鸽Ⅰ型禽副粘病毒F基因克隆及序列分析

利用ＲＴ－ＰＣＲ技术获得了编码鸽Ⅰ型禽副粘病毒ＧＤ－Ｐ１分离株Ｆ０裂解位点附件８８４ｂｐ的Ｆ基因ｃＤＮＡ片段,并将其克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ Ｅａｓｙ质粒中,获得了重组质粒Ｔ－ｐＰＭＶ－Ｆ－Ｉ,核酸序列测定和分析表明,该片段与新城疫病毒强毒株Ｆ４８Ｅ９和ＨＥＲ／３３相应区域的同源性分别为８７．５％和８８．１９％,与新城疫病毒弱毒株ＬａＳｏｔａ和Ｂ１株的同源性分别为８３．８３％和８４．１５％。该病毒Ｆ０裂     

鸡传染性支气管炎病毒D41株S1基因部分序列的测定

通过反转录及变退火温度ＰＣＲ方法扩增出含先导序列的ＩＢＶ广东地方分离株Ｄ４１的Ｓ１基因ｃＤＮＡ,长度约１．７ｋｂ．利用双脱氧链终止法对其５′端测序,准确读到３４２个碱基,并确定了翻译起始密码子ＡＴＧ的位置．     

鸡源九次跨膜蛋白TM9SF2基因克隆及其蛋白特征分析

根据鸡九次跨膜超家族成员2(chicken transmembrane 9 superfamily 2,chTM9SF2)预测序列设计引物，以原代鸡胚成纤维细胞CEF、鸡成纤维细胞系DF1和鸡肝癌细胞LMH的cDNA为模板，采用PCR方法扩增chTM9SF2编码序列，并利用MEGA 7.0、Clustal W、SWISS-MODEL等生物信息学工具对鸡、鸭、人、鼠等不同物种来源的九次跨膜超家族成员2(transmembrane 9 superfamily 2,TM9SF2)进行遗传进化、同源性、结构域及结构模拟等分析；进而通过构建真核表达质粒，利用Western blot、激光共聚焦显微镜探究chTM9SF2的表达和亚细胞定位。结果显示，分别在3类细胞中均可成功获得编码序列一致的chTM9SF2基因，与禽类的同源性最高，且高度保守；该基因能够在DF-1细胞中表达，且主要定位于晚期内体或溶酶体膜。结果表明，成功扩增获得chTM9SF2基因，并在DF-1细胞成功表达，分析其定位于晚期内体或溶酶体膜，为进一步研究chTM9SF2的生理功能及在病原感染中的作用奠定了基础。     

75株蛋鸡源沙门菌的MLST分型与耐药性分析

旨在掌握2017年7月至2019年5月期间云南地区蛋鸡源沙门菌血清型、药物敏感性及毒力基因携带等基本情况。无菌采集发病鸡肝组织，共分离到沙门菌75株，对分离株进行MLST分型、药物敏感性及相关耐药基因和毒力基因检测。结果显示，MLST鉴定到ST78序列型鸡伤寒沙门菌54株(72.00%)、ST92序列型鸡白痢沙门菌21株(28.00%)；分离株对青霉素的耐药率为100%，对其它抗生素的耐药率分别为: 四环素26.67%、强力霉素26.67%、复方新诺明22.67%、阿莫西林18.67%、氨苄西林16.00%、恩诺沙星14.67%、链霉素8.00%、环丙沙星2.67%、庆大霉素1.33%，共存在7种耐药谱型，28.00%的菌株表现为多重耐药，且集中于鸡伤寒沙门菌；耐药基因tetA、sul2和blaTEM的检出率分别为26.67%、10.67%和8.00%；毒力基因mogA、mgtC、bcfA、araB、stn和spvC的检出率均高达100%，而spvB的检出率为 89.33%。结果表明，鸡伤寒沙门菌和鸡白痢沙门菌为云南地区蛋鸡源沙门菌主要流行血清型，多重耐药情况严重，耐药基因与毒力基因检出率较高。     

广东地区 H9N2 亚型禽流感病毒 HA 和 NA基因生物学特征分析

【目的】监测广东地区 H9N2 亚型禽流感病毒（Avian Influenza Virus, AIV）的遗传变异和分子进化趋势，为我国 H9N2 亚型 AIV 的防控提供参考。【方法】对 2022 年广东地区 3 株 H9N2 亚型 AIV 的 HA 和 NA 基因进行扩增、克隆、测序，使用 DNAStar、PhyloSuite 软件进行序列拼接和比对，再运用 MEGA、Megalign、 NetNGlyc 1.0 Server 等软件，对其核苷酸和氨基酸序列进行遗传进化、核苷酸同源性分析，以及受体结合、蛋白活性、耐药性和糖基化等关键位点分析。【结果】系统发育树和核苷酸同源性分析结果显示，3 株分离株的 HA 和 NA 基因分别属于 h9.4.2.5 分支和 1 分支，与早期毒株的核苷酸同源性分别为 81.6%~91.7% 和 88.2%~91.2%，分别命名为 h9.4.2.5c 分支和 1.2 分支；核苷酸和氨基酸序列分析发现，HA 裂解位点为 PSRSSR ↓ GLF，受体结合位点产生 I155T、H183N、A190T/V、T212I、Q226L、Q227M 突变，糖基化位点产生 218N 非糖基化和新增 313N 糖基化突变；NA 茎部缺失 187~195 位 9 个核苷酸（ACAGAGATA），导致缺失 63~65 位 3 个氨基酸（TEI）；NA 红细胞结合位点产生 K/E/S368N、D369N 突变，与 NA 蛋白活性，耐药性的相关位点 E119、D151、R152、R224、E276、R292、R371 均未发生突变。【结论】 2022 年广东地区分离的 3 株 H9N2 亚型 AIV 已经进化成新的亚群，部分突变可能增强了对哺乳动物的适应性，且其抗原性发生改变，但尚未获得对奥司他韦和扎那米韦等抗流感病毒药物的耐药性。     

禽腺病毒血清 2 型分离鉴定及感染 SPF 鸡发病模型建立

【目的】建立禽腺病毒血清 2 型（FAdV-2）的发病模型，为评价 FAdV-2 的免疫原性和疫苗有效性提供参考。【方法】对疑似禽腺病毒感染的样品进行分离鉴定，对分离株 Fiber 基因和 Hexon 基因序列进行遗传演化分析，使用 DNAStar 和 MEGA7.0 软件对分离株和其他 FAdV 代表株进行核苷酸和氨基酸同源性比较。在确定分离到的病毒为 FAdV-2 后，通过动物实验分析分离株在不同感染途径和不同感染剂量下对 6 周龄 SPF鸡的致病性，筛选出建立 FAdV-2 血清型发病模型的最佳感染方式和最佳感染剂量。【结果】从发病鸡组织样品中成功分离得到 1 株 FAdV-2 血清型毒株，命名为 KM 株。遗传演化分析表明，KM 株和 GX01 株同属于禽腺病毒Ⅰ群 D 种中的 FAdV-2 血清型；同源性分析结果显示，KM 株和 GX01 株的 Fiber 基因和 Hexon 基因核苷酸序列同源性分别为 98.9% 和 99.3%，推导出氨基酸同源性分别为 98.9% 和 98.8%。KM 株静脉注射感染途径的致病性高于肌肉注射，试验鸡出现明显的心包积液 - 肝炎综合征；KM 株发病模型的感染途径为静脉注射，感染剂量为 108.0 TCID50，感染后鸡群死亡率为 50%，剖检病死鸡可见明显的病理变化，鸡群感染后 1 d 泄殖腔排毒阳性。【结论】首次验证了 FAdV-2 能引发心包积液 - 肝炎综合征，建立了 FAdV-2 感染 SPF 鸡的发病模型，可为药物研发和疫苗评价提供一定参考，将有效预防和减少 FAdV-2 传播。     

鸡主要组织相容性复合体分子结构与抗病性关系研究进展

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC)作为鸡免疫系统中的一个重要部分，主要负责将抗原表位递呈到特异性T淋巴细胞中，诱导免疫应答反应。鸡MHC优势表达1个MHCⅠ分子BF2和1个MHCⅡ分子BLB2,其中MHCⅠ分子结合来自细胞质中蛋白多肽，MHCⅡ分子结合来自细胞内囊泡中蛋白多肽和细胞外源性多肽。MHC等位基因多态性对其分子空间结构和结合肽段特性非常重要。不同单倍型MHC由于等位基因的差异其肽结合基序也存在差异，进而影响MHC分子递呈抗原肽数量，影响T细胞免疫应答强度，最终导致不同单倍型鸡对同一病原体表现出抗性或易感性。与人MHC分子相比，紧凑且简单的鸡MHC优势表达单个Ⅰ类分子的特性可以决定鸡是否会对某种病原体存在抗性。为了更好地认识鸡MHC分子在病毒感染过程中的作用及抗病性机制，解析其结构并进行功能研究非常必要。作者主要介绍了鸡MHC的分子结构特征，重点比较了不同单倍型MHC分子结构差异与抗病性的关系，总结了鸡MHC肽结合基序和禽流感病毒抗原肽的鉴定工作，为进一步理解MHC分子递呈肽给T淋巴细胞的机制和开发T细胞表位疫苗奠...