CRISPR系统促进脂肪干细胞成骨分化与抑制成脂分化的研究

本研究旨在优化组织培养法分离小鼠脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs),为研究成骨分化和成脂分化在间充质干细胞分化过程中的相互影响奠定基础。通过细胞形态学观察、细胞生长曲线和流式仪器检测所分离获得的间充质干细胞的特性,利用CRISPR-dCas9系统在快速促进间充质干细胞成骨分化的前提下观察其对成脂分化的影响,并通过生化染色、实时荧光定量PCR和免疫细胞学等手段进行分析。结果显示,接种3～5 d后可见细胞从组织块周围爬出,光镜下可见细胞形态多为成纤维细胞样的梭形细胞,且形态单一均匀,具有较高的爬出率,可以大大提高脂肪间充质干细胞的分离效率;通过CRISPR-dCas9系统激活Runx2和Osterix基因后可以促进间充质干细胞的成骨分化,实时荧光定量PCR及油红O染色结果显示,CRISPR-dCas9系统可以同时抑制间充质干细胞的成脂分化;通过CRISPR-dCas9-KRAB系统同时抑制成骨相关基因Runx2和Osterix后可以促进成脂分化。本研究利用组织贴壁法成功获得了高纯度的脂肪间充质干细胞,具有间充质干细胞的特性和分化能力;利用CRISPR系统可以同时过表达Runx2和Osterix两个基因,可以在进成骨分化的同时抑制成脂分化,表明成脂分化和成骨分化的相关性,为基因编辑在间充质干细胞诱导分化和临床应用方面提供了新的思路和方法。     

多措并举实施好农机购置补贴政策

<正>自2004年实行农机购置补贴政策以来,沧州市肃宁县农业局积极落实农机购置补贴政策,推动了农机化又好又快发展,提高了农机化作业水平,加快了农机新技术推广步伐,促进了农机服务组织的发展。一、经验和做法1.领导重视为了切实保证农机补贴惠农政策全面落实,肃宁县成立了以分管副县长为组长,农业、财政、监察、审计等相关单位负责人为成员的农业机械购置补贴工作领导小组,负责日常工作的指导和协调。     

紫外线和亚硝基胍对益生菌FGM发酵提取黄芪多糖的影响

旨在评价紫外线(UV)和亚硝基胍(NTG)诱变处理对菌株FGM发酵提取黄芪多糖的影响。分别用适量UV、NTG、UV+NTG诱变处理对数生长期的益生菌株FGM,筛选生长性能较好的诱变株发酵中药黄芪,水提醇沉发酵产物中的粗多糖,苯酚―硫酸法测定多糖质量分数。结果显示,UV处理90s得到的诱变菌株U90发酵黄芪后,产物中多糖质量分数比其他诱变剂量较高,为235.51mg/g,与诱变前相比增加58.13%;1.0g/L的NTG处理菌株10min后,得到的诱变株N1-1发酵黄芪后,产物中多糖质量分数比其他剂量高,为161.2mg/g,与诱变前比较增加10.64%;UV照射10s后,再用1.0g/L的NTG处理10min,得到的诱变菌株UN10-1发酵黄芪后,产物中的多糖质量分数为293.39mg/g,较诱变前增加了94.99%;UV照射10~120s所得的菌株发酵黄芪后产物中多糖质量分数均呈升高趋势,而NTG处理所得菌株发酵黄芪后产物中多糖质量分数变化无规律性。由此可见,UV和NTG诱变均有改善益生菌株FGM发酵提取黄芪多糖的作用,但NTG改善菌株发酵性能不明显,适量UV照射结合一定浓度NTG诱变所得的菌株发酵提取黄芪多糖的性能优于UV和NTG单独作用。     

黄芪多糖对树突状细胞形态和功能影响研究进展

树突状细胞(DC)是目前发现功能最强的一类抗原递呈细胞(APC),因其在机体免疫应答及免疫功能发挥中担当重要角色,成为免疫学研究热点。多糖是中药黄芪的重要有效成分,由己糖醛酸、果糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸等组成,具有免疫调节、抗肿瘤、抗应激和抗氧化等作用。黄芪多糖的免疫调节一直是人们研究的重点,研究发现其可通过促进DC成熟而发挥免疫调节作用。论文从DC的形态和功能变化、DC的成熟和DC表面标志CD80、CD86、CD83和相关细胞因子表达等方面,综合分析了黄芪多糖对DC抗原递呈能力的影响。     

蛹虫草培养残基中虫草素的水热回流提取及含量测定

【目的】 探究水热回流法提取蛹虫草培养残基中活性成分虫草素的最佳工艺参数。【方法】 选取液料比、提取次数、提取温度、提取时间4个因素进行单因素试验和正交试验,并通过高效液相色谱法（HPLC）测定虫草素含量,确定水热回流法提取蛹虫草培养残基的最佳工艺参数。【结果】 方法学验证结果表明,蛹虫草培养残基中虫草素含量的HPLC测定方法精密度、重复性、稳定性相对标准偏差（RSD）均<2%,准确度RSD为2.64%,标准曲线线性相关性高。正交试验结果显示,影响水热回流法提取效果的因素依次为提取时间、提取次数、液料比、提取温度,其中提取时间和提取次数对提取物虫草素含量均有显著影响（P<0.05）,提取温度和液料比影响不明显（P>0.05）。单因素试验和正交试验结果表明,蛹虫草培养残基的最佳提取工艺参数为：液料比25：1、提取次数5次、提取温度70 ℃、提取时间60 min,该提取条件下测得蛹虫草培养残基中虫草素含量为1.48 mg/g。【结论】 采用本研究确定的水热回流法最佳工艺参数能有效提取蛹虫草培养基活性成分,且操作简单实用,提取物活性成分得率稳定,为后续蛹虫草培养残基产品开发提供参考依据。     

重金属Pb~(2+)的抗原合成与鉴定

本研究旨在为重金属铅的ELISA检测方法建立提供一种免疫抗原并对其进行初步评估。试验采用络合剂CHX-A-DTPA双功能基团分别特异性结合重金属元素Pb2+和蛋白载体KLH,合成出复合络合物KLH-CHX-A-DTPA-Pb2+作免疫抗原,最佳合成条件pH值、反应时间、温度分别为9.0、(22±3)h和25℃;用BCA试剂盒、紫外扫描、三硝基苯磺酸法和原子吸收法对合成抗原做了初步评估,免疫抗原蛋白含量为2.66g/L,络合剂与Pb2+的偶联度为77.84%,结构与设计相似;5次免疫BALB/c小鼠后,抗血清可达128 000以上。结果提示,重金属Pb2+的抗原合成成功,免疫小鼠后特异性好,可用于重金属铅的ELISA检测方法研究。     

稻谷颖壳开裂特点及其影响的初步研究

调查同一组合2个典型株系共10个植株穗粒常规稻颖壳开裂特点及其影响。结果表明：稻谷颖壳开裂粒间表现有轻重之分；品质不同株系籽粒裂颖率存在较大差异，稻穗中部或下部及二次枝梗上的稻谷颖壳开裂现象严重；裂颖稻粒形成的糙米与正常稻粒形成的糙米相比，斑点米、裂纹米、有色米比率及厚度有所增加，而千粒重、长度、宽度减小。     

喹胺醇诱导仔猪氧化损伤的潜在性作用

12头断奶仔猪随机分为2组,分别单剂量口服或静脉注射喹胺醇,检测了给药后48 h内血抗氧化酶活力、MDA含量和血药浓度,旨在评估喹胺醇诱导氧化损伤的潜在性作用。结果,猪单次口服200 mg/kg喹胺醇后,血CAT活力在2～48 h间显著高于给药前（P〈0.05）,GSH含量与CAT活力变化呈相反趋势（P〈0.05）,SOD、GSH-Px、GSH-ST活力、MDA含量未见明显变化;单次注射3.0 mg/kg喹胺醇后,SOD活力在5～30 min内显著低于给药前（P〈0.05）,MDA含量与之呈相反变化,CAT、GSH-Px、GSH-ST活力、GSH含量给药前后均无显著性差异;血药浓度与抗氧化酶活力均呈负相关性,与MDA含量呈正相关性。结果表明,断奶仔猪单剂量口服或注射喹胺醇后,有导致抗氧化机能短暂紊乱的可能,但不会诱发氧应激性损伤。     

益生菌FGM葡萄糖激酶基因（glcK）在黄芪发酵中的表达

旨在分析益生菌FGM在黄芪发酵过程中的生长动态,为阐述其作用机理奠定基础。采用平板计数法对益生菌FGM在黄芪发酵中的生长动态进行检测,同源克隆法克隆糖酵解途径中的限速酶葡萄糖激酶glcK基因序列,并运用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR技术分析其在黄芪发酵不同阶段的表达水平。结果表明：成功克隆得到glcK基因一段382 bp的片段（GenBank登录号JX976291）,其序列一致性为83%～85%。实时荧光定量PCR结果显示,在FGM发酵6 h内,glcK基因表达上调且呈逐渐上升趋势,至对数期后期6 h表达水平达到最高（4.63倍）;稳定期初期8 h时表达水平显著下降（P<0.05）,10 h至发酵结束基因表达下调。可见：在黄芪发酵6 h内FGM处于对数生长期,葡萄糖经糖酵解途径代谢产生ATP供细菌生长代谢利用,10 h后开始进入稳定期并进行次级代谢。