鸭疫里默杆菌LAMP-LFD快速检测方法的建立与初步应用

根据鸭疫里默杆菌(Riemerella anatipestfer,RA)ompA基因设计4条环介导等温扩增(LAMP)特异性引物和1条带有异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)标记的DNA探针，利用横向流动试纸条(LFD)检测扩增产物。通过对反应条件包括温度、时间、内、外引物浓度比、Bst DNA 2.0聚合酶浓度、dNTPs浓度及Mg²⁺浓度等优化后，建立了RA的LAMP-LFD检测方法。结果显示：在64℃下运用LAMP扩增核酸到结果判读只需33 min; LAMP-LFD可特异性检测鸭疫里默杆菌，巴氏杆菌核酸、大肠杆菌核酸、沙门菌核酸、葡萄球菌核酸、鸭瘟病毒均未检测出；LAMP-LFD对pMD19-T-ompA最低检测浓度为1.83×10⁰ copies/μL,其敏感度是PCR的1 000倍。利用PCR和LAMP-LFD检测22份疑似RA临床样本，两者检出符合率为100%。研究建立的LAMP-LFD检测方法能快速、特异地检测RA,可作为早期诊断和检测RA的有效手段。