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过氧化氢诱导的奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤模型的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
本试验旨在利用过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)作为刺激源,以细胞存活率及抗氧化指标为判断指标,建立奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMEC)的氧化损伤模型。试验一采用单因子完全随机试验设计,将第3代贴壁生长的BMEC随机分为42组,每组10个重复。细胞培养液中分别添加0、100、200、400、600、800和1 000μmol/L H2O2,使之分别作用2、4、6、8、12、24 h,测定细胞数量,计算存活率。试验二是在试验一得出的适宜H2O2作用时间(本试验的结果为6 h)的基础上,采用单因子完全随机试验设计,将第3代贴壁生长的BMEC随机分为7组,每组6个重复,BMEC中添加不同浓度的H2O2(0、100、200、400、600、800和1 000μmol/L)作用细胞6 h,收集细胞和培养液测定抗氧化指标,筛选使细胞发生氧化损伤的适宜H2O2作用浓度。试验一结果表明,600μmol/L H2O2作用细胞6 h,BMEC的存活率降低至79.79%。试验二结果表明,600~1 000μmol/L组与其他各组相比均显著降低了谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性,提高了丙二醛含量(P<0.05),但600、800和1 000μmol/L组之间差异不显著(P>0.10)。结果 提示,H2O2作用浓度为600μmol/L、作用时间为6 h,使BMEC产生了明显的氧化应激,可作为建立细胞氧化损伤模型时的适宜条件。 相似文献
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本试验旨在构建Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)的VP2基因重组表达载体,并建立稳定表达VP2基因的BHK-21细胞系。利用RT-PCR方法扩增Asia 1型FMDV的cDNA,获得VP2基因完整的编码区,构建可表达VP2的带有绿色荧光蛋白标记基因的pIRES2-EGFP-VP2重组表达载体。经鉴定正确后,利用LipofectamineTM2000将重组质粒转染293T细胞,通过Western Blot技术检测VP2蛋白的瞬时表达;然后再转染BHK-21细胞,通过G418筛选,形成单克隆细胞系,经荧光筛选到表达EGFP的抗性单克隆细胞,扩繁培养克隆细胞,再通过West-ern Blot技术检测其VP2的表达,最终筛选到稳定表达FMDVVP2基因的BHK-21细胞系。结果表明,VP2基因重组表达载体pIRES2-EGFP-VP2构建正确,能够在293T细胞内瞬时表达;转染BHK-21细胞,经G418筛选到表达VP2基因的BHK-21细胞克隆,经长达60d的传代,获得了稳定表达VP2基因和EGFP的BHK-21细胞系。上述结果表明,我们建立了稳定表达VP2基因的BHK-21细胞系,为进一步探讨VP2基因在FMD... 相似文献
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为研究绵羊瘤胃原虫对糖类的化学感知作用,选取三只体重相近(43.80±4.35 kg)的鄂尔多斯细毛羊,安装瘤胃瘘管作为瘤胃液供体,在晨饲前0 h和晨饲后3 h分别采集瘤胃液,利用装有不同浓度的葡萄糖溶液和木糖溶液的毛细管研究瘤胃原虫对其趋向性差异,即化学感知作用。结果显示:禁食和饲喂不同条件对原虫葡萄糖趋化性没有显著影响(P0.05),等毛虫对葡萄糖、木糖趋向行为比内毛虫更加明显,内毛虫只对较高浓度(1 000 mM)葡萄糖溶液表现出明显的趋向性(P0.05),等毛虫和内毛虫对葡萄糖的趋向性高于木糖(P0.05),等毛虫识别糖类的化学感受器特异性可能不强。 相似文献
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本试验旨在研究5-羟色胺(5-HT)前体物对围产期母羊泌乳性能及血浆生化指标的影响。选择体况良好、体重(64.52±4.11) kg、处于同一围产期的30只巴美肉羊母羊,按体重随机分为3组,即对照组(灌注生理盐水)、5-羟基色胺酸(5-HTP)组(灌注5-HTP)和色氨酸(Trp)组(灌注Trp),每组10只。在母羊围产期产前第7天至产后当天(第0天),进行颈静脉灌注,5-HTP和Trp的灌注剂量均为0.178 mg/kg BW,浓度为0.1 mg/mL;对照组灌注同等剂量的生理盐水。试验期为产前第7天至产后第30天。结果表明:1) 5-HTP和Trp对母羊泌乳量及乳蛋白含量无显著影响(P 0. 05),但使母羊产后第3天乳脂和乳中非脂固体含量显著降低(P 0.05)。2) 5-HTP和Trp可以显著提高母羊产前第0天及产后第3、6、9天的血浆5-HT浓度(P0.05)。3) 5-HTP和Trp可以显著提高母羊产前第0天及产后第3、6、9天的血浆葡萄糖浓度(P0.05),显著降低母羊羊产前第0天及产后第3、9天的血浆非酯化脂肪酸(NEFA)浓度(P0.05),显著降低母羊羊产前第0天及产后第3、6天的血浆胰岛素(INS)浓度(P0.05)。由此可见,灌注5-HT前体物可以影响围产期母羊乳脂和乳中非脂固体含量,提高血浆葡萄糖浓度,降低血浆NEFA和INS浓度 相似文献
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本试验旨在研究饲粮不同非纤维性碳水化合物/中性洗涤纤维(NFC/NDF)对细毛羊氮代谢、瘤胃内环境及挥发性脂肪酸(VFA)吸收的影响。选用9只装有永久性瘤胃瘘管的内蒙古鄂尔多斯细毛羊半同胞羯羊,按体重随机分为3组,1组、2组和3组饲粮NFC/NDF分别为0.35、0.66和1.14,粗蛋白质含量均为13.50%。结果表明:1)饲粮NFC/NDF对摄入氮、粪氮、尿氮和沉积氮无显著影响(P>0.05),1组尿中尿素氮含量显著高于2组(P<0.05),极显著高于3组(P<0.01),并且2组显著高于3组(P<0.05)。2)采食1.5和3.0 h以后,1组氨态氮(NH_3-N)含量显著高于3组(P<0.05),采食4.5 h后,各组间NH_3-N含量无显著差异(P> 0.05)。pH均在6.0~6.8,1组pH显著高于3组(P <0. 05)。3)采食1. 5 h后,1组乙酸含量显著高于2组(P <0.05),极显著高于3组(P<0.01)。采食1.5、3.5和4.0 h后,1组和2组丙酸含量显著低于3组(P<0.05)。1组采食前及采食后丁酸含量均显著高于3组(P<0.05)。4) 2组和3组Na^+/H^+交换蛋白3(NHE3)和下调式腺瘤载体(DRA)基因表达量显著高于1组(P<0.05)。1组单羧酸转运蛋白4(MCT4)基因表达量显著高于2组和3组(P <0. 05)。而2组Na^+/H^+交换蛋白1(NHE1)和钠/钾ATP酶泵(Na^+/K^+ATPase)基因表达量显著高于1组和3组(P <0. 05)。综上所述,饲粮NFC/NDF为0.66时,对细毛羊瘤胃内环境和VFA吸收相关基因表达量有显著影响。 相似文献
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研究日粮中添加复合微生态制剂对蛋种鸡小肠肠道长度、pH及盲肠微生物的影响,试验选用1日龄海兰褐蛋种鸡320只,随机分为4个组,进行16周的试验。试验组日粮是在对照组日粮基础上分别添加50、100、200 g/t的复合微生态制剂组成。试验结果表明:① 与对照组相比, 21日龄时,添加复合微生态制剂组显著降低了蛋种鸡十二指肠、空肠、回肠的相对长度(P<0.05);42日龄时,试验2组的回肠相对长度显著低于对照组(P<0.05); 112日龄时, 试验1组空肠和回肠的相对长度显著低于对照组 (P<0.05),试验3组十二指肠的相对长度显著低于对照组(P<0.05)。②试验1、2组蛋种鸡21日龄空肠和回肠的pH显著低于对照组(P<0.05),试验3组蛋种鸡21、42、112日龄十二指肠、42日龄空肠的pH也显著降低 (P<0.05) 。③添加复合微生态制剂可显著提高蛋种鸡21日龄盲肠乳酸菌的数量(P<0.05),其中试验2组乳酸菌的数量最多,与对照组相比,提高了11.76%,其次是试验3组和试验1组;添加复合微生态制剂对于42和112日龄蛋种鸡的盲肠微生物无显著影响。结果提示,日粮中添加复合微生态制剂能缩短蛋种鸡小肠肠道相对长度,同时降低肠道pH并能改善肠道菌群,对雏鸡的健康生长有促进作用。本试验中添加100 g/t的复合微生态制剂为适宜添加量。 相似文献