚为一类,野生2号独自为一类,武陟系列中除武陟1号外其余8个武陟品种和生津1号聚为一类,金皇后单独为一类。3)主成分分析结果与聚类结果一致。     

怀地黄基因片段及其中转座酶基因的克隆与序列分析

根据已知裂叶牵牛花PNZIP启动子碱基序列的相关信息设计引物,采用PCR方法,从怀地黄基因组中扩增出5个基因片段,回收和克隆出其中一个1 096bp的基因片段。经过NCBI对比分析,发现它是一个类似转座子的相关蛋白基因序列,含有一个完整的开放阅读框,大小为450bp,编码由150个氨基酸组成的转座酶。然后,基于该开放阅读框的碱基序列,设计另一对引物,用PCR方法,从中扩增出该完整开放阅读框的序列片段。     

根癌农杆菌介导油菜CBF1基因转化拟南芥

[目的]为油菜CBF1基因应用于作物抗逆遗传改良提供理论依据。[方法]采用根癌农杆菌介导法将油菜CBF1基因转入拟南芥,筛选抗性转基因拟南芥植株,进行PCR检测和GUS染色。[结果]与不抗潮霉素的野生型拟南芥幼苗相比,对潮霉素具有抗性的转基因拟南芥幼苗的叶片比较大,根特别长。PCR检测表明38株抗性拟南芥植株中有29株能扩增出与目的基因大小一致的条带,阳性率为76.3%,而野生型拟南芥植株没有扩增出相应条带。阳性PCR扩增产物的测序结果表明油菜CBF1基因已经转入到拟南芥。GUS染色表明有22株转基因拟南芥植株呈现阳性。[结论]油菜CBF1基因可以整合到拟南芥基因组并能稳定表达。     

冷藏酱鸭中乳酸菌的分离鉴定及生物学特性研究

从冷藏的酱鸭中分离筛选乳酸菌,对其进行生理生化特性研究和分子学鉴定。结果表明,从冷藏酱鸭中筛选到2株优良乳酸菌,分别命名为J1、J2。结合细菌形态学、生理生化特性和16S r DNA序列同源性以及系统进化树分析表明J1、J2为副干酪乳杆菌亚种(Lactobacillus paracasei subsp.),具有比较好的发酵产酸的能力,并且对大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphy lococcus aureus)具有很强的抑制作用,能够耐受极端的p H环境。     

发根农杆菌介导的怀地黄遗传转化研究

利用发根农杆菌转化怀地黄组培苗子叶、叶柄和茎段,建立了有效的毛状根培养及其植株再生体系。毛状根可直接从受伤的外植体产生,能在无外源激素的1/2MS固体和液体培养基上自主生长,表现出典型的发根特征。毛状根在附加0.2mg/LKT和3.0mg/L6-BA的1/2MS培养基上能100%形成愈伤组织,51.49%分化出芽;分化芽在1/2MS培养基上100%生根,形成具有矮化、节间短和根系发达等特征的转化再生植株且移栽后生长旺盛。rolB基因PCR和冠瘿碱纸电泳检测证明,农杆菌Ri质粒上的T-DNA整合到怀地黄基因组中并表达,获得转基因怀地黄。