鸭维甲酸诱导蛋白Ⅰ基因原核表达和单克隆抗体的制备及鉴定

本试验旨在制备针对鸭维甲酸诱导蛋白Ⅰ（RIG-Ⅰ）全长蛋白的单克隆抗体。从鸭脾脏cDNA中扩增鸭RIG-Ⅰ基因N端长度均为900 bp的a（1-900 bp）和b（751-1650 bp）2段基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-30a中;重组质粒转化BL21感受态细胞后,经IPTG诱导表达,将获得的目的蛋白免疫BALB/c小鼠,将其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,并进行间接ELISA检测。结果显示,筛选出17株与分段表达的鸭RIG-Ⅰ蛋白有良好反应性的杂交瘤细胞株,测定单克隆抗体上清效价均为1：512;间接免疫荧光（IFA）与Western blotting分析结果显示,10H7C3和2A10A2 2株单克隆抗体与原核表达的鸭RIG-Ⅰ全长蛋白有良好的反应性。本研究制备了特异性鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体,为进一步研究RIG-Ⅰ基因的功能奠定了基础。     

H5N1亚型禽流感病毒感染海兰白鸡模型的建立

为建立H5N1亚型禽流感病毒感染海兰白鸡模型,本研究选取1株鹅源H5N1高致病性禽流感病毒A/goose/guangdong/1/96(H5N1)(简称GD1/96),测定其对4周龄海兰白鸡的半数致死量.感染模型试验中,将30只4周龄海兰白鸡随机分成3组,每组10只,5只直接感染,5只同居,试验组设置一个重复,将病毒液稀释至10^4.5EID₅₀,滴鼻、点眼各0.1 mL,对照组接种PBS,感染后24 h放入同居鸡;感染后连续观察14 d,记录死亡时间,每天采集咽喉拭子和泄殖腔拭子;感染组和同居组第3、5 天各剖解3只鸡,采集气管、肺脏、脑、脾脏、肾脏和十二指肠,进行病毒分离;qRT-PCR法分析感染组和同居组第3、5 天鸡肺组织中IFN-α和TNF-α的相对表达量.结果显示,GD1/96株的鸡胚半数感染量(EID₅₀)为10^-8.167/0.1 mL,对4周龄海兰白鸡的半数致死量为10^4.5 EID₅₀.感染模型试验结果显示,以10^4.5EID₅₀的攻毒剂量感染海兰白鸡,感染组鸡在感染后8 d全部死亡;在感染和同居3 d后,各组鸡的咽喉拭子和泄殖腔拭子均可检测到病毒;感染和同居后第3、5 天,各组鸡的6种组织中均可分离到高滴度的病毒;IFN-α和TNF-α在感染组和同居组的鸡肺脏组织中的表达量均显著增加(P <0.05).本试验建立了海兰白鸡的H5N1亚型禽流感病毒感染模型,为H5N1亚型禽流感病毒的致病机理及表达抗流感基因转基因鸡的研究奠定了基础.     

侵染野茼蒿引起黄脉症状的联体病毒的分子鉴定*

 采自云南元江的野茼蒿表现为明显的叶脉黄化症状,从中检测到的病毒分离物分别命名为YYJ1,YYJ2,YYJ3。利用已经报道的联体病毒通用引物PA/PB对多株野茼蒿样品进行PCR检测,扩增到约500 bp大小的特异性基因片段。扩增产物序列测定表明,YYJ1,YYJ2 与云南烟草曲叶病毒（Tobacco leaf curl Yunnan virus,TbLCYNV）各分离物的同源性最高,分别为96%,98%。YYJ3与景洪野茼蒿黄脉病毒（Crassocephalum yellow vein virus-Jinghong）的同源性达98%。初步断定云南烟草曲叶病毒与景洪野茼蒿黄脉病毒是侵染元江野茼蒿的两个主要病毒。同时,利用扩增联体病毒卫星DNAβ的引物beta01/beta02对不同染病植株进行检测,未检测到联体病毒的卫星DNAβ。     

非洲菊根腐病品种抗病性鉴定及病原菌的致病性分化

用隐地疫霉(Phytophthora cryptogea)游动孢子浸根接种法对13个非洲菊主栽品种进行了品种抗病性鉴定。结果表明,玲珑表现为高抗品种,年华、金太阳、靓粉为抗病品种,红日、寒王为中抗品种,绿心粉为中感品种,大臣、爱神、红地毯、大雪桔、热带草原为感病品种,白马王子为高感品种;对分离自云南非洲菊主产区的6个隐地疫霉菌株进行了致病性分化测定。结果表明,6个隐地疫霉菌株存在着较明显的致病性分化,菌株的致病性强弱与分离的不同寄主品种关系较大,不同地理来源的菌株致病性强弱差异不明显。     

浅谈推进高标准基本农田建设

我国在推进高标准基本农田建设的过程中,面临着整体地形地貌复杂,零散耕地整合难度较大;投资分散,综合效益难以发挥;后期管护跟不上,工程寿命短等种种问题。政府相关部门应本着实事求是的原则,结合当地土壤特点,广扩资金渠道,创新工作机制,扎实进行高标准基本农田的推广。     

森林种苗培育存在的问题及建议

从种苗培育的规模、供需要求、规范化管理等方面阐述了目前我国森林种苗培育的特点,分析了森林种苗培育存在的问题,并提出了发展建议,以期为森林种苗培育者提供参考。     

徐訏小说的民族化与现代主义特征

徐訏的小说风格浪漫诡异,情节引人入胜,其擅于在梦幻传奇的故事背景下进行现代主义的哲理深思。具有学贯中西的文学素养与家国天下的知识分子情怀,再加上其深刻的哲学知识和善思敏感的性格,使得徐訏的小说具有浓厚的民族化倾向和现代主义特征,是民族文学与现代主义文学结合的成功范例。本文从徐訏中西兼具的思想气质、徐訏小说中对现代主义的民族化演绎两个方面展开论述,以此讨论徐訏小说的民族化与现代化特征。     

我国矿区土地复垦存在的问题及解决对策

矿区土地复垦有着重要意义,文章通过分析矿区土地复垦存在的问题,提出矿区土地复垦的相关解决对策,对今后矿区土地复垦有着一定借鉴参考意义。     

甘肃庆城扶贫靠科技:农民从拒绝苹果树到抢种苹果树

<正>"塞下秋来风景异,衡阳雁去无留意",这个名句出自北宋范仲淹,说的是陕北、陇东一带景象荒凉,连大雁都不愿意多做停留。如今,这个说法恐怕要改改了——现在这里不但景观有很大改善,还是远近闻名的苹果产地,吸引着八方来客。高华是西北农林科技大学的副教授,长期从事果树品种培育研究和示范推广。3年来,高华和他的两位伙伴,常驻在甘肃省庆城县的苹果试验示范站,推广西北农林科技大学的苹果品种:瑞阳和瑞雪。这2个品种,已经通过陕西省果树品种审定委员会审定,结论是综合     

枣矮化密植省力化丰产栽培技术

<正>1矮化栽培品种选择矮化枣园的栽培品种应具有下列主要优良性状:1)早实性强。在一般管理条件下,幼树栽植当年50%的植株能开花结果,栽植第2年100%的植株开花结果,并能形成一定的经济产量。如梨枣、骏枣、大白铃等品种。2)丰产性能稳定。1年生枝萌发力较强,1~3龄枝坐果能力强,开花早,坐果率高,生理落果轻。4~7龄枣股枝,坐果率高,连续结实能力强,没有大小年。