3种瓜类枯萎病菌Fusarium oxysporum的分子检测

 Fusarium oxysporum is one of the most important phytopathogens and cause Fusarium wilt disease in cucumber, watermelon and melon, etc.In this study, a pair of species-specific primers Fc-1 and Fc-2 was synthesized based on differences in internal transcribed spacer sequences of Fusarium genus.With the primers, a specific 315 bp PCR product was amplified from five F.oxysporum isolates isolated from cucumber, watermelon and melon, infected cucumber and watermelon tissues, while no product was obtained from other fourteen fungi, healthy cucumber and watermelon tissues.The detection sensitivity is 100 fg for genomic DNA of F.oxysporum and 1 000 spores/g soil for the soil pathogens.In contrast, the nested PCR with two pairs of primers(ITS1/ITS4 and Fc-1/Fc-2) increased the sensitivity by 100-fold.In addition, one-step PCR could also detect F.oxysporum in symptomless cucumber root of 7 dpi(days post inoculation) and in infected cucumber and watermelon tissues at the early stage of disease development.Therefore, the developed PCR-based method enabled rapid, sensitive and reliable detection of F.oxysporum.It also provides the detection method for early monitoring and diagnosis of the pathogen as well as the plant disease management guidance.     

解淀粉芽孢杆菌TF28对设施连作黄瓜根际土壤酶活性和微生物的调节

为研究解淀粉芽孢杆菌TF28对设施连作黄瓜根际土壤环境影响,以液体(L)、颗粒(P)和复合(LP)3种处理与没有施用TF28的空白对照进行对比试验,测定设施黄瓜生育指标、土壤酶活性及微生物种群数量。结果表明,移栽后2～3周后L、P和LP 3种处理株高分别提高18.78%、17.27%、11.88%;L和LP 2种处理对黄瓜根须数量与空白对照相比分别提高35.20%和48.66%。移栽2～8周,与空白对照相比,P处理对碱性磷酸酶活性、酸性磷酸酶活性高69.43%、77.43%,L处理脲酶活性提高40.99%,LP处理过氧化氢酶活性提高163.24%。与空白对照相比,3种处理都能显著增加土壤细菌和放线菌数量,降低真菌数量。这说明TF28的添加对连作黄瓜中的酶活性、微生物数量及群落结构有明显的调节作用。     

防治人参土传病害生防菌株X1和B59培养基筛选及发酵条件的优化研究

通过正交试验和单因素试验对防治人参土传病害的生防菌B59和X1菌株的培养基组成和培养条件进行优化研究。B59菌株培养基成分和最适培养条件为:葡萄糖15g/L,牛肉膏5.0g/L,NaH2PO4+Na2HPO45g/L,pH8,250mL三角瓶中装入25mL培养基,接种量为1.5%,30℃,160r/min培养。X1菌株的最佳培养基成分和培养条件为:葡萄糖15g/L,牛肉膏+酵母膏(1∶1)10.0g/L,NaH2PO4+Na2HPO42.5g/L,pH8,250mL三角瓶中装入25mL培养基,接种量为1%,25℃,160r/min培养。优化培养的枯草芽孢杆菌X1和B59菌株对人参腐皮镰刀菌抑菌能力显著提高。     

污泥好氧堆肥中功能菌群的分离筛选

开展了污泥堆肥中功能菌株筛选的研究,分别以污泥堆肥物料中的各种大分子有机物为目标底物,筛选各自的降解菌株,通过初筛和复筛(酶活性强弱)选择最佳功能菌株,优化组合获得污泥堆肥的功能复合菌群。该研究可为污泥堆肥的功能菌株优选及其工艺优化提供理论依据和技术支持。     

抗菌肽Lactoferricin B的原核表达及其纯化

牛乳铁蛋白活性多肽(Lactoferricin B,LfcinB)是一种阳离子型抗菌肽,因其具有多种生物学功能,现已被认为具有能够替代传统抗生素的发展前景。然而,由于传统的分离制备方法存在诸多弊端,所以基于基因工程的原核表达技术在制备高纯度和高效表达的该蛋白方面具有极其深远的意义。研究旨在摸索出一套完整的利用原核表达技术制备LfcinB的分子生物学方法。依据大肠杆菌密码子偏爱性的原则,设计了LfcinB的基因序列,通过人工合成的方法获得该基因的优化序列,借助Bam HI和Sal I双酶切、连接等手段将其构建到原核表达载体pGEX-4T-2上,获得重组表达载体pGEX-4T-2-LCB,将该载体转化E.coli Rosetta(DE3)。使用IPTG诱导,结果发现LfcinB在大肠杆菌中表达量超过20%。通过一系列蛋白纯化技术分离得到纯度达到95%以上的LfcinB融合蛋白。抑菌试验结果表明,重组抗菌肽LfcinB融合蛋白具有很好的抑菌活性。研究结果为人们使用基因工程技术制备抗菌肽LfcinB提供了具有重要参考价值的技术路线和理论依据。     

植物病原真菌分子诊断技术研究进展

对植物真菌病害分子诊断技术的种类、特点、应用情况、存在的问题及未来发展趋势进行了综述,旨在建立一种快捷准确的植物真菌病害分子诊断技术。以最大限度地减少农业损失。     

黑龙江省农业微生物发展困境及振兴对策

农业微生物是农业生产、农产品加工、农业生物技术和农业生态环境保护等领域中应用的微生物的总称。它们在物质转化和能量循环中发挥着关键作用,并被认为是推动农业产业高质量发展的关键引擎。为实现农业微生物产业和科学研究的可持续发展,从推动农业微生物行业振兴的角度,阐述了农业微生物在应用领域、技术发展、资源保护和菌种保藏方面的研究现状,提出了农业微生物研究面临多方面的问题,包括知识产权风险、科研创新水平不高、监管监测体系不完善,以及缺乏农业微生物信息数据库等。从而提出了进一步加强黑龙江省农业微生物行业振兴的对策建议,即开展系统性科学攻关、加强生物安全实验室平台建设、促进形成产业集群、加强政策保障等。     

内生细菌TF28诱导番茄抗病分子机制研究

为了解内生解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens TF28诱导番茄抗病分子机制,本文采用相对定量RT-PCR方法研究内生细菌TF28对番茄抗病信号传递途径中促分裂原活化蛋白激酶基因MAPK和转录因子WRKY基因表达的影响,采用双向电泳、质谱检测和生物信息学等蛋白质组学技术研究接种菌株TF28后番茄叶片差异蛋白的表达情况。结果表明接种菌株TF28后,番茄叶片中的基因MAPK和WRKY上调表达,基因WRKY表达增幅高于基因MAPK,2个基因均在接种后2 d表达量最高。从接种内生细菌2 d后的番茄叶片中分离到373个蛋白点,与对照相比,有23个蛋白点特异表达,18个蛋白点上调表达,53个蛋白点下调表达,280个蛋白表达量与对照相当,对14个特异表达蛋白进行质谱分析和蛋白数据库检索,9个与抗病相关,3个与品质相关,2个与生长调控相关。     

解淀粉芽孢杆菌TF28不同施用方式对棚室连作黄瓜根际土壤细菌多样性的影响

为了研究棚室黄瓜连作障碍,利用微生物菌剂改善连作产生的土壤问题,将解淀粉芽孢杆菌TF28以液体(L)、颗粒(P)、复合(LP)3种形式施用,取苗期、花期、盛果期、结果后期土壤样品,采用高通量测序技术对施用TF28与不施用TF28(CK)处理的土壤细菌多样性、群落组成进行比较分析,并对菌群代谢功能进行预测。结果显示,变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)、芽单胞菌门(Gemmatimonadetes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、绿弯菌门(Chloroflexi)、酸杆菌门(Acidobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、螺旋体菌门(Saccharibacteria)为8个优势菌门。Haliangium、Asanoa、Microvirga 3个属与CK差异明显。结果3种处理的菌群功能预测结果比CK好,其中P处理预测结果比其他2种处理好,对棚室连作黄瓜土壤调节稳定。本研究为改善棚室连作黄瓜障碍,实现设施蔬菜持续稳定健康生产提供理论依据。     

绿色木霉预处理协同外源氢对秸秆厌氧发酵产气性能提升的影响

以提高玉米秸秆预处理后还原糖含量和厌氧发酵产甲烷性能为目的，采用绿色木霉进行玉米秸秆预处理，通入外源氢气加强厌氧发酵产甲烷性能。实验结果表明，当预处理温度为36℃,时间为2 d,初始料液比为1∶1的绿色木霉处理条件时，还原糖含量最高，为27.66 mg·g^-1,预处理后累计产甲烷量比未经预处理实验组提高了39.0%,绿色木霉加氢组累计产甲烷量为木霉预处理组的2.6倍。表明绿色木霉预处理对玉米秸秆厌氧发酵有促进作用，外源加氢可有效提升厌氧发酵甲烷产量。