P[1]型A群牛轮状病毒VP8重组蛋白的表达与免疫原性研究

【目的】 利用原核表达系统表达P[1]型A群牛轮状病毒(BRVA) VP8重组蛋白,并评价其反应原性与免疫原性。【方法】 根据国内流行毒株RVA/Cow-tc/CHN/SDA2/2018/G6P[1] VP8基因序列(GenBank登录号:MN937517)进行密码子偏好性优化,构建P[1]型BRVA VP8大肠杆菌原核表达系统,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE分析重组蛋白表达形式。镍琼脂糖亲和层析纯化重组蛋白,Western blotting鉴定重组蛋白与兔抗G6P[1]型BRVA血清特异性结合能力,并将P[1]型BRVA VP8重组蛋白免疫兔,首免后2周加强免疫1次,共免疫2次。分别用间接ELISA方法与中和试验评价其免疫原性。【结果】 本研究成功构建P[1]型BRVA VP8重组蛋白的原核表达系统;SDS-PAGE结果显示,高效表达大小为20 ku的P[1]型BRVA VP8重组蛋白,以可溶形式存在;Western blotting结果显示,P[1]型BRVA VP8重组蛋白能与兔抗G6P[1]型BRVA血清特异性结合;间接ELISA结果显示,P[1]型BRVA VP8重组蛋白亚单位疫苗能诱导兔产生抗体,兔首免1周后抗体开始出现并迅速上升,于第3周达到高峰,至第5周仍维持在较高水平;中和试验结果显示,第2次免疫后抗体最高的兔血清对G6P[1]型和G8P[1]型BRVA的中和效价分别为1∶17 783和1∶64。【结论】 本研究成功构建原核表达系统表达P[1]型BRVA VP8重组蛋白,并证实其具有良好的反应原性及免疫原性,为研制BRVA亚单位疫苗奠定基础。     

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兰花炭疽病的初步研究

本文对武汉市首义公园等地的兰花炭疽病（ColletotrichumorchidearumAlleschf,CymbidiiAllesch）进行了病情调查、病原菌鉴定。孢子萌发试验和药剂筛选等项研究结果表明，春兰（CymbidiumgoeringiiRchb.f.）较感病，惠兰（CymbidiumfaberiRolfe）次之，建兰（CymbidiumensifoliumCL.）和墨兰（Cymbisiumsinense（Andr）Wild）较抗病;兰炭疽病菌的分生孢子在清水中萌发率很低，一定的营养物质对其有刺激作用;兰炭疽病菌主要通过伤口侵入叶片，病菌的潜育期为15d;5种杀菌剂中多菌灵、炭疽福美这两种在室内药剂筛选中对兰花炭疽病菌有良好抑制作用.