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试验旨在对多杀性巴氏杆菌recN基因进行克隆和原核表达,并对其表达蛋白进行生物信息学分析。参照GenBank中recN基因序列(登录号:CP003313.1)设计1对引物,通过PCR扩增获得目的基因片段,构建pET-28a(+)-recN重组质粒并转化E.coli DH5α感受态细胞,提取质粒进行酶切鉴定,将鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,对融合蛋白进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果表明,试验成功克隆了大小约为1 677 bp的recN基因序列,通过诱导表达的His-Tag融合蛋白大小约为66.94 ku,主要以包涵体形式存在。经生物信息学分析,recN蛋白的分子式为C2735H4428N786O855S16,消光系数为24 785,不稳定系数为43.99,属于不稳定蛋白;理论等电点(pI)为5.62,为酸性蛋白;总平均亲水性为-0.316,与试验表达的包涵体蛋白性质相同,即同为疏水性蛋白;recN蛋白在哺乳动物网织红细胞的半衰期为30 h,在酵母(体内)中的半衰期>20 h,在大肠杆菌(体内)中的半衰期>10 h;二级结构主要以α-螺旋(64.87%)及无规则卷曲(21.00%)为主;经疏水性分析,预测该蛋白有3个高疏水性区域和9个高亲水性区域。本试验结果为进一步探究多杀性巴氏杆菌recN基因的功能提供了参考依据。 相似文献
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峡江县位于江西省中部,地处吉泰盆地北缘,属亚热带季风气候,四季分明,雨量充沛,十分适宜杨梅的栽培。该县从1998年开始引进东魁、荸荠种等优良杨梅品种在玉笥山林场试种,表现丰产稳产。而且所产果实品质优良,深受消费者欢迎,售价高且俏销,种植杨梅的效益十分明显,因此,在全县迅速掀起了种植杨梅的热潮。目前,该县杨梅种植面积达200hm^2余,已成为江西最大的杨梅生产基地。 相似文献
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86.
为探讨NO/cGMP信号转导系统对小型猪特异性麻醉颉颃剂催醒分子机理的调控,144只Wistar大鼠随机分为对照组和试验组,对照组和试验组再分为早期催醒组、中期催醒组和晚期催醒组。用分光光度法测定脑NOS活性和NO产量,ELISA测定脑cGMP含量。结果显示,小型猪特异性麻醉颉颃剂能明显地激活大鼠相关脑区的NOS活性和NO及cGMP产量,并且大鼠不同脑区NOS活性、NO产量和cGMP含量的变化趋势不仅与大鼠行为学变化相平行,还与不同时期表现出的催醒效果基本吻合。这表明小型猪特异性麻醉颉颃剂的催醒可能与激活特定脑区的NO/cGMP信号转导系统相关。 相似文献
87.
猪瘟病毒保护性抗原E2基因的克隆及在原核细胞中的表达 总被引:8,自引:0,他引:8
应用RT-PCR分两段扩增猪瘟病毒(HCV)石门株E2基因,然后对其进行了克隆。利用两个片段重叠部分的单一BglⅡ位点,将它们连接成为完整的E2基因,并克隆到PUC19质粒中,获得重 质粒PHCF2。另设计一对引物,以PHCF2为模板扩增出不含信号肽的E2基因,然后将其克隆到表达载体质粒pBV220和PET_28a(+)中,获得重组质粒PBVE2和PETE2,用酶切,PCR和序列分析鉴定E2基因插 相似文献
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本实验以来自广西梧州、博自和北海地区的3株猪瘟野毒和中国标准石门株病毒、疫苗毒为材料,研究其在宿主体内和体外PK-15细胞中增殖的基本特性和差异.结果显示,广西的一部分毒株很可能在毒力和生长特性上已经发生了一些变异.本实验用免疫酶实验检测PK-15细胞中的猪瘟病毒抗原,发现其主要存在于细胞的核膜以及内质网和高尔基体富集的区域. 相似文献
89.
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北京是一个拥有一千多万人口的大型消费城市,改革开放以来,为提高动物性食品的自给率,郊区畜牧业发展很快,其产值已占郊区大农业产值的45%。同时北京又是全国的政治文化中心,食肉是否安全直接影响着我国的国际形象。为此,我市兽医卫生监督机构自成立以来,一直把维护首都畜牧业的发展,保证人民吃“放心肉”作为工作的主导思想和根本目的,在外树形象、内练硬功、建立法律法规体系、加强责任制建设和完善监督检查等方面做了大量工作,得到了各级领导和广大群众的支持和拥护。1 建立完善的法律法规体系1992年底,北京市的肉蛋… 相似文献