牛分支杆菌αg85b基因原核表达载体的构建

为构建牛分支杆菌αg85b基因的重组表达质粒pET-32a-ag85b,采用聚合酶链反应(PCR)从牛分支杆菌AF2122/97基因组DNA中扩增出αg85b基因(978 bp),然后对扩增产物和载体pET-32a以核酸内切酶EcoR Ⅰ及Sal Ⅰ分别进行双酶切;将两种酶切产物以T4 DNA Ligase连接,将靶基因克隆入载体pET-32a,构建重组质粒.将此重组质粒转化人大肠杆菌DH5α,抽提重组质粒首先经EcoR Ⅰ及Sal Ⅰ双酶切检验,再进行PCR扩增鉴定,最后测序鉴定.酶切片段及PCR扩增片段大小均与预期相符,测序结果与GenBank登录序列完全相同.结果表明,成功地克隆并构建了αg85b基因重组表达质粒pET-32a-ag85b.     

业扩报装供电方案编制业务知识(续完)

（2）计量点2。计量方式为高供高计,接线方式为三相三线,计量点电压10 k V。电能表参数3×100 V,3×1.5（6）A。电压互感器变压比10000/100,准确度等级0.2。电流互感器变流比75/5,准确度等级0.2S。执行电价：1—10 k V大工业电价。（3）计量点3。计量方式为高供低计,接线方式为三相四线,计量点电压0.38 kV。电能表参数3×220 V/380 V,3×1.5（6）A。电压互感器变压比■准确度等级■。电流互感器变流比200/5,准确度等级0.5S。执行电价：1—10 kV一般工商业及其他。其中计量点3是计量点1和2的子计量点。     

牛分支杆菌ag85b基因原核表达载体的构建

为构建牛分支杆菌ag85b基因的重组表达质粒pET-32a-ag85b,采用聚合酶链反应(PCR)从牛分支杆菌AF2122/97基因组DNA中扩增出ag85b基因(978 bp),然后对扩增产物和载体pET-32a以核酸内切酶EcoR Ⅰ及Sal Ⅰ分别进行双酶切;将两种酶切产物以T4 DNA Ligase连接,将靶基因克隆入载体pET-32a,构建重组质粒。将此重组质粒转化入大肠杆菌DH5α,抽提重组质粒首先经EcoR Ⅰ及Sal Ⅰ双酶切检验,再进行PCR扩增鉴定,最后测序鉴定。酶切片段及PCR扩增片段大小均与预期相符,测序结果与GenBank登录序列完全相同。结果表明,成功地克隆并构建了ag85b基因重组表达质粒pET-32a-ag85b。     

循环嵌套主题索引的研究

本文向读者展示了一种新的主题标引和主题索引的构思及有关计算机的应用。文章介绍了循环嵌会主题索引的主要标引技术─—以自然语序为基础的引用次序，用叙词、自由词及嵌套受控词，标引具有句法结构及词序固定的词串作索引款目揭示文献主要内容，采用“首先想到”原则确定检索入口词等。索引技术─—嵌套技术与循环轮排相结合，形成循环轮排款目与倒置检索入口词相结合的索引形式，以确保本索引特色的实现。     

猪捷申病毒云南流行株的遗传进化

【目的】了解云南省猪场捷申病毒(porcine teschovirus,PTV)的感染情况及流行毒株分子进化特征,为预防控制该病提供参考。【方法】从云南曲靖、弥勒和大理的猪场随机采集粪便样品,采用RT-PCR方法对PTV 5′-UTR部分基因片段进行扩增、克隆及测序,通过生物信息学软件进行同源性分析并构建系统进化树。【结果】PTV核酸阳性率达27.3%(32/117),测序后去除重复序列得到6条序列。同源性分析结果显示：株间核苷酸同源性为93.2%～98.9%,与参考序列核苷酸同源性为89.7%～100.0%;系统进化树构建结果显示：YNDL-2和YNDL-3与四川省分离的PTV毒株亲缘关系较近;YNQJ-1与日本分离的PTV毒株亲缘关系较近;YNDL-1、YNQJ-4和YNQJ-5聚为一簇,与多米尼加分离的毒株亲缘关系较近,表明同一猪场存在不同血清型感染。【结论】云南猪场PTV感染率较高,流行株间进化关系差异较大,同一猪场存在不同基因型的病毒感染,未体现出明显的地域性。研究结果为PTV致病机理、疫苗研制及防控等奠定了基础。     

2020年猪圆环病毒2型云南流行株的分子鉴定及全基因组序列分析

为了弄清云南省猪圆环病毒2型(PCV-2)的流行和基因变异情况,试验采用PCR鉴定、PCV-2全基因扩增及克隆、PCV-2蛋白氨基酸比对与遗传进化分析、PCV-2 Cap蛋白氨基酸比对分析、PCV-2 Cap蛋白抗原指数预测分析等方法进行研究。结果表明,从43份样品中检测出5份阳性样品,其阳性率为11.63%;成功获得5个大小为1 768 bp的PCV-2全基因序列,分别将其命名为YN PCV2-1、YN PCV2-2、YN PCV2-3、YN PCV2-4、YN PCV2-5;获得的5株毒株与国内外毒株氨基酸之间存在差异,同源性在66.8%～99.1%之间;5株PCV-2 ORF2基因编码的Cap蛋白氨基酸与5株疫苗株也存在多处氨基酸变异;其中YN PCV2-4 Cap蛋白抗原指数与5株疫苗株的Cap蛋白抗原指数差异性不大,而YN PCV2-1、YN PCV2-2、YN PCV2-3、YN PCV2-5的Cap蛋白抗原指数与5株疫苗株的Cap蛋白抗原指数差异性较大,在5～10,25,40～50,70,172～176,210～223区域的抗原指数均不同于疫苗株。说明云南省流行的猪圆环病...     

云南省临沧市猪戊型肝炎病毒流行株遗传进化分析

猪是人兽共患病病原戊型肝炎病毒（HEV）Ⅲ、IV基因型的重要贮存宿主。为了解云南省临沧市猪HEV的遗传进化情况，从规模猪场、猪散养户以及猪屠宰场，随机采集粪便153份、肝脏36份和胆汁54份，采用巢氏PCR进行HEV ORF2基因片段扩增、克隆、测序和生物信息学分析。结果显示：在243份样品中，检出137 bp目标片段阳性61份，阳性率为25.1%(61/243)；对检出的阳性样品进行ORF2部分序列扩增，得到6份348 bp目标片段。6份348 bp目标片段间的核苷酸同源性为86.0%～95.6%，均为基因IV型；与HEVI—VⅢ型代表株的同源性分别为75.0%～81.7%、72.7%～77.0%、72.7%～79.3%、80.5%～94.1%、75.7%～80.7%、75.0%～81.0%、73.3%～80.3%和71.3%～76.1%，与我国人源代表毒株AJ272108BeijingHuman的同源性为81.3%～87.7%；基因亚型分析显示，6份348 bp目标片段中，除1份是4b亚型外，其他5份都属于4a亚型。结果表明，临沧市猪群中存在人兽共患病病原HEV基因Ⅳ型流行，且有通...