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[目的]为快速地鉴别鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)和禽腺病毒血清4型(FAdV-4)3种病毒,建立一种特异强、敏感高、重复性好的三重PCR检测方法.[方法]根据Genbank登录的MDPV、GPV和FAdV-4的基因序列,设计3对特异性引物,以提取的核酸为模板,进行PCR特异性、敏感性和重复性试验.[结果]采用所建立的方法能够扩增出GPV、MDPV和FAdV-4特异性片段,且不能检出鸭黄病毒(DFV)、鸭I型肝炎病毒(DVH-Ⅰ)和禽呼肠孤病毒(ARV);GPV、MDPV和FAdV-4核酸模板的最低检测量分别为20、2、2 pg;对8份阳性临床病料进行检测,可见MDPV、GPV和FAdV-4的检出率均为100%.[结论]建立的三重PCR检测方法能够对MDPV、GPV和FAdV-4这3种病毒进行快速、准确的诊断. 相似文献
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利用SPF鸡胚培养法,自安徽两个不同鸡场分离到2株传染性法氏囊病病毒(IBDV),分别命名为AH01和AH002.为了解其致病特性,进行了鸡胚半数致死量(ELD50)测定、动物回归实验、VP2基因片段的扩增与分析.结果显示,AH01和AH02第一代尿囊膜悬液病毒的ELD50值分别为104.7/0.2 mL和105.3/0.2 mL,人工感染致死率分别为60%和73.3%;两分离株间的核苷酸同源性为97.8%,与国内外参考超强毒株的核苷酸同源性为96.0%~97.2%和96.7%~98.6%,提示其VP2高变区序列符合IBDV超强毒株特征. 相似文献
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兽药单克隆抗体研究进展 总被引:7,自引:1,他引:6
兽药大多属于小分子物质(半抗原),没有免疫原性,必须与载体交联成人工合成抗原(完全抗原)才能获得免疫原性,用人工合成的抗原来免疫动物制备兽药单克隆抗体。对兽药单克隆抗体的研究是随着兽药残留检测技术发展而开始的,人们已经在制备兽药单克隆抗体所需技术如兽药人工抗原合成的方法、选择合成兽药人工抗原的所需载体、对兽药结构的改造、免疫动物的注射方式、免疫程序、杂交瘤细胞的筛选及培养等方面进行一些研究,并成功地制备出十几种兽药单克隆抗体,且大多已应用于兽药免疫测定法(IAs)。目前仅有一种兽药单克隆抗体已应用于兽药免疫亲和色谱(IAC)。 相似文献
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氟喹诺酮类药物的多残留酶免疫分析研究 总被引:2,自引:2,他引:2
以制备的多抗血清为基础,建立了氧氟沙星(OFL)、二氟沙星(DIF)和诺氟沙星(NOR)的多残留间接竞争酶免疫吸附测定法(Ci ELISA法)。OFL、 DIF和NOR的标准曲线的线性回归方程分别为y=-0.1984x+0.9687 (r=0.9885)、y=-0.1738x+0.9150 (r=0.9985)、y=-0.2004x+0.9572(r=0.9954);中值(IC50)分别为231.57、245.32 、186.14 ng/ml ;最低检测限(LOD)分别为1.62、1.86、1.07 ng/ml;标准曲线在2~10000 ng/ml之间均有良好的线性关系(r≥0.9885)。方法的批内CV≤5.44%,批间CV≤12.45%。当OFL、DIF或NOR以浓度15~10000 ng/ml在牛奶中添加时,药物能较好地被回收,回收率均在71.70%~94.53%之间。 相似文献
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HN毒标为从我省某鸡场患有呼吸道症状和腺胃病变的病鸡只以一的株病毒,在鸡胚中能稳定传代并且有规律性死亡和典型胚胎病变特征。HN毒株对热、乙醚和氯仿敏感,耐酸(PH3.0)、耐碱(PH11.0),能低抗1%胰蛋白酶,能在鸡胚中干扰鸡新城疫病毒La Sota株的增殖。试验结果表明,HN毒株的理化生支气管炎病毒相会。 相似文献
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为进一步研究主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(major histocompatibility complex, MHCⅠ)的作用机制,提高其抗原呈递的效率,获得生物活性较好的鸡MHCⅠ分子二聚体,采用4个不同长度的连接肽G4S、(G4S)2、(G4S)3和(G4S)4,通过基因重组技术将MHCⅠα 和β 2m链基因共价连接,随后插入带有绿色荧光标签蛋白的真核表达载体,成功构建了4个重组质粒pEGFP-MHCⅠβ 2m-α 。真核细胞表达后,荧光显微镜观察可见,各重组MHCⅠ二聚体分子均主要分布于真核细胞的内膜系统。此外,Western Blot检测均可见蛋白大小约80.0 kD左右的特异反应带,表达蛋白与鸡MHCⅠ类分子的相应抗体可发生特异性结合反应。研究结果表明各连接肽的重组质粒pEGFP-MHCⅠβ 2m-α 均能够在真核细胞中顺利表达,且融合蛋白具有良好的免疫学活性。 相似文献