苦楝内生真菌及其代谢产物的杀虫活性

在对290株苦楝内生真菌分离纯化鉴定的基础上,研究了30株具有代表性的内生真菌及其代谢产物的杀虫活性。结果表明其中5个菌株对马尾松毛虫5d校正死亡率大于60%,杀虫活性最强的KL042菌株经鉴定为球孢白僵菌。球孢白僵菌作为内生真菌,在国内尚未见报道。进一步选取杀虫活性较强的9株内生真菌,研究其代谢产物的胃毒和触杀活性,结果表明拟青霉KL017菌株发酵液10倍浓缩液对柳蓝叶甲胃毒活性最强,48h校正死亡率达90.09%。球孢白僵菌KL042、拟青霉KL017和交链孢KL062发酵液10倍浓缩液点滴马尾松毛虫前胸背板后,48h校正死亡率分别为76.67%、56.67%和53.33%。     

转Vip3Aa基因的球孢白僵菌工程菌的构建及其对马尾松毛虫毒力的增效作用

根据苏云金杆菌营养期杀虫蛋白基因Vip3Aa序列设计全基因扩增引物,并在引物两端添加合适的酶切位点进行PCR扩增,纯化的PCR产物和载体pbarGPE1分别经Xho I和EcoR I双酶切、连接,构建真菌表达载体pbarGPE1-vip3Aa。将构建好的质粒经Sca I酶切线性化后,利用芽生孢子转化法转入昆虫病原真菌球孢白僵菌Bb13菌株内,得到白僵菌工程菌株Bb13V。RT-PCR结果证明Vip3Aa在工程菌株中已得到成功转录。在室内恒温25℃条件下,用喂食、喷雾以及两者相结合的方法,分别测定1×105、1×106、1×107、1×108和2×108孢子.mL-1 5个不同孢子浓度下原始菌株和工程菌株对二龄马尾松毛虫的毒力。结果表明,在前4种不同浓度的处理条件下,采取3种不同的处理方式,工程菌株均比喷雾处理的原始菌株致死率提高30%以上;喷雾处理的毒力提高33.6~62.1倍;喂食处理的致死率均高于喷雾处理。在1×108孢子.mL-1浓度下,喂食处理的致死率显著高于喷雾处理,致死中时缩短6.89 d。因此,Vip3Aa基因在转入白僵菌后得到了表达,从而赋予白僵菌可观的胃毒作用,使得工程菌对松毛虫的毒力明显增强。     

黄山球孢白僵菌野生种群流行菌株的28S rDNA Ⅰ型内含子分析

通过4对引物,对采自黄山的40株球孢白僵菌菌株进行28S rDNA I型内含子分析,以探讨黄山自然种群的遗传结构及流行菌株类型。结果显示,在黄山球孢白僵菌自然种群中,存在着13种不同的内含子单倍型,显示出在黄山小范围内的球孢白僵菌种群也存在着丰富的遗传多样性。不同单倍型在种群中所占的比例不同,其中BBBA型占据主导地位,为37.5%,ABAA型和ABBA型次之,分别为15%和12.5%,而BABA等7种单倍型则各仅占2.5%,反应出不同的遗传背景的菌株具有不同的遗传稳定性与环境适应性。数据同时显示,同核体菌株在黄山球孢白僵菌自然种群中的比例为82.5%,显示出同核体在遗传稳定性上优于杂核体,但同时,17.5%的杂核体比例也显示出准性生殖在球孢白僵菌种群中的普遍性。     

安徽西南部家蚕白僵病病源及传播途径追踪

 【目的】明确安徽西南部家蚕白僵病菌株来源和传播途径,控制蚕病流行。【方法】利用ISSR分子标记对安徽西南潜山的病蚕、蚕室及其周边桑园、农田及松林的70株球孢白僵菌进行聚类分析和三维主坐标分析。【结果】该地区的球孢白僵菌为优势性明显的异质种群;6个类群中仅主病源第II-1类群和次病源第IV类群引起家蚕的地方性白僵病,与用于防治松毛虫的菌株及在附近松毛虫种群中自然流行的土著菌株关系较远。生物测定表明,使用松毛虫分离株使家蚕死亡25%的LC25、LD25和LT25分别为使用家蚕分离株使家蚕死亡75%的LC75、LD75和LT75的1 327、1 378和1.5倍。【结论】鉴于松毛虫分离株明显的寄主专化性,在该蚕区使用由这类菌株研制的白僵菌杀虫剂防治松毛虫对蚕业是相对较为安全的。另外,当年夏秋季蚕室附近螳螂种群的白僵病大流行与家蚕白僵病无关。     

绿僵菌ACCC30104菌株的分子鉴定

通过测定原定名为金龟子绿僵菌小孢变种的ACCC30104菌株的ITS1-5.8S-ITS2 rDNA区域序列,为该菌株正确归属提供了重要的分子依据.依据形态学和分子生物学的证据可将该菌株重新鉴定为金龟子绿僵菌鳞鳃金龟变种.     

4种破碎方法对古尼虫草内含物提取的初步研究

以不溶固形物含量、腺嘌呤含量为指标比较了微波法、酶解法、自溶法和酸热法对交织顶孢霉菌丝体中内含物提取率的差异.结果表明,浓度为0.1%的纤维素酶在50℃条件下处理样品3 h破壁效果最佳,能较好地使细胞内含物包括核苷类物质溶出,其次是微波法.由于纤维素酶的价格较高,不利于大规模工业化生产,从经济角度考虑选用微波低温解冻档处理4 min的细胞破碎方法来提取菌丝体中内含物较理想.     

蚜虫上虫霉的鉴定

虫霉目Entomophthorales真菌在合适的条件下能引起广泛的流行病,是不少害虫种群自然调节的主要因素。迄今已知的160多种虫霉中,有120多种是昆虫病原。据初步统计,约40种侵染同翅目昆虫,其中20种侵染蚜虫类;约37种侵染双翘目,其中16种侵染蝇类;约19种侵染鳞翅目,13种侵染鞘翅目。由此可见,蚜虫是虫霉的重要寄主。虫霉研究在国外已有百余年历史。如今美国和法国已成功地进行了试验性生产~(13),法、美、英、苏联、澳大利亚和我国已对某些蚜虫进行了田间防治试验。在20种侵染蚜虫的虫霉中,有15种已可人工培养。在我国,蚜虫上的虫霉近年来已陆续有所采集报道,但由于虫霉目分类混乱,命名变动大,再加上资料及实验技术所限,目前在鉴定中困难不少,且有些鉴定尚有疑问。因此有必要将侵染蚜虫的20种虫霉做以介绍。     

接种式施放白僵菌防治马尾松毛虫技术方案的灰色决策

以生物多样性指数、马尾松毛虫虫口密度和成本投入作为指标,用灰色决策理论对不同放菌量和不同放菌频度的12种接种式放菌方案作局势决策,以确定最佳放菌方案。结果表明：放菌量为37．5g／hm^2,放菌频度为一年一次的放菌方式最佳。     

有害生物综合治理中经济阈值的估算方法(续)

5、要考虑长期的影响一种措施不仅会短期杀伤有害生物种群,而且可能对其产生长期影响。另一方面,杀伤天敌的恶果短期内未必容易觉察,但我们总有一天会感到主要有害生物的复苏和次要有害生物上升的威胁。因此,不光要考虑以往的施药对当时的影响,也要考虑当时的施药对以后种群的长期影响。6、不同防治方法阈值也不同在实施某种措施的过程中建立一个阈值后,如改变防治手段或方法,该阈值即失去意义。有不少     

家蚕灰僵病病原的鉴定

家蚕灰僵病(grey muscardine)是一类不常见的真菌病,其病原一直未能确定。从感染灰僵病的家蚕体中分离获得一株棒束孢(Isaria),菌株编号为RCEF197,测定了该菌株的ITS1-5.8S-ITS2 rDNA区域序列,研究了该菌株的菌落和显微形态特征。与一些近似的棒束孢和拟青霉(Paecilomyces)的ITS序列进行比较,该菌株和爪哇棒束孢菌株CBS134.22的相似性为99.8%,在构建的棒束孢属部分种的系统发育树中,该菌株与爪哇棒束孢聚为一类,再结合该菌株具有的淡灰紫色菌落和长椭圆形分生孢子大小等形态学特征,将家蚕灰僵病的病原确定为爪哇棒束孢Isaria javanica。