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Comparison of dot blot hybridization, polymerase chain reaction, and virus isolation for detection of bovine herpesvirus-1 (BHV-1) in artificially infected bovine semen. 总被引:2,自引:0,他引:2 下载免费PDF全文
Bovine semen samples spiked with bovine herpesvirus 1 (BHV-1) were used to compare dot blot hybridization, polymerase chain reaction (PCR), and virus isolation for detection of BHV-1 in bovine semen. The PCR amplification used primers targeting the BHV-1 thymidine kinase gene and a nucleic acid releasing cocktail (GeneReleaser); the PCR product was used as the DNA probe in dot blot hybridization; virus isolation was done in primary bovine fetal testis (BFT) cell cultures. Semen diluted 1:20 in tissue culture medium had the least cytotoxicity and inhibition of viral cytopathic effects in BFT cells, allowing detection of 1 TCID50/100 microL of BHV-1 suspension by virus isolation. The presence of foreign DNA such as bovine sperm DNA or salmon sperm DNA increased the sensitivity of dot blot hybridization in detecting BHV-1, allowing detection of 20,000 TCID50/100 microL of neat semen. The inhibition of PCR amplification of BHV-1 DNA in bovine semen was eliminated by diluting the samples 1:20 in tissue culture medium. The best PCR amplification was obtained when semen was diluted 1:20 and when a reaction buffer of pH 9.0, with 1.0 mM MgCl2 was used. Under these conditions, the PCR followed by ethidium bromide staining of agarose gels could detect 1 TCID20/100 microL of sample, whereas PCR followed by Southern blot hybridization could detect 0.01 TCID50/100 microL of sample.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS) 相似文献
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研究了叶面喷施抗蒸剂对盆栽苹果水分状态的影响。结果表明:抗旱剂一号(主要成分为黄腐酸)可明显降低树体蒸腾(最低时为对照的39.21%)、提高气孔阻力(最大时为对照的243.96%)和叶片水势(一般比对照提高0.2-0.4MPa、最大0.7MPa),并对叶温未产生明显的影响(变化一般小于1℃),有效作用期长达15d以上。在果树旱期喷施,可明显改善树体水分状态。腐殖酸效果不明显。 相似文献
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参考 Genbank收录的 TGEV- Miller株的基因序列 ,自行设计合成 1对引物 (TGEVP5 /P6 ) ,对不同代次的 TGEV疫苗弱毒 STC3及种毒 、种毒 进行了 RT- PCR扩增 ,产物经琼脂糖凝胶电泳分析 ,均出现 1条大约 12 6 2 bp的目的条带 ,经 Eco R 酶切 ,都产生了 871bp和391bp左右的两个片段 ,与预期大小相符。将种毒 RT- PCR扩增目的条带回收纯化后克隆入PMD18- T载体中 ,转化宿主菌 DH5 α,挑选阳性克隆 (命名为 PTs) ,提取重组质粒 ,用 Hpa 、Eco R 对重组质粒进行酶切鉴定以及 PCR扩增 ,然后进行序列测定 ,并进行了序列分析 ,证实与国外标准毒株 Miller、Fs772 / 70、Purdue、TO14等有较高的同源性 相似文献
55.
56.
将马立克氏病死鸡的皮肤或羽囊捣碎,制成MD琼扩抗原。试验结果表明,自制MD皮肤和羽囊琼扩抗原与标准抗的检测MD抗体的敏感性和特异性相同,但皮肤琼扩抗原制造方法相对比较简单,产量也较高。 相似文献
57.
58.
对以QY系列为主体的农用潜水电泵修复可靠性低、寿命短的问题,提出了改进措施,从而有效提高潜水电泵修复可靠性,并延长使用寿命。 相似文献
59.
本文从分析同步发电机原动系统基本数学模型入手,提出了一种实现同步发电机原动系统仿真的专用可控硅直流调速系统及其实用装置。该控制系统采用有差调节的模拟调速器,水汽管道特性模拟、自平衡特性模拟和集成块模拟触发器,以及过流与超速保护,并可实现有差-无差调节的转换。 相似文献
60.
碧峰峡森林土壤性状研究 总被引:1,自引:0,他引:1
碧峰峡不仅是旅游景点,还是多学科研究的天然“实验室”,地处雅安亚热带区,原始森林植被保护完好,土壤垂直分布明显,地质现象复杂,也是大熊猫、金丝猴出没之地。经研究结果:土壤呈酸性,自然肥力高.经相关分析结果:土壤有机质含量和CEC等有关理化特性的相关性,较物理性粘粒与CEC间更加显著。 相似文献