反刍动物埃立克体荧光定量PCR检测技术的建立和应用

为快速、准确地检测反刍动物埃立克体,本研究以反刍动物埃立克体pCS20为靶基因设计特异性引物和探针,建立了TaqMan和Eva Green荧光定量PCR方法,对其反应的特异性、敏感性和重复性进行了分析,并与OIE推荐的套式PCR方法一起对临床样品进行检测。结果显示,本方法特异性强,与牛巴贝斯虫、牛双芽巴贝斯虫、环形泰勒虫、犬埃立克体、牛埃立克体、马埃立克体和立氏埃立克体无交叉反应;TaqMan和Eva Green荧光定量PCR对pCS20质粒标准品的最低检测限分别为17.4拷贝·μL^-1和1.74拷贝·μL^-1,标准曲线相关系数大于0.99,组内和组间CV均小于1.5%。对420只钝眼蜱样本的检测显示,TaqMan和Eva Green荧光定量PCR的检出率分别为25.48%和29.29%,与套式PCR检测方法相比,敏感性更高。本研究为反刍动物埃立克体的检测和流行病学调查提供了一种快速、准确的检测方法。     

寄生虫分子疫苗

随着寄生虫耐药虫株的出现及消费者对畜禽产品药物残留问题的担忧和环境保护意识的增强,研制疫苗防治寄生虫病已成为大势所趋。目前上市的寄生虫疫苗还很少,且多为活苗或致弱苗,属劳动密集型产品,价格较高,而且还有人工发病的潜在危险。分子疫苗的研究是随着遗传学、蛋白质化学及免疫学理论和方法的发展而发展起来的,在人的乙型肝炎等疾病的控制上已起到了很大的作用。在寄生     

L—山梨糖引起犬红细胞溶血的机制

Ｌ—山梨糖引起犬红细胞溶血的机制吴绍强摘译王建元校１引言还原成２－已酮糖的Ｌ－山梨糖是一种好的蔗糖替代物，因为它不会引起龋齿且能量较低，然而，给犬口服Ｌ－山梨糖后，却会引起严重的溶血。同小鼠、大鼠及猫相比，犬的红细胞对溶血很敏感，况且，Ｌ－山梨糖对兔...     

核酸提取方法的研究进展

系统详细的阐述了核酸提取过程中针对细胞裂解和核酸纯化两大关键步骤的各种研究方法,包括对组织细胞裂解的胍盐裂解法、碱裂解法、CTAB裂解法以及酚抽提法等,和纯化采用的固相基质：二氧化硅基质、磁珠和阴离子交换介质。阐明了各种方法的技术原理以及优缺点,以及各技术在实践中的应用发展情况。     

南非Ⅱ型口蹄疫间接ELISA检测方法的建立

为满足口岸对南非Ⅱ型口蹄疫检测、监测的需求,在对南非Ⅱ型口蹄疫抗原表位分析及相关基因合成的基础上,进行融合蛋白pGEX-VP1~VP3的体外表达,采用柱上酶切方法制备VP1~VP3蛋白。将纯化VP1~VP3抗原包被96微孔板,分别优化抗原包被浓度、血清稀释度、酶标二抗稀释度,确定阴性临界值。经反复优化,建立的南非Ⅱ型间接ELISA检测方法的最佳抗原包被浓度为6.4ug/ml,血清最佳稀释度为1:200,酶标二抗最佳稀释度为1:4000,阴性临界值(OD450)为0.562。检测样品判定标准为:OD450>0.622为阳性,OD450<0.502为阴性,0.502≤OD450≤0.622为可疑。特异性试验结果表明,所建立方法与其它血清型口蹄疫间无交叉反应。南非Ⅱ型口蹄疫间接ELISA检测方法的建立为我国口岸口蹄疫检疫提供了新的查验方法。     

利用抑制消减杂交技术筛选猪蛔虫性别差异表达基因

 为了筛选线虫的性别特异性基因，为线虫乃至寄生虫的性别控制提供新的工具，本研究选择猪蛔虫（Ascaris suum）为模型，分别提取雌性和雄性成虫的mRNA后，采用Clontech公司的PCR-selectTM试剂盒进行反转录合成cDNA并进行抑制消减杂交（SSH），构建猪蛔虫雌、雄虫性别差异表达的消减cDNA文库，并采用地高辛（DIG）标记的cDNA探针进行Southern 杂交检验所构建文库的消减效率。结果表明，雌、雄虫性别差异表达的消减cDNA文库均具有很强的性别特异性。随机从各库中各抽取25个克隆进行测序及在线BLAST分析，发现在25个雄虫ESTs中有20个已知ESTs，5个新的ESTs；25个雌虫ESTs中有11个已知ESTs，还有8个可能为新基因。猪蛔虫性别差异表达的消减cDNA文库的成功构建，为进一步研究性别特异基因的功能奠定了基础。     

南非蜱虫套式PCR鉴定方法的建立

为探讨来自南非不同蜱种的系统进化关系,建立南非截获蜱虫的套式PCR鉴定方法。根据GenBank中蜱虫的18SrRNA基因序列,设计2对特异性引物,通过优化条件建立蜱虫套式PCR鉴定方法。从南非进口生牛皮上截获寄生蜱,经过形态学初步鉴定后,应用所建立的套式PCR扩增获得10种南非蜱虫(T1-T10)的18S rRNA基因序列,测序后与NCBI中已公布的蜱虫18S rRNA基因序列进行同源性分析。应用MEGA5.0软件进行系统进化分析发现,T1、T2、T3、T4、T7、T8是花蜱属的亚种,T5和T6分别是牛蜱属的不同种或亚种;T9和T10是扇头蜱属的不同种或亚种。说明建立的套式PCR检测方法能够在传统形态学分类的基础上,准确鉴定不同形态的蜱种。