副猪嗜血杆菌的分离与签定

副猪嗜血杆菌是猪革氏病的病原菌,属于巴氏杆菌科嗜血杆菌属。副猪嗜血杆菌主要感染小猪,特别是4～6周龄的断奶仔猪,临床多表现为急性败血症,或者转为慢性,表现为跛行、食欲减退等。为有效地开展本病的防治研究,进行了副猪嗜血杆菌的分离工作。笔者从浙江某养殖场的“猪高热综合征”样病例中分离到1株细菌,经PCR扩增和16SrRNA鉴定,确定为副猪嗜血杆菌。现将临床发病及分离鉴定情况报道如下。     

多杀性巴氏杆菌鉴定与特性分析的分子生物学方法

1881年，巴斯德（Pasteur）首次描述了禽霍乱和牛及其它动物的出血性败血症，并分离得到巴氏杆菌。1885年由Kitt分离培养得到病源菌，直到1920年才将分离物做了较为可靠地鉴定，并发现人也可被感染。1887年，为了纪念巴斯德在微生物方面所做的工作，将此菌命名为巴斯德氏菌。其中多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida，P．m）可感染猪、马、牛、家禽等多种动物，     

羊抗鸡酶标二抗用于鹅血清抗体检测的研究

通过比较鸡IgG与鹅IgG的相似性,探讨羊抗鸡酶标二抗用于检测鹅血清抗体的可行性。用辛酸-硫酸铵盐析法提纯鸡、鸭、鹅、小鼠、兔、猪、羊的IgG,比较上述动物IgG粗提物的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱,并用蛋白免疫转印法定性检测上述动物血清IgG与羊抗鸡酶标二抗的结合情况;然后用直接ELISA方法分析不同动物血清分别与抗鸡酶标抗体和抗鹅酶标抗体结合程度的差异;最后用间接ELISA方法比较两种酶标抗体对同一鹅群大肠杆菌抗体的检测结果。结果表明,鸡、鸭、鹅IgG具有较大的相似性,都能够与抗鸡酶标二抗结合;羊抗鸡酶标二抗可以替代抗鹅酶标二抗来检测鹅的血清抗体。     

鹅圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

为建立鹅圆环病毒(GoCV)快速检测方法,本研究根据GenBank中登录的GoCV全长基因组序列,在其保守基因区设计并合成1对引物,采用荧光嵌合法(SYBR GreenⅠ)建立检测GoCV的实时荧光定量PCR(real-time PCR)方法。以本实验室构建的含有GoCV永康株(GoCV-yk01)全长基因组的重组质粒为标准模板,经退火温度、循环次数等反应条件的优化,绘制GoCV real-time PCR的标准曲线,并进行融解曲线分析。试验结果表明:建立的GoCV real-time PCR方法特异性强,检测范围广(Ct值范围12～32),最低检出病毒拷贝数为1.46×102。该方法能够对组织中病毒进行定量检测,为快速检测GoCV提供了有效的技术手段。     

仙居鸡抑制素/活化素β_A亚基成熟区的cDNA克隆及序列分析

本研究根据发表的来航鸡抑制素 /活化素βA 亚基序列设计引物 ,运用RT PCR技术从仙居鸡卵泡的颗粒细胞总RNA中扩增出抑制素 /活化素βA 亚基成熟区序列 ,并进行了克隆和测序。结果显示 ,所测鸡成熟βA 亚基是由 116个氨基酸 (aa)残基组成的蛋白质 ,共有 9个半胱氨酸残基 ,与发表的鸡及哺乳类相应序列对比 ,其核苷酸序列的同源性分别为 99.2 %和 81%～ 85 .2 % ,其预测氨基酸序列的同源性分别为 10 0 %和 96 .6 %～ 97.4 % ,且所测鸡 βA 亚基成熟区半胱氨酸残基的数目和位置与发表的鸡和哺乳类相同 ,说明该亚基的序列及结构在不同物种间具高度保守性 ,揭示其可能具重要的生理功能     

鳖的嗜水气单胞菌的分离及其特性鉴定

从杭州市某甲鱼养殖场发生后咱持续性慢性不明传染病病死甲鱼中，分离到多株细菌。用玻板凝集试验筛选出与嗜水气单胞菌抗血清发生强阳性反应的两株细菌，经形态、染色、生长特性研究及生化反应鉴定，确定这两株细菌均为嗜水气单胞菌，但其中一株具毒力，在血琼脂上呈β－溶血，能在４小时内致死小白鼠，而另一株无毒力，不溶血。     

番鸭呼肠孤病毒ZJ99株σC基因在甲醇酵母中的表达

将番鸭呼肠孤病毒ZJ99株σC基因插入到酵母表达载体pPIC9K内,转化大肠杆菌TG1,挑取阳性克隆,获得酵母表达重组质粒pPIC9K-σC。用DraⅠ酶切线性化重组表达质粒pPIC9K-σC和对照质粒pPIC9K,电转化至甲醇酵母GS115感受态细胞内,经G418抗性筛选和PCR鉴定,获得了2株pPIC9K-σC酵母阳性整合子和2株pPIC9K空载体对照酵母阳性整合子。分别挑取1株进行甲醇诱导表达,SDS-PAGE检测发现pPIC9K-σC酵母整合子在不同时段的诱导表达上清液中均有可见的目的蛋白条带,分子质量与预计大小相符,而对照pPIC9K酵母整合子的诱导表达上清液中没有相应的蛋白条带。说明番鸭呼肠孤病毒ZJ99株σC基因真核甲醇酵母表达体系构建成功,目的σC蛋白在酵母中能够有效地分泌表达。     

规模猪场不同口蹄疫疫苗的免疫效果试验

为比较猪场不同口蹄疫疫苗的免疫效果,选择健康仔猪134头,选用猪口蹄疫O型合成肽疫苗及由政府招投标的3家公司生产的猪口蹄疫(O型Ⅱ)灭活疫苗进行免疫效果试验。经试验,134头健康仔猪在60日龄、90日龄、120日龄分别注射不同种类的疫苗,于免疫后30 d抽取血样进行抗体检测。结果表明,经二免后的抗体合格率均能达到农业部规定的抗体合格率≥70%要求,表明采用O型合成肽疫苗及不同厂家生产的O型Ⅱ灭活疫苗经二免后猪群都能产生良好的抗体保护率。     

鸡新城疫病毒V4株一些特性的研究

对鸡新城疫病毒Ｖ４株的毒价，血凝稳定性和致病指数进行了研究，结果显示ＮＤＶ Ｖ４株的毒价（ＥＩＤ）为１０＾－￣１０＾１０．１／０．１ｍＬ，２５存放２８ｄ，３７℃存放１２ｄ及反复冻融７次ＨＡ滴度不变，其１日龄雏鸡脑内接种，６周龄鸡静脉接种发病指数和鸡胚平均致死时间分别为：ＩＣＰＩ＝０．００，ＩＶＰＩ＝０．００，ＭＤＴ〉１５０ｈ。     

鳖的嗜水气单胞菌的分离及其特性鉴定

从杭州市某甲鱼养殖场发生的一种持续性慢性不明传染病病死甲鱼中，分离到多株细菌，用玻板凝集试验筛选出与嗜水气单胞菌抗血清发生强阳性反应的两株细菌，经形态、染色、生长特性研究及生化反应鉴定，确定这两株细菌均为嗜水气单胞菌，但其中一株具毒力，在血琼脂上呈β－溶血，能在４小时内致死小白鼠，而另一株无毒力，不溶血