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应用实时荧光定量TaqMan RT-PCR检测口蹄疫病毒 总被引:11,自引:0,他引:11
按照口蹄疫病毒(FMDV)聚合酶3D基因序列,设计合成了引物和探针,经各反应务件的优化,建立了实时荧光定量RT-PcR技术,对细胞培养物、水泡液、水泡皮及分泌物、血液中的FMDV进行了特异性检测和敏感性试验。结果,用300nmol/L的引物浓度和200nmol/L探针浓度,获得的CT值较小,而△Rn最大;可检测到相当于9.1TCID50的病毒RNA;与VSV和其他水泡性病毒不发生交叉反应;制作的标准曲线中各浓度范围内有极好的线性关系,且线性范围宽,相关系数为0.984;组内和组间试验重复性的变异系数(CV)分别为5.4%和6.7%;与常规RT-PCR相比较,该方法具有快速、特异、敏感、可定量,并可同时检测大量样品等优点。 相似文献
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赤羽病病毒N基因硫氧还蛋白融合表达载体的构建与表达 总被引:10,自引:3,他引:7
为获得赤羽病病毒(Akabane virus,AKAV)的核蛋白重组抗原,根据其基因序列(S mRNA)设计合成了1对特异性引物,对AKAV N基因进行RT-PCR扩增,产物大小约为696bp,回收纯化后,将其克隆至pMDl8-T质粒栽体中,经核苷酸序列分析,与已报道的多株AKAV编码核衣壳蛋白N的S mRNA基因比较后发现,所测定毒株的核苷酸序列与TIN毒株的同源性高达98.3%,推测的氨基酸同源性为97.6%,证实为AKAV的N基因。将该基因片段亚克隆插入pBAD/Thio TOPO表达栽体,转化TOPl0细胞,成功地构建了AKAV N基因重组表达栽体。经L-araboinose诱导表达,可稳定、高效地表达AKAV核蛋白抗原。表达蛋白为融合蛋白,分子质量约42.5ku,其表达产量约占茵体总蛋白的28%,融合蛋白中含有AKAV特异性核蛋白抗原,可作为ELISA包被抗原。 相似文献
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