华南沿海长鳍篮子鱼不同地理群体的遗传多样性分析

对南海北部沿岸及东海南部9个不同地理群体的长鳍篮子鱼(Siganus canaliculatus)进行遗传多样性及遗传结构分析。484条DNA D-loop 序列分析结果显示：序列长度约 828bp,包含57个变异位点,92个单倍型；所有群体总的单倍型多样性指数(Hd)和核苷酸多样性指数(π)分别为0.80798和0.00405；群体内的遗传距离 0.00386～0.00532,群体间的遗传距离 0.00383～0.00482,群体间的分化指数为-0.01935～0.00759,各种分组的AMOVA分析均显示群体内变异比例超过100%；Fu"s Fs检验值为显著负值(-25.53678,p<0.01),核苷酸错配分布图呈单峰,吻合度检验数值较小且不显著,这些结果均提示长鳍篮子鱼可能经历过种群扩张事件,推测扩张时间约在4.74万年～1.18万年前。综上,南海北部沿岸及东海南部9个长鳍篮子鱼群体间不存在显著的地理结构和谱系结构,可划归一个管理单元进行种质资源保护。     

尼罗罗非鱼Lck多克隆抗体的制备及鉴定

[目的]制备及鉴定尼罗罗非鱼淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(Lck)多克隆抗体,为深入研究罗非鱼Lck蛋白功能及其免疫机制打下基础.[方法]采用无缝克隆技术构建重组质粒pET-B2m-Lck,然后转入大肠杆菌B21(DH3)中进行诱导表达;经Ni-NTA树脂层析柱纯化后,以纯化的融合蛋白免疫日本大耳白兔制备Lck多克隆抗体,并采用Western blotting和ELISA检测多克隆抗体的特异性和免疫效价.[结果]尼罗罗非鱼Lck蛋白的亲水性均值(GRAVY)为-0.454,属于亲水性蛋白,具有较丰富且分布均匀的潜在抗原表位位点,无典型的跨膜区.经原核载体诱导表达获得的融合蛋白分子量约67.0 kD,主要以包涵体形式存在.免疫日本大耳白兔后可获得效价为1:256000的Lck多克隆抗体,且该多克隆抗体能特异性识别Lck蛋白.经Protein G亲和层析柱纯化的抗体浓度在10 mg/mL以上,纯度约95%,抗体纯化效果良好.[结论]经原核载体诱导表达获得的尼罗罗非鱼Lck融合蛋白具有良好的免疫原性,其免疫日本大耳白兔后获得的多克隆抗体具有高效价和特异性,可用于细菌感染罗非鱼后机体免疫机制的研究.     

小窝流水养鱼技术要点

小窝流水养鱼具有占地少、投资小、见效快、容易操作等特点,所产的鱼体型好、色泽好、味道好、口感好,达到绿色生态的品质,市场售价40元/kg以上,深受消费者欢迎。广西灵山县地形以山地和丘陵为主,一年中气候温和,光照充足,雨量充沛,山溪流水资源丰富,落差大,非常适合发展小窝流水养鱼。该如何科学规划,营造一个健康养殖的生态环境和模式?笔者结合广西科技基地和人才专项《水产产业科技服务团队建设与服务示范》项目实施和生产实践经验,总结出灵山县小窝流水养鱼技术要点。     

人工海水对罗氏沼虾幼体生长发育及能量收支影响初探

通过自制人工海水培育罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)幼体,与天然海水对比分析人工海水特性及养殖过程中的水质状况,探究人工海水对罗氏沼虾幼体生长发育及能量收支的影响。试验在广西南宁国家级罗氏沼虾良种场进行,罗氏沼虾幼体和饵料丰年虫无节幼体均由该良种场提供,罗氏沼虾幼体规格(湿重)为(1.476±0.050)g,共80万尾;在幼体开始培育前配制人工海水1 000 kg,配比为海盐:MgSO_4∶CaCl_2∶KCl∶H_3B_3O_3∶KBr∶ETDA∶生石灰=2000∶600∶72∶36∶24∶4∶1∶2;设置天然海水为对照组,试验组及对照组分别设置4个重复。结果显示,人工海水中,Mg~(2+)∶K~+∶Ca~(2+)=3∶1∶1,与北部湾天然海水接近,且水质无毒性作用;与天然海水相比,人工海水培育的罗氏沼虾幼体成活率为95.00%,蜕皮率为16.82%,并提高了幼体的特定生长率和食物转化率,降低了摄食率;幼体在天然海水中生长和脱壳所用能量[(18.83±1.35)%和(0.99±0.16)%]分别显著低于人工海水[(19.64±0.51)%和(1.47±0.06)%](P0.05);而在呼吸、排泄和排粪上的能量比例无显著性差异。研究表明,自制的人工海水对罗氏沼虾幼体的生长发育、蜕皮具有促进作用。     

倒刺鲃的人工繁殖技术研究

2002~2006年,对倒刺鲃的性腺发育和人工繁殖技术进行研究。了解到倒刺鲃属于分批产卵型,相对怀卵量为10~12粒/g,采用混合激素催产,其中以PG LRH-A2 DOM试验组效果较为理想。试验共获苗55.3万尾,在25~30℃的水温下,效应时间为18~24 h,平均催产率为73.7%,平均受精率为69.6%,受精卵经34 h出膜,48 h仔鱼开始平游,孵化率为66.6%。     

卵形鲳JunB基因克隆及其胚胎组织表达分析

【目的】明确卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）JunB基因（ToJunB）在胚胎发育过程中的表达规律,为揭示JunB基因在鱼类胚胎发育过程中的作用机制打下基础。【方法】采用RT-PCR扩增ToJunB基因编码区（CDS）序列,通过ProtParam、NetSurfP 2.0、TMHMM、SignalP、PSORT及NetNGlyc 1.0等在线软件进行生物信息学分析,并采用荧光定量PCR检测ToJunB基因在卵形鲳鲹17个胚胎发育时期（受精卵、2-细胞期、8-细胞期、16-细胞期、32-细胞期、64-细胞期、多细胞期、高囊胚期、原肠早期、原肠中期、原肠末期、胚胎形成期、眼囊期、耳囊期、心脏跳动期、晶体出现期和初孵仔期）的表达情况。【结果】克隆获得的ToJunB基因（1777 bp）包含344 bp的5'端非编码区（5'-UTR）、954 bp的开放阅读框（ORF）及479 bp的3'端非编码区（3'-UTR）,共编码318个氨基酸残基;其编码蛋白分子量为35.03 kD,理论等电点（pI）为8.26,呈碱性;总平均疏水指数（GRAVY）为-0.567,为亲水性蛋白。ToJunB蛋白无跨膜结构和信号肽,主要定位于细胞核,属于非分泌型蛋白,在第39、129和168位氨基酸处各存在1个潜在的糖基化位点;其二级结构中α-螺旋占35.67%、延伸链占14.33%、无规则卷曲占50.00%。基于JunB氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树显示,卵形鲳鲹与黄尾鰤的遗传距离最近,均隶属于鲈形目鲹科。ToJunB基因在胚胎发育前期（受精卵至原肠早期）的相对表达量较高,至原肠中期达最高值,在胚胎发育后期（原肠末期至初孵仔期）的相对表达量均较低,且ToJunB基因在受精卵至原肠中期共10个发育时期的相对表达量极显著高于胚胎发育后期的7个时期（P<0.01）。【结论】ToJunB基因在卵形鲳鲹胚胎受精卵至原肠早期的相对表达量较高,于原肠中期达最高值后迅速降低,原肠末期至初孵仔期的相对表达量均较低,说明JunB基因在卵形鲳鲹胚胎发育的细胞分裂和增殖过程中发挥重要作用。     

饲料脂肪水平与黄颡鱼幼鱼生长、体营养成分及肌肉脂肪酸组成的关系

为研究饲料脂肪水平对黄颡鱼幼鱼生长性能及肌肉脂肪酸组成的影响,配制不同脂肪水平的颗粒饲料饲喂幼鱼,在基础饲料中分别添加0%、2%、3.5%、5%、6.5%的豆油,配制成5组颗粒饲料分别饲喂5组黄颡鱼幼鱼60 d。结果表明:①3、4、5组黄颡鱼幼鱼增重率显著高于1、2组(P0.05);②各试验组鱼肌肉脂肪酸组成和饲料有较大的相关性及差异性,随着饲料脂肪水平的提高,各组鱼体肌肉与各组饲料中的SFA和MUFA相对含量迅速降低,C182n6、C205n3、PUFA和HUFA则均迅速提升;各组鱼体肌肉组织中的SFA、MUFA相对含量高于相应饲料中同类脂肪酸,而PUFA及n-6 PUFA则低于相应饲料;③C182n6相对含量以5组最高(14.36%);1组鱼体肌肉C205n3(0.77%)相对含量显著低于其他各组(P0.05);综合各项生长指标,4、5组黄颡鱼幼鱼生长性能较好;鱼体中还可能存在C181n9向C161n7和C181n7的转化。     

罗氏沼虾健康育苗技术研究

【目的】掌握罗氏沼虾健康育苗的关键技术,为罗氏沼虾育苗生产提供科学参考。【方法】2010年6月,在127.3m3水体中投放2700.00万尾罗氏沼虾幼体进行健康育苗试验,综合育苗幼体PCR病毒检测、控制适中育苗密度、加强水质调控、禁止使用抗生素等主要技术措施,培育23～27d。【结果】90%幼体变态,获得淡化虾苗1721.30万尾,单位水体产量13.50万尾/m3,平均育苗成活率为63.69%,平均运输成活率为86.0%。经检测,虾苗种质量达到罗氏沼虾苗种标准（DB45/T515-2008）的要求。【结论】采用健康育苗技术可有效提高罗氏沼虾苗质量及养殖成活率,其健康育苗技术主要包括：保持育苗水质良好、控制中等的育苗密度（15.00万尾/m2）、禁止使用抗生素、不滥用药物及防治育苗病害等措施。     

乌苏里拟鲿对水温环境的适应性

[目的]明确乌苏里拟鲿对水温环境的适应性,为将其引种到我国南亚热带地区推广养殖提供参考依据.[方法]探究分析乌苏里拟鲿对水温突变温差的极限适应性,并研究不同水温条件下的摄食强度、繁殖和血液指标.[结果]乌苏里拟鲿对从高温突变到低温环境的忍耐力温差在8.0℃以内,而对从低温突变到高温环境的忍耐极限温差为7.0 ℃.乌苏里拟鲿摄食率与水温呈抛物线相关,对应的线性回归方程为y=-0.0132x2+0.6953x-5.0973(R2=0.7661).在11.8~30.3 ℃的水温范围内,乌苏里拟鲿生长常数(GC)为0.1464~0.7620,基本不受高温环境的影响.在25.8 ℃水温条件下,乌苏里拟鲿的催产率、受精率、孵化率及出膜30 d后存活率均最高,分别为73.4%、84.1%、82.6%和75.7%,即乌苏里拟鲿孵化的最佳水温约25.0℃.乌苏里拟鲿在30.0℃以内的水温条件下尚能保证机体组织器官的完整性,并发挥正常的生理功能.[结论]乌苏里拟鲿对水温环境具有极好的适应性,对±7.0℃的温差有很好的应激适应性,可引种到我国南亚热带地区推广养殖,但在运输和越冬养殖过程中,若温差应激的强度过大或时间过长,其生理适应机制可能会失效,因此在乌苏里拟鲿引种养殖过程中应予以重视.