河南省犊牛腹泻主要病原调查研究

[目的]为了解河南省犊牛腹泻主要病原流行情况和腹泻病因,有效防控犊牛腹泻,加快养牛业健康发展。[方法]用ELISA方法对从河南省12个地区采集1～6月龄有腹泻临床症状和无腹泻临床症状犊牛粪便样品187份,血液样品305份进行检测。[结果]在305份血液样品中,共检测到病毒性腹泻病毒(BVDV)阳性血样17份;副结核分支杆菌阳性血样13份。187份粪便样品中,检测到微小隐孢子虫阳性样品47份;轮状病毒阳性样品3份;大肠杆菌K99⁺阳性样品8份;冠状病毒阳性样品5份。[结论]发现犊牛腹泻主要是由病原感染引起的,其中微小隐孢子虫的感染率为较高,同时以单一病原感染为主。     

四环素阻遏-蛋白与热激因子融合转录激活子的构建

为构建一新型低毒且受四环素负调控的基因表达调控系统,克隆了大肠杆菌XL1-BLUE四环素阻遏蛋白基因TetR和拟南芥热激因子基因Athsf1a缺失片段AtHSFC157,将两基因融合获得TetR:AtHSFC157融合片段作为四环素调控系统转录激活子,将其克隆入表达载体pXNSC2020中,成功构建了四环素负调控系统p35SC157-Om35Sgus。采用冻融法将其导入根癌农杆菌EHA105中,并通过农杆菌介导烟草叶片瞬间表达,以组织化学法检测GUS基因表达活性;结果在不加四环素处理条件下组织化学法检测到很强的GUS活性,而在含有1mg/L四环素的培养基中培养却没有检测到GUS活性;结论表明该技术所构建的新型四环素调控系统具有典型的受四环素负调控功能。     

两种荧光定量PCR方法检测猪瘟病毒的比较及应用

根据猪瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）5端非编码区保守区域,设计猪瘟病毒特异性的引物和探针,建立了基于SYBR Green和TaqMan探针的两种荧光定量PCR检测方法。灵敏性和特异性试验结果表明,两种方法能够特异性地检测出不同型的猪瘟病毒,而对同属的牛病毒性腹泻病病毒以及其它一些主要猪病病原检测结果均为阴性。两种方法对猪瘟病毒C株的检测下限均为101TCID50,均高于常规的套式PCR。用携带该基因片段的重组质粒为模板进行检测,SYBR Green方法的检测下限为3×100copies,比TaqMan探针方法更加灵敏（3×101copies）。应用建立的SYBR Green方法对2009年采集于浙江地区不同猪场的20份病猪样品进行CSFV检测,有8份样品为阳性,与套式PCR方法检测结果一致。进一步应用SYBR Green方法对不同感染阶段细胞内病毒RNA复制水平进行检测,与病毒滴度的结果基本一致。因此,本研究建立的SYBRGreen荧光定量PCR检测方法能够应用于组织和培养细胞中猪瘟病毒的检测。     

安吉县新型农技推广体系建设工作实践及探索

安吉县针对基层农技推广体系的现状,近年来积极探索农技推广体系建设,通过建立首席农技推广专家、农技指导员和责任农技员的新型推广组织体系,以及采取政策扶持、农技推广创新、考核管理等措施,虽取得了一定成效,但仍然存在农技推广队伍老化、精力不足、民营经济组织欠规范等诸多问题,迫切需要在人员的合理配备、完善三级推广体系、强化考核、信息网络建设等方面采取有效措施加以解决,从而加强和完善农技推广体系建设,促进农村经济发展。     

四环素阻遏-蛋白与热激因子融合转录激活子的构建

为构建一新型低毒且受四环素负调控的基因表达调控系统,克隆了大肠杆菌XL1-BLUE四环素阻遏蛋白基因TetR和拟南芥热激因子基因Athsf1a缺失片段AtHSFC157,将两基因融合获得TetR:AtHSFC157融合片段作为四环素调控系统转录激活子,将其克隆入表达载体pXNSC2020中,成功构建了四环素负调控系统p35SC157-Om35Sgus。采用冻融法将其导入根癌农杆菌EHA105中,并通过农杆菌介导烟草叶片瞬间表达,以组织化学法检测GUS基因表达活性;结果在不加四环素处理条件下组织化学法检测到很强的GUS活性,而在含有1mg/L四环素的培养基中培养却没有检测到GUS活性;结论表明该技术所构建的新型四环素调控系统具有典型的受四环素负调控功能。     

AtUGAE4基因反义表达载体构建及对烟草（N.tabaeum L．）的转化

本研究从拟南芥(Arabidopsis thaliana)gDNA中克隆了AtUGAE4基因的家族保守序列片段,反向连接在AtHSP70热激启动子和NOS终止子之间,构成含有该基因反义表达盒的表达载体pV-70brUGAE4,并经根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导,成功导入烟草基因组.这为探讨抑制UGAE家族基因表达对植物果胶生物合成和对离体培养细胞的细胞粘连性的影响奠定了基础.     

脂多糖对牛乳腺上皮细胞自噬和凋亡的影响

为探究脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)对牛乳腺上皮细胞(MAC-T)自噬和凋亡的影响，以MAC-T细胞为试验对象，用CCK-8和乳酸脱氢酶(LDH)法检测不同浓度LPS(100、150、200、250μg/mL),检测细胞的存活率和损伤，从上述分组中挑选浓度为0(对照)、50、100、200μg/mL的LPS建立试验组，Hoechst33342检测细胞核形态，qPCR法检测MAC-T细胞中自噬和凋亡基因(LC3B、p62、BAX、BCL-2、ATG5、ATG7、Beclin-1、caspase-3)mRNA的表达量，Western blot检测MAC-T细胞中自噬和凋亡(LC3B、p62、BAX、BCL-2、ATG5、ATG7、Beclin-1、caspase-3)相关蛋白表达。结果显示，MAC-T细胞的活力会随着LPS的浓度和时间的推移下降，细胞上清中的LDH随着LPS浓度上升而增加，Hoechst33342染色后可以发现细胞核形态出现异型性，染色质碎裂、固缩。qPCR和Western blot检测结果显示LPS在50～100μg/mL浓度下可引起MAC-T细...