40种中草药对美洲鲥源温和气单胞菌的体外抑菌作用研究

为筛选出对美洲鲥（Alosa sapidissima）源温和气单胞菌（Aeromonas sobria）体外抑菌效果较好的中草药，采用牛津杯打孔法测定了温和气单胞菌对乌梅（Fructus mume）、苏木（Caesalpinia sappan）、五倍子（Rhus chinensis）等40种中草药的敏感性，并进一步通过微量二倍稀释法以及涂布平板法测定了具有抑菌作用的中草药对温和气单胞菌的最小抑菌质量浓度（Minimum Inhibitory Concentration, MIC）和最小杀菌质量浓度（Minimum Bactericidal Concentration, MBC）。结果表明：温和气单胞菌对苏木、乌梅、黄连、石榴皮（Punica granatum）、五倍子和地榆（Sanguisorba officinalis）6种中草药为高度敏感，其抑菌圈直径为20.00～28.00 mm，其中苏木的抑菌作用最强，抑菌圈直径为（27.12±0.78）mm，对赤芍（Radix paeoniae rubra）、连翘（Forsythia suspensa）、白头翁（Pulsatilla chin...     

鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF66基因DNA疫苗载体的构建及其免疫效果

鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2)能够引起鲫大量死亡,严重威胁我国水产养殖业的健康发展,目前,针对CyHV-2尚无有效的商业化疫苗或治疗措施。为构建CyHV-2DNA疫苗,本研究将其衣壳蛋白ORF66编码基因克隆至pVAX1真核表达载体上,构建重组质粒pVAX-ORF66。此外,在BL21(DE3)pLysS中对ORF66蛋白进行了原核表达,表达蛋白经纯化后免疫新西兰白兔制备了ORF66特异性抗体。酶联免疫吸附(ELISA)检测显示,制备抗体效价达1∶20000以上。将pVAX-ORF66质粒转染金鱼脑细胞系(GFB),利用制备的ORF66抗体进行间接免疫荧光(IFA)检测,结果显示,ORF66蛋白可以在细胞中大量表达,且主要定位于细胞质中。将pVAX-ORF66质粒肌肉注射鲫后进行CyHV-2免疫保护实验,结果表明,其相对免疫保护率达55.6%。本研究针对CyHV-2构建了一种制备简单、成本低廉的DNA疫苗,为鲫造血器官坏死病的免疫预防及感染分子机制研究奠定了前期实验基础。