果梅基因组DNA提取方法的比较及ISSR分析

以果梅品种鸳鸯梅、皇后梅和肖山选的幼嫩叶片为试材,提取果梅的DNA.针对果梅组织细胞体内含有较多的酚类、糖类及萜类等次生代谢物质的特点,采用传统的CTAB法、改良的CTAB法和改良的SDS法提取果梅基因组DNA,并比较其提取效果.结果表明:改良的CTAB法可获得高质量、高得率的基因组DNA,OD260/280比值在1.80左右.通过基因组DlNA-ISSR分析,完全满足试验要求.并进一步对改良的CTAB法的关键步骤作出具体的分析讨论.     

胡萝卜雄性不育系和保持系生理生化特性的比较分析

采用ELISA和分光光度法,测定了新黑田五寸胡萝卜雄性不育系及其保持系不同发育时期花蕾和叶片中IAA、GA3、ABA、Z+ZR、蛋白质、游离脯氨酸、MDA含量以及POD、CAT的活性,讨论分析了生理生化指标与胡萝卜雄性不育的关系。结果表明:花蕾中蛋白质含量不育系明显亏缺,中花蕾、大花蕾和叶片中游离脯氨酸含量不育系显著低于保持系;花蕾中POD、CAT活性和MDA含量不育系高于保持系;花蕾中IAA和ABA积累,Z+ZR和GA3亏缺是胡萝卜雄性不育的特征。中花蕾、大花蕾中IAA/GA3、IAA/ABA、IAA/(Z+ZR)、GA3/ABA、(Z+ZR)/ABA、(Z+ZR)/GA36个内源激素比值均表现为不育系高于保持系。     

饲粮蛋白质水平降低对成年大鼠生长性能、氮平衡和骨骼肌蛋白质周转的影响

本试验旨在研究饲粮蛋白质水平降低对成年大鼠生长性能、氮平衡和骨骼肌蛋白质周转的影响。试验选取35只初始体重为(238.6±2.3) g的成年SD雄性大鼠,根据体重相近原则分为5组,每组7个重复,每个重复1只大鼠。5组大鼠分别饲喂含有20%(20%C,此为AIN-93G标准饲粮)、15%(15%C)、10%(10%C)、5%(5%C)和0酪蛋白(0C)的5种试验饲粮,并根据AIN-93G推荐量补充各种必需氨基酸。试验期12 d,并在试验第6～11天收集大鼠粪尿以测定氮平衡。在试验第12天早晨对大鼠空腹称重,并一次性腹腔注射L-苯丙氨酸(注射剂量为1.50μmol/g BW,其中含有0.60μmol/g BW的L-[ring-2H5]苯丙氨酸),腹腔注射30 min后眼眶静脉采血,然后将大鼠处死,取后肢的腓肠肌和比目鱼肌。结果显示:1)当酪蛋白含量从20%降至15%并添加各种合成氨基酸后,成年大鼠的平均日增重上升了42.2%(P <0.05),但进一步降低酪蛋白含量并添加各种合成氨基酸后,大鼠的生长受到抑制,体重呈线性下降(P<0.05)。2)大鼠的干物质采食量在酪蛋白含量低于10%时显著下降(P <0. 05),氮摄入量、氮排出量、氮沉积量以及氮沉积率也显著下降(P<0.05)。3)在腓肠肌中,与20%C组相比,10%C组、5%C组和0C组肌肉蛋白质合成速度分别下降了18.25%、33.65%和40.68%(P<0.05),蛋白质降解速度分别提高了17.54%、29.82%和35.09%(P<0.05);在比目鱼肌中,15%C组、10%C组、5%C组和0C组大鼠蛋白质合成速度均比20%C组显著下降(P<0.05),分别下降了9.00%、11.55%、29.15%和33.99%,5%C组和0C组蛋白质降解速度比20%C组显著增加(P<0.05),分别升高了27.66%和57.45%。由此可见,在按标准需要量逐级补充所有必需氨基酸的条件下,当成年大鼠饲粮酪蛋白含量低于10%时,大鼠生长受到抑制,体重下降,氮沉积量减少,骨骼肌蛋白质合成减少、降解增加。因此,在以酪蛋白为唯一氮源的情况下,成年大鼠饲粮中酪蛋白含量降低至15%较适宜。     

复合酶制剂对断奶仔猪生长性能、营养物质表观消化率、血清抗氧化指标及内源消化酶活性的影响

本试验旨在评价复合酶制剂对断奶仔猪生长性能、营养物质表观消化率、血清抗氧化指标和内源消化酶活性的影响。选用84头初始体重为(7.22±0.22)kg的28日龄杜×长×大断奶仔猪,按完全随机区组设计分为2个组,每组7个重复,每个重复6头猪(公母各占1/2)。对照组仔猪饲喂玉米-豆粕型基础饲粮,复合酶组仔猪饲喂在基础饲粮中添加1 000 mg/kg复合酶制剂(包含4 000 U/g纤维素酶、1 500 U/gα-淀粉酶、150 U/gβ-葡聚糖酶和3 000 U/g中性蛋白酶)的试验饲粮。饲养期为35 d,分为前期(1~14 d)和后期(15~35 d)2个阶段。结果显示:与对照组相比,饲粮中添加复合酶制剂显著降低断奶仔猪全期的料重比(F/G)(P<0.05),并有降低前期(P=0.09)及后期F/G(P=0.05)的趋势;复合酶组断奶仔猪前期及后期的中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)和粗脂肪(EE)表观消化率显著或极显著提高(P<0.05或P<0.01),前期有机物(OM)(P=0.07)、粗蛋白质(CP)(P=0.09)和总能(GE)的表观消化率(P=0.08)以及后期CP(P=0.07)和GE的表观消化率(P=0.09)有提高的趋势。与对照组相比,在试验第14天,饲粮中添加复合酶制剂显著或极显著提高血清总抗氧化能力(T-AOC)和总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性(P<0.05或P<0.01),显著降低血清丙二醛(MDA)含量(P<0.05),趋于增加血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性(P=0.06);在试验第35天,饲粮中添加复合酶制剂显著提高血清GSH-Px活性(P<0.05),对血清其余抗氧化指标无显著影响(P>0.05)。此外,与对照组相比,饲粮中添加复合酶制剂显著增强了空肠和回肠黏膜蔗糖酶以及回肠黏膜乳糖酶和胰脏胰脂肪酶活性(P<0.05),趋于增加空肠黏膜麦芽糖酶活性(P=0.07)。综上所述,饲粮中添加1 000 mg/kg复合酶制剂能通过提高营养物质的消化率和内源消化酶活性以及增强血清抗氧化能力来改善断奶仔猪机体健康水平和生长性能。     

适用于制备对虾发酵饲料的益生芽孢杆菌复配组合的筛选和评价

为克服芽孢杆菌单株菌株在水产动物发酵饲料应用上的局限性和优化对虾颗粒饲料发酵条件,本试验通过对优选芽孢杆菌菌株进行配伍组合,使用福林酚法、3,5-二硝基水杨酸法和DNS法分别进行蛋白酶、淀粉酶以及纤维素酶活性的定量测定,将选出的酶活性较高的菌株,通过16S rDNA序列信息鉴定定种,并将各菌株进行配伍,以3种酶活性为指标优选最优组合。制备发酵对虾饲料,以酶活性为指标优化加水量、接种量、颗粒大小以及通气量。结果表明:在9种芽孢杆菌组合中,蛋白酶活性最高的组合为8-Z,酶活性为(28.58±0.34)U/mL、淀粉酶活性最高的组合为3-Z,酶活性为(5.58±1.10)U/mL、纤维素酶活最高的组合为3-Z,酶活性为(34.53±7.41)U/mL。菌株组合8-Z(包含解淀粉芽孢杆菌1-D、枯草芽孢杆菌3-D和枯草芽孢杆菌9-D)制备对虾发酵饲料的适宜参数为:加水量1 mL/g,接种量0.5×107～1.5×107 cfu/g,充气量20 mL/g,发酵时间24 h,在此条件下发酵后活菌数为6.48×108 cfu/g。     

中间偃麦草第6同源群特异STS标记开发

中间偃麦草(2n=6x=42,JJJ^sJ^sStSt)是小麦遗传改良的重要野生资源之一,因其基因组尚未完成测序,造成目前已报道的特异分子标记数量较少,不能满足小麦生产和研究领域内对杂交材料中外源片段或外源基因鉴定的需求。本研究利用中间偃麦草GBS芯片探针数据组装了5877409条Contig序列,筛选后获得5452条与小麦基因组相似性低于80%的、具有染色体位置信息的非冗余序列,据此开发2019个序列标签位点(sequence-tagged site,STS)分子标记,在中间偃麦草第1至第7同源群中的分布依次为250、215、323、253、323、253和402;利用5株中间偃麦草和5份小麦农家种的DNA从253个第6同源群(G6)标记中进一步筛选出160个中间偃麦草特异标记,其中"+/-"型特异标记共有53个,分布在G6-Chr1(32个)、G6-Chr2(13个)和G6-Chr3(8个)染色体上;接着利用拟鹅观草(2n=2x=14,StSt)、百萨偃麦草(2n=2x=14,J^bJ^b)、二倍体长穗偃麦草(2n=2x=14,J^eJ^e)以及中国春-二倍体长穗偃麦草6J^e代换系推断G6-Chr2为6St染色体;最后利用6St上开发的13个"+/-"型标记,从分子水平对小麦-偃麦草代换系F881(6St/6D)中的外源6St染色体进行了验证。研究结果将为中间偃麦草染色体或染色体片段的鉴定提供较为方便和经济的检测手段。     

牛副流感病毒3型感染MDBK细胞后影响天然免疫基因表达的筛选与验证

为筛选与验证牛副流感病毒3型(BPIV3)感染MDBK细胞后天然免疫相关基因的差异表达变化,通过细胞病变观察、Western blot验证病毒HN蛋白表达,以及病毒增殖复制动力学曲线,确定病毒复制情况。利用转录组测序技术,对1MOI基因C型SD2014BPIV3毒株感染MDBK细胞的12h对照组与感染组的差异表达基因进行筛选,最后收集BPIV3感染MDBK不同时间点细胞样本,应用RT-qPCR在转录水平验证了天然免疫相关显著差异基因的表达变化情况。结果表明,BPIV3毒株在MDBK细胞上有较强的复制能力,从病毒感染12h的转录组数据中获得了1 401个显著差异基因,经过筛选获得了9个与天然免疫相关的基因,最后在转录水平验证了MDA5、IRF7、STAT1、ISG65、TRIM25等9个与天然免疫相关基因的表达变化,并验证了其上、下游通路或同一家族基因的表达变化。结果表明,筛选与验证的BPIV3感染MDBK细胞差异表达天然免疫相关基因,为宿主细胞影响病毒复制的分子机制研究奠定了基础。     

秩和检验在鸟类栖息地选择分析中的运用

目前，t检验（t-test）在鸟类栖息地选择分析中被广泛运用于两个独立样本平均数的比较，但它对数据的分布形式要求较严格。本文介绍了一种非参数检验方法－秩和检验（Mann-Whitney U-tests），并通过实例分析比较了t检验与秩和检验。结果表明，在样本数据量较大量， 秩和检验与t检验具有同等的检验精确性，与t检验相比，秩和检验操作更为简便。     

Renal function and pathological changes in Niemann-Pick disease type C1 mice

AIM: To investigate the renal function and pathological changes in Npc1 mutant (Npc1^-/-) mice. METHODS: Different genotypes of Niemann-Pick disease type C1 (Npc1) mice were identified by PCR. Subsequently, the renal function of Npc1^-/- and Npc1^+/+ mice at postnatal day 60 (P60) was evaluated by measuring the activity and content of important indicators in the serum including ALT, AST, LDH, urea, UA and Cr. Furthermore, β-galactosidase staining and Masson staining were performed to examine the aging and fibrosis of the renal tissues, respectively. RESULTS: Compared with the Npc1^+/+ mice, the body weight and kidney weight had a significant reduction (P<0.01) in the Npc1^-/- mice. The results of hepatic and renal functions showed that the activities of ALT, AST and LDH, and contents of urea, UA and Cr had marked increases (P<0.05) in the Npc1^-/-mice. Moreover, the results of senescence-associated β-galactosidase staining in the renal tissues demonstrated accelerated aging in the Npc1^-/- mice (P<0.01), and these results were confirmed by Masson staining, which clearly showed the formation of collagen fibers (P<0.01).CONCLUSION: Mutation of the Npc1 gene results in abnormal lipid metabolism, which accelerates kidney senescence by promoting fibrosis in the renal tissue and subsequently causes reduction in renal function.     

Prokaryotic Expression and Development of an Indirect ELISA Detection Method of Porcine Transmissible Gastroenteritis Virus N Protein

In the study,the recombinant expression plasmid pET28a-TGEV-N was constructed,and expression and purification of the TGEV N protein was completed.Through SDS-PAGE and Western blotting analysis,the N protein could be identified by transmissible gastroenteritis virus (TGEV) positive serum.Using the TGEV N protein as diagnosis antigen,we established an indirect ELISA method for detecting TGEV serum antibodies.The coefficients of variation of intro-batch and inter-batch duplicability test were less than 5%.The specificity was 100%,and the rate of false positive and the false negative rate were 0 and 5%,respectively.No cross reactions with seven porcine diseases positive serum were detected.Using this method,the clinical serum samples were detected.The results showed 100% coincidence rate compared with neutralization test.The method could detect TGEV antibody quickly and effectively,and had good repeatability and specificity,which laid the foundation for the development of standardized diagnostic kits.