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[目的]根据Ikdea对Hycu NPV全基因组序列的分析,筛选出功能还未被研究的、保守性高的ORF72基因。[方法]将ORF72基因构建到原核表达载体p GEX-4T-1上,对其进行诱导表达,优化表达的条件,并通过GST亲和层析色谱柱纯化融合蛋白。[结果]重组质粒p GEX-4T-1-ORF72的酶切检测以及测序结果均正确,证明重组质粒载体构建成功。通过SDS-PAGE凝胶电泳显示,ORF72蛋白能够与p GEX-4T-1载体上的GST标签蛋白进行融合表达,诱导表达后的融合蛋白大小约为38. 2 k Da。优化后的表达条件为:异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导浓度为1. 0 mmol·L-1,最佳诱导温度为25℃,最佳诱导时间为4 h,并且该蛋白在大肠杆菌BL21和Rosetta表达菌株中均能很好的表达,但在Rosetta菌株中表达量更高。[结论]成功构建了p GEX-4T-1-ORF72原核表达载体,确定出ORF72融合蛋白最佳诱导表达条件,诱导表达并纯化出ORF72融合蛋白,为进一步研究其生物功能奠定基础。 相似文献
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[目的]探究伊氏杀线真菌与苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)对松材线虫的联合毒力。[方法]使用Esteya vermicola孢子悬浮液与Bt发酵液处理松材线虫,通过线虫的形态变化、死亡率及死亡速度3个方面测定E.vermicola与Bt联合对松材线虫的影响。[结果]经过E.vermicola孢子悬浮液处理过的线虫会出现内容物渗漏,体腔收缩、弯曲、断裂的现象;高浓度的E.vermicola孢子悬浮液与Bt发酵液联合处理松材线虫可以明显地提高线虫的死亡率,最高可以达到100%;联合处理的线虫死亡速度较快,随着处理时间的延长,死亡率会一直呈上升的趋势。[结论]应用这两种生防微生物在合适的浓度下混配能够在较短时间内提高松材线虫的死亡率。 相似文献
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该文研究了不同碳浓度和碳氮比对松材线虫内寄生真菌Esteya vermicola菌丝生物量和孢子产量的影响.不同碳浓度和碳氮比的20种液体培养基培养E.vermicola 6 d后测定孢子产量和菌丝生物量,当碳浓度为12 g/L、碳氮比为40∶1时,孢子产量最高;碳浓度为12 g/L,碳氮比为5∶1时,菌丝生物量最高.从碳浓度为12 g/L,碳氮比为5∶1的培养基连续培养13 d的E.vermicola生长曲线中发现,培养第7天时菌丝体达到最大值,第11天时孢子产量最高.结果表明,碳浓度和碳氮比对真菌菌丝生长和产孢的影响是不同的. 相似文献
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外植体和培养因子对百合不定芽诱导的影响 总被引:4,自引:0,他引:4
以百合珠芽作外植体进行组织培养,结果表明,在MS+IAA1.0 ̄2.0mg/L+BA0.1 ̄0.5mg/L培养基中,珠芽和珠芽苞片均不经愈伤组织分化出芽,且珠芽苞片的分化时间更短。该实验通过研究不同外植体和培养条件对不定芽诱导的影响,选择出有利于植株再生的适宜条件,目的在于建立高频率和稳定的再生系统。 相似文献
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