禽传染性支气管炎病毒四川分离株M基因的克隆及真核表达载体构建

膜蛋白是禽传染性支气管炎病毒的主要结构蛋白,可能存在着具有重要免疫作用的抗原决定簇,能诱导细胞介导的免疫反应,但其免疫生物学功能尚不清楚。本研究选择禽传染性支气管炎病毒中国分离株SAIBWJ,通过RT-PCR扩增获得其膜蛋白基因M基因并插入到PGEM-T载体中,获得重组质粒PGEM-M,将重组质粒中的克隆片段进行序列测定及分析。对PGEM-M进行双酶切获得M基因片段,克隆到真核表达载体pcDNA3.1+中,通过菌落PCR、双酶切证明获得了M基因的真核表达质粒。利用DNAstar软件将IBVSAIBwj株的膜蛋白基因的核苷酸序列与GenBank中的国内外参考毒株进行比较,其核苷酸序列的同源率为91.6%～98.8%,氨基酸序列的同源率为91.6%～99.6%。糖基化位点的增加和减少对M蛋白的抗原性产生很大的影响。在M蛋白近N端含有两个糖基化位点,第一个跨膜疏水区距离亲水区大约20个氨基酸。SAIBwjM基因核苷酸、氨基酸进化关系可以看出,SAIBwjM与国内外参考株的同源性均较高,因此可能具有交叉保护性抗原,可望用于制备诊断试剂及制备基因工程疫苗。由于IBV变异较大,常规疫苗不能产生完全保护力。在IBV的免疫保护机制中,细胞免疫起着关键的作用,近年来一些研究者已经进行了IBVDNA疫苗的研究,并取得了一定的进展。IBV的S1基因真核表达质粒可同时诱     

鸭病毒性肝炎的诊断与防治

鸭病毒性肝炎是 6周龄以下雏鸭的一种急性、高度致死和接触传染性疾病 ,以肝脏肿大和出血为主要病变。本病于 1 945年首次在美国长岛发现 ,以后在英国、德国、加拿大 ,日本和法国等许多国家都报道了 DVH的流行。我国最早报道是 1 963年在上海 ,其后北京、福建、辽宁、江苏、河南、湖南、广东、西藏、深圳、四川和新疆等地都先后报道了本病的发生。此病现已成为养鸭业中最为严重的传染病之一。四川省自 1 985年引进种鸭后 ,全省各地时有 DVH的发生。 1 999年秋季到 2 0 0 0年春季 ,四川雅安、成都、绵阳、广汉、洪雅、乐山等地养鸭场的雏…     

猪源致病性沙门氏菌四环素耐药基因tetC的PCR扩增及序列分析

四环素类抗生素作为一类广谱抗生素,现已产生严重的耐药性.作为人兽共患病原菌的沙门氏菌,也存在大量这样的耐药菌株,使得本病的发病率和死亡率都不断上升.本研究对规模化猪场分离的经动物试验和生化试验鉴定的致病性沙门氏菌16株、药敏质控菌ATCC25922和沙门氏菌标准株C79-13对进行了四环素、金霉素、土霉素的药敏试验,结果表明16株致病性沙门氏菌对四环素类抗生素表现出普遍耐受性,耐药率达100%.其中MIC值＞128μg/mL的高耐药菌株13株,高耐药率81.25%;MIC值为32μg/mL的低耐药菌株3株,低耐药率18.75%.设计沙门氏菌四环素抗性基因tetC的引物,对16株致病性沙门氏菌的tetC基因做PCR扩增,结果12株菌获得以质粒为模板长约400bp的特异性扩增产物,未能从染色体扩增到产物.分别对临床分离的1株低耐药菌株(DY1)和1株高耐药菌株(SL1-3)的tetC基因扩增产物进行序列分析,结果表明菌株DY1和SL1-3的tetC的核苷酸同源率为97.7%;菌株DY1与质粒PBR322中tetC的核苷酸同源率为98.7%;菌株SL1-3与质粒pBR322中tetC的核苷酸同源率为98.4%,说明对于耐药程度和地方来源各不相同的菌株,在核苷酸序列上同源率很高.本文用PCR技术对规模化猪场分离的致病性沙门氏菌的四环素耐药基因进行了研究,以期对四环素耐药性的分子流行病学进行监测,克服了药敏试验只能检测耐药表型的缺点,为有效控制沙门氏菌感染提供理论基础和科学依据,在兽医、食品卫生和公共卫生等方面具有重要的意义.     

疯牛病发生与防制新进展

疯牛病（Mad-cow disease)是牛海绵状脑病（Bovine Spongiform Encephalopathy,BSE)的俗称，是一种慢性、传染性、致死性的中枢神经系统疾病。该病自1985年4月首次在英国发现以来，至今已在许多国家都有发现。目前，世界上有100多个过国家面临着严重疯牛病的威胁。本文从病原、流行病学、发生与防制等方面对疯牛病进行了综述。     

植酸酶基因工程酵母PP-NP~m-8培养条件的研究

对植酸酶基因工程菌PP-NPm-8的培养条件进行了研究,发现种龄、接种量、生长培养基初始pH值及生长时间、诱导培养基初始pH值、甲醇诱导浓度均对工程菌的产酶有很大影响,优化后的工程菌培养条件为:种龄16 h,接种量3%,麦芽汁生长培养基最适初始pH 4.5,生长培养时间18 h,麦芽汁诱导培养基最适初始pH值5.0,甲醇诱导终浓度4%。工程菌在此条件下诱导培养36 h后产酶量可达85067 U/mL,比未优化培养条件时提高了近一倍。     

枯草芽孢杆菌WHNB 02植酸酶的酶学性质研究

从118份样品中分离到1株产植酸酶的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis WHNB 02),其发酵液经乙醇沉淀、硫酸铵分级沉淀及Sephadex G-100柱层析等步骤后分离纯化了该酶,纯化倍数约为31.5倍,回收率为13.0%.该酶为单体酶,SDS-PAGE测得的分子量约为43 KD,以植酸钠为底物的Km值为0.5 mmol/L,酶反应的最适温度为60℃,80℃作用10 min酶活保存61%,最适pH为7.0,在pH 6.0～10.0范围内稳定,酶活性及稳定性都需Ca2+存在.ED-TA,Mn2+,Ba2+(5 mmol/L)对酶活具有很大的抑制作用.     

一株苝醌类光敏剂产生菌rRNA基因ITS区的测序分析

对 1株次级代谢产物为 艹北 醌类衍生物 (Perylenequinonesderiveration ,PQD)真菌的rRNA基因内转录间隔区(Intertranscribedspacer,ITS)进行了克隆测序。在GeneBank中经Blast序列比对 ,与竹黄属竹黄 (Shiraiabambusi colaP .Henn)的ITS序列相似度达到 92 % ,表明该菌株与竹黄属的亲缘关系较近。     

健康：规模化蛋鸡场稳定运营的基石

现代化规模蛋鸡场成功运营的一项重要任务就是,做好重要疫病的防控与生物安全措施的落实与执行。 通过对30个蛋鸡规模养殖企业的技术需求调查,表明：（1）禽流感、新城疫、传染性支气管炎、传染眭法氏囊炎、禽白血病、传染性喉气管炎是关注度较高的病毒性疾病,需要进行抗体和抗原监测。因抗原和试剂盒不统一,检测结果有较大的差异。（2）需要准确的免疫程序、最好减少免疫力次数。