体细胞核移植技术生产转基因猪胚胎的研究

以转染绿色荧光蛋白基因的猪胎儿成纤维阳性细胞作为体细胞核移植的核供体,体外成熟卵母细胞为核移植受体构建绿色荧光蛋白转基因克隆猪胚胎,研究供核细胞的处理、注核部位及重构胚融合/激活时间对转GFP克隆胚早期发育的影响.结果显示,胎儿成纤维细胞血清饥饿与非饥饿培养10 d处理组,采用卵周间隙核移植重构胚的卵裂率（82.35%和79.07%）差异不显著(P >0.05);体外培养42~44 h 卵母细胞进行胞质内和卵周间隙注核的重构胚胎,其卵裂率（81.11%和76.80%）差异不显著（P >0.05）;将卵周间隙注射法构建重构胚在0~1 h,2~4 h 和6~8 h 进行融合/激活操作,前2组重构胚卵裂率（75.61%和83.07%）无显著差异(P >0.05),但显著高于第3组（60.00%）的卵裂率(P <0.05).     

不同质量浓度脱落酸对小白菜硫代葡萄糖苷含量的影响

为探讨外源激素对硫代葡萄糖苷（硫苷）的调控,研究了不同质量浓度（0、5、10和20 mg·L^-1）脱落酸（ABA）处理对小白菜 Brassica campestris L. ssp. chinensis (L.) Makino var. communis Tsen et Lee cv. Shanghaiqing生长和硫苷含量的影响.结果表明：不同质量浓度的ABA对小白菜鲜质量没有显著的影响.在10 mg·L^-1 的ABA处理时总脂肪族硫苷含量显著降低,然而5和10 mg·L^-1 的ABA处理显著诱导了总吲哚族硫苷和1-甲氧基吲哚-3-甲基硫苷含量的提高.20 mg·L^-1 的ABA处理显著增加了芳香族硫苷含量.但是10和20 mg·L^-1 的ABA处理显著抑制了小白菜总硫苷含量的增加.10 mg·L^-1 的ABA处理显著降低了总脂肪族硫苷在总硫苷中所占的比例,但显著增加了总吲哚族硫苷和芳香族硫苷的相对百分含量.研究表明,不同浓度ABA处理对小白菜单个硫苷和总硫苷含量及组成具有不同的影响.     

5-氯甲基水杨醛缩苯丙氨酸过渡金属（Ⅱ）配合物的合成及抗菌活性

在乙醇溶剂中合成5-氯甲基水杨醛缩苯丙氨酸新型Schiff碱配体及其过渡金属M（M=Mn²⁺、Co²⁺、Ni²⁺、Cu²⁺、Zn²⁺）配合物.通过元素分析、摩尔电导、红外光谱、紫外光谱及差热-热重方法对其组成和结构进行了表征.采用滤纸片法和试管二倍稀释法试验测定了Schiff碱及其过渡金属配合物对大肠埃希菌 Escherichia coli 和金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus 的抗菌活性.结果表明Schiff碱配体为1∶1型电解质,其组成为KHL·H₂O（L=C₁₇H₁₄O₃NCl^2-）;合成的5种Schiff碱金属配合物均为非电解质类型,组成为［ML(H₂O)］·nH₂O,配体L中的亚胺基氮、酚基氧、羧基氧均与中心金属离子M配位,另有1个水分子参与配位.荧光光谱试验显示,5种配合物的荧光强度均较相应Schiff碱配体的明显增强,其中锌配合物的荧光强度最大.体外抗菌试验结果表明该Schiff碱配体及其过渡金属配合物都具有一定的抗菌活性,而且配合物的抗菌活性强于Schiff碱配体,其中铜配合物对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌均表现出最强的抗菌能力,其对这2种细菌的最低抑菌浓度（MIC）分别为25.0和12.5 μg·mL^-1.     

麻疯树种源/家系生长和结实变异研究

从形态上调查了海南麻疯树 Jatropha curcas 试验基地2年生19个种源195个实生家系的田间生长性状.研究结果表明,麻疯树家系平均成活率为93.65 %,树高为1.97 m,地径为6.85 cm,结实枝数为1.38个,结实数量为20个;变异系数介于11.50%~60.70%.不同省份、种源的各生长和结实性状存在显著差异,具有丰富的遗传变异.尽管只有成活率在家系间有差异显著,但上述5个性状的家系遗传变异系数（GCV）均在1.14%~13.64%之间,表明家系间某些性状仍蕴藏着丰富的遗传变异.相关性分析表明,成活率与其他各性状相关性不明显;而树高、地径、结实枝数及结实数量之间具有显著的相关性.各性状与经纬度及海拔间无明显相关性,种源聚类结实也未发现明显的地理相关性,说明中国境内麻疯树的变异为随机的地理变异模式.     

草鱼 Smad4 基因的克隆、生物信息学分析及反义真核载体的构建

为了研究TGF-β信号传导中的关键蛋白Smad4在草鱼 Ctenopharyngodon idellus 发育过程中的作用,克隆出草鱼 Smad4 基因cDNA全序列,其碱基长度为2 974 bp,其中开放阅读框1 644 bp,编码547个氨基酸.生物信息学分析结果显示,草鱼Smad4蛋白相对分子质量为59 690.3,分子式为C_{2 632}H_{4 073}N₇₅₃O₇₉₁S₂₄,理论等电点为6.5,含有MH1和MH2这2个高度保守的功能结构域.BLAST相似性分析显示,草鱼Smad4蛋白的氨基酸序列与鲤 Cyprinus carpio、斑马鱼Danio rerio的相似性较高,分别为94.23%和92.97%.还将草鱼 Smad4 基因的开放阅读框片段反向插入表达载体pcDNA3.1(+),成功构建了反义 Smad4 基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-Anti-Smad4.     

偏肿革裥菌漆酶基因克隆及启动子序列分析

以优化后的漆酶培养基为基础,通过RT-PCR和RACE技术相结合,从偏肿革裥菌 Lenzites gibbosa 菌株中获得编码漆酶基因的cDNA及Genomic DNA的全长序列,Genomic DNA大小为2 165 bp.通过比较该漆酶基因的cDNA和Genomic DNA的全长序列,发现该基因包含11个外显子和10个内含子.cDNA序列的全长为1 873 bp,其中包含一个完整的ORF,长度为1 563 bp,编码520个氨基酸.序列在氨基酸水平上与彩绒革盖菌 Trametes versicolor 的相似性评价最高,相似性达83%.通过SEFA-PCR的方法,扩增得到漆酶基因起始密码子上游长986 bp的启动子序列.分析表明,该启动子区域上除分布有TATA-box、CAAT-box以及AP2等基本的转录起始元件外,还存在有多个潜在的顺式作用元件序列位点,包括7个MRE元件、2个STRE元件、1个HSEs元件、7个氮因子结合位点等.这些结果表明,不同的外源诱导物可以调节偏肿革裥菌漆酶基因的表达.     

重组抗菌肽Cecropin P1在毕赤酵母X-33中的表达以及纯化后的生物活性分析

为了在毕赤酵母 Pichia pastoris 表达系统中表达猪源Cecropin P1并分析其生物活性,根据Cecropin P1的氨基酸序列和毕赤酵母的密码子偏嗜性设计引物,通过SOEing法合成全基因片段载入到PpicZαA质粒中,酶切线性化重组质粒PpicZαA-cecropin P1后电穿孔导入毕赤酵母X-33中进行整合,经Zection筛选和PCR检测获得高拷贝的转化子.发酵表达后将表达产物经加热预处理和Sephadex G-25层析及冻干浓缩后,Tricine-SDS-PAGE显示明亮单一条带.采用琼脂扩散法对纯化后的抗菌肽的热稳定性、酸碱稳定性、耐胰酶和胃蛋白酶稳定性进行了生物活性分析,结果表明Cecropin P1具有较强的热稳定性、酸稳定性及胃蛋白酶稳定性,但是在碱性环境下和胰酶作用下抑菌活性明显下降.     

盆栽条件下不同氮素利用效率油菜农艺性状的差异

油菜盆栽试验表明,在氮素供应水平较高时,氮高效基因型籽粒产量、籽粒占总生物量的比例和每角粒数均高于氮低效基因型,而茎叶生物量、茎叶占总生物量的比例则显著低于氮低效基因型。油菜氮素利用效率与籽粒产量、籽粒产量占总生物量的比例和每角粒数呈正相关,与营养生长阶段和成熟期地上部分生物量、成熟期茎叶生物量、根系生物量、根冠比、总生物量、茎叶生物量占总生物量的比例和根系生物量占总生物量的比例均呈显著或极显著的负相关。在施氮水平较低的情况下,氮高效基因型籽粒产量、籽粒占总生物量的比例、每角粒数、第一个有效分枝高度和单株有效角果数均显著高于氮低效基因型,而茎叶占总生物量的比例则显著低于氮低效基因型。氮素利用效率与籽粒产量、籽粒产量占总生物量的比例、每角粒数、第一个有效分枝高度和单株有效角果数有显著或极显著正相关关系,而与茎叶占总生物量的比例呈极显著负相关关系。氮低效基因型干物质分配比例对供氮水平比氮高效基因型更敏感。     

三种灌木直播造林试验初报

<正> 柠条、紫穗槐、沙棘是黄土高原主要水土保持树种。长期以来,这三种灌木均以直播造林为主,成活率较低。为解决造林中存在的技术问题,我们于1983—1984年在陕西省淳化县对三种灌木进行了直播造林试验,现将试验情况介绍于下。一、试验区的自然概况试验区设在枣坪沟和润镇沟,地貌均属残塬沟壑区,地形破碎,黄土深厚,水土流失严重。年降水量600.6毫米,降水变率大。年平     

混合感染的情况调查

 应用套式PCR方法对采自广西境内13个市122个不同规模猪场及农村散养户的126份病料,进行了SIV的检测,并对鉴定为SIV阳性的15份病料,再分别进行PRRSV、CSFV、PCV-2、PRV、HPS的检测,以调查广西猪群中SIV与PRRSV、CSFV、PCV-2、PRV、HPS混合感染的情况。结果发现：猪群中SIV感染率为11.9%(15/126),而在所检测的15份阳性病料中,SIV混合感染十分严重,感染率为73.3%(11/15)。混合感染病毒种类最多达四重感染（SIV+PRRSV+CSFV+PCV-2）,占6.67%(1/15);三重感染(SIV+PRRSV+PCV2、SIV+PRRSV+CSFV) 占40%(6/15);二重感染（SIV+PRRSV,SIV+PCV-2）占26.6%(4/15)。调查结果表明广西发病猪群中SIV与PRRSV、CSFV、PCV-2混合感染普遍存在。