猪蓝耳病活疫苗中猪瘟外源病毒检测

试验采用IFA法对2批随机抽样的PRRS活疫苗(每批4瓶)、阳性对照(CSFV)、阴性对照(未被CSFV污染的猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV))和特异性试验检测病毒(猪圆环病毒2型(porcine circo virus 2 type,PCV-2))接种于生长良好的PK-15细胞进行间接免疫荧光染色检测CSFV,以期建立快速、准确的间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)调查猪蓝耳病活疫苗中猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的污染情况;在不同时间、相同试验条件下,相同批次的疫苗被重复检测了3次。试验结果表明:阳性对照接种的PK-15细胞出现特异性黄绿色荧光,阴性对照、PCV-2和待检样品接种的PK-15细胞均未出现特异性黄绿色荧光,即待检2批PRRS活疫苗未被CSFV污染;通过3次重复操作,最终的检测结果一致,说明IFA检测猪瘟病毒包涵体的特异性强、敏感性高。     

一株H9(N2)型禽流感病毒HA基因的克隆与序列分析

利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增出禽流感病毒(H9亚型)血凝素的cDNA。通过T-A连接将已加A尾的PCR产物连接到线状克隆载体pGEM-Teasy vector,转化J M109感受态细胞,在含氨苄青霉素的LB平板上筛选阳性克隆。经PCR扩增,进一步确证为目的片段。对目的片段进行测序,结果获得该毒株的HA基因全长。与已知序列进行同源性比较,同源性最高的可达98%,表明这些分离株的亲缘关系较近;系统发育分析表明,该毒株属欧亚种系;通过血凝素裂解位点的氨基酸序列分析可知,该分离株的HA切割位点上未见到典型的高致病力毒株H5、H7所具有的一系列碱性氨基酸,其排列顺序为-PARSSRGLF-。所克隆的基因为禽流感病毒HA基因芯片的研究奠定了基础,同时为诊断和预防AI提供了理论依据。     

H9N2型禽流感病毒不同传播方式的分子机制

H 9N 2亚型禽流感病毒属正黏病毒科流感病毒属A型流感病毒。虽表现低致病性,但由于传播广泛、能造成免疫抑制并使宿主易发生继发感染,其危害不容忽视[1]。反向遗传技术是近几年快速发展的一项新方法,是根据病毒基因组及其复制的特点,建立操作系统,从克隆的cDNA产生病毒的过程[2     

H9N2型禽流感病毒HA基因在昆虫/杆状病毒系统中的表达

采用异硫氰酸胍法提取禽流感病毒分离株的SPF鸡胚尿囊毒RNA,利用RT-PCR技术扩增出禽流感病毒HA基因的cDNA。将其克隆到pMD18-T中并测序。在去除编码HA信号肽的核苷酸序列后,亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHis,筛选到重组质粒,测序正确后与线性化的杆状病毒DNA(Bac-NBlueTMDNA)共转染Sf9昆虫细胞,挑取蓝色蚀斑,经三轮蚀斑纯化,获得数株重组杆状病毒rpBlueBacHisH9HA。提取重组病毒DNA,经PCR证明目的基因片段已插入到杆状病毒基因组中,血凝实验、SDS-PAGE实验结果表明HA基因在重组杆状病毒感染的Highfive细胞中获得了表达。     

抗虫和耐除草剂玉米Bt176定性PCR检测的灵敏度研究

研究依据农业部869号公告-8-2007转基因植物及其产品成分检测抗虫和耐除草剂玉米Bt176及其衍生品种定性PCR方法,以玉米内标基因zSSIIb和外源基因Bt176转化体特异性序列为检测的目的片段,对农业部转基因生物产品成分监督检验测试中心（太原）提供转基因成分含量分别为10%、1%、0.1%的转基因玉米粉进行检测,证明此方法的检测灵敏度高,转基因玉米的检出下限可达0.1%。     

动物饲料中转基因抗草甘膦大豆GTS40-3-2成分的检测

转基因抗草甘膦除草剂大豆GTS 40-3-2作为目前在最多国家和地区批准种植的转基因大豆,除榨取大豆油外,剩余的豆粕等副产品被用作动物饲料。通过对山西省太谷周边11个动物养殖户的饲料进行转基因标识情况专项调查,采用定性和定量PCR技术对转基因抗草甘膦除草剂大豆GTS 40-3-2含有的Ca MV35S启动子、NOS终止子、Cp4-EPSPS及大豆内标Lectin基因进行检测。结果表明:11份饲料全部含有转基因抗草甘膦除草剂大豆GTS 40-3-2成分,且其含量各不相同,其中蛋鸡饲料GTS 40-3-2转化体的含量最低,但所有饲料均无转基因标识。试验为我国转基因饲料饲用安全性评价体系提供了试验数据支持,同时也对来源于转基因作物的原材料产品的合理应用以及通过转基因饲料喂养动物所产生的农畜产品的安全性评价具有重要的现实和理论意义。     

羔羊睾丸细胞培养及接种舍饲羊群羊痘病毒后的病变研究

进行了羔羊睾丸细胞培养,并对该细胞接种山西北部舍饲羊群羊痘病毒后的病变情况进行了观察.结果表明:细胞培养前期多呈三角形或多角形,后期细胞呈细长梭形.接种羊痘病毒后,出现了明显的、规律的细胞病变.     

耐除草剂玉米MON87427定性PCR检测方法的建立

MON87427转化体是美国孟山都公司研发的转基因耐除草剂玉米,已经被包括我国在内的18个国家授权应用。对该转化体的快速检测是实现对其日常监管的基本前提。为了建立MON87427特异性的检测方法,研究针对其特征DNA序列筛选了最佳引物组合,并对其PCR反应过程进行优化,以初步建立转基因玉米MON87427转化体定性PCR检测方法。结果表明,经特异性测试,引物组合FA/RC能特异性检出MON87427玉米,对其他主要作物或转化体无效;该方法的检测灵敏度可达0.05%。研究建立的新方法可以满足我国现行转基因作物监管检测技术要求,适用于对MON87427转化体特异的定性PCR检测。     

对仔猪副伤寒C500活疫苗纯粹检中可疑菌落的鉴定

在仔猪副伤寒Ｃ５００活疫苗成品纯检中，发现有几批苗在２５℃培养的酪胨琼脂（Ｇ．Ａ）斜面上有可疑菌落，经鉴定，判定为仔猪副伤寒Ｃ５００活疫苗的子菌体形成的菌落，并用含有子菌体疫苗给家兔皮下注射６０亿活菌，无不良反应     

羊痘研究进展

羊痘是一种急性、热性、接触性传染病,发病率、致死率高,严重制约了养羊业的发展。作者从病原形态学、流行病学、诊断、分子生物学、疫苗5个方面,综述了羊痘研究的最新进展。