北京地区奶牛流产发生规律的调查研究

本次试验共调查了北京地区的7个奶牛场在1998-2000年中奶牛的流产情况.结果表明,北京地区的奶牛流产率平均为6.5%,最高达12.3%,且与月份、胎次以及妊娠天数等因素有关.     

磺胺对甲氧嘧啶在猫体内的药代动力学研究——第一报:健康猫单剂量快速静脉注的药代动力学研究

给健康猫单剂量快速静注磺胺对甲氧嘧啶100mg/kg,用(重氮化—偶合比色法)测定不同时间的猫体内的药物浓度(血药),其药物—时间数据和药动学参数用微机非线性最小二乘法程序拟合计算。实验用猫10只,药—时曲线均适合无吸收因素二室模型。用BASIC语言计算出单剂量快速静注给药后的药动力学参数,并推算出多剂量给药有关参数。其主要参数分别为:消除相半衰期(t1/2β)为7.60±1.01h,表现分布容积(Vd)为4.81±0.61L/kg,总清除率(ClB)为0.40±0.15L/kg·h,药—时曲线下面积(AUC)为23.00±3.43mg/100ml·h,有效浓度维持时间(Tcp)为15.53±1.94h。多剂量给药(τ=t1/2β=7.60h的主要参数分别为:稳态下最高血药浓度(Css(max)]为5.27±0.64mg/100ml,稳态下最低血药浓度[Css(min)]为2.09±0.25mg/100ml,稳态下平均血药浓度[Css(ave)]为3.04±0.37mg/100ml,负荷剂量(D)为200mg/kg,维持剂量(D)为100mg/kg。     

热应激中蛋鸡血液和肝脏SOD活性的动态变化

人工气候室中 ,32 0日龄海赛褐蛋鸡 14 4只连续 10d热应激 2 7～ 38℃。用NBT光还原法测定持续高温下血液中红细胞SOD活性 ;用亚硝酸盐形成法测定组织SOD活性。结果表明 :高温组与常温组相比 ,血液中红细胞SOD动态活性降低 ,并维持在一个低于常温组的新水平上 ;肝脏SOD动态活性同时降低 ,其最低值低于常温组 ;肝脏和血液SOD活性呈显著正相关 ,相关系数为γ =0 .6 5。     

中草药对奶牛乳房炎6种致病菌的抑菌效果观察

用8味中草药煎剂及一个中草药复方制剂对奶牛乳房炎的6种致病菌进行抑菌实验,并测定了最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果显示:金黄色葡萄球菌对连翘、复方、蒲公英中敏;牛棒状杆菌对连翘中敏,嗜热链球菌对瓜蒌极敏,对连翘、白附子、复方、木鳖子、天花粉中敏;产气荚膜梭菌对金银花、瓜蒌高敏,对复方、白附子、紫花地丁、天花粉中敏;乳房链球菌对瓜蒌、复方、金银花中敏;乳杆菌对所用药都低敏;瓜蒌、金银花、连翘对致病菌的MIC和MBC较低。进一步提取瓜蒌、金银花有效成分并与水煎剂对比,瓜蒌、金银花有效成分对6种致病菌均呈现良好的抑菌效果。     

连翘酯苷-羟丙基-β-环糊精包合物制备及其特性

针对连翘酯苷稳定性较差,限制了药物制剂制备及临床应用的问题,采用环糊精包合技术研制连翘酯苷注射剂,利用研磨法制备连翘酯苷-羟丙基-β-环糊精包合物.表征分析表明包合物光谱和熔点发生变化,对光稳定性和热加速实验稳定性明显增加.高效液相色谱分析鸡静脉注射给药血药浓度,表明连翘酯苷包合物与连翘酯苷药物动力学差异较小,血液中包合态药物能较快发生脱包合作用.     

鸡源沙门氏菌多重耐药和Ⅰ型整合子的流行调查

为了研究沙门氏菌多重耐药性与Ⅰ型整合子的流行情况,本研究从山东省鸡场分离沙门氏菌,根据Kauffmann-White方法测定其血清型,采用微量稀释法测定了沙门氏菌对19种常用抗菌药物的MIC值,并且采用PCR技术测定了Ⅰ型整合子及其携带的耐药基因盒。结果显示：本次分离得到311株沙门氏菌,包括印地安纳沙门氏菌（133株）和肠炎沙门氏菌（178株）2种血清型;药物敏感性试验表明：分离菌株对磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、萘啶酸、氨苄西林、四环素、多西环素和甲氧苄啶普遍耐药,菌株多重耐药率为91.0 %(283/311),99%的分离株对阿米卡星、多黏菌素敏感;PCR测定Ⅰ型整合子结果：Ⅰ型整合子的检出率为65.0%(202/311),其中多重耐药表型菌株Ⅰ型整合子阳性率为92.6%,202株整合子阳性菌株中有6株的携带基因盒dfr17-aadA5。上述结果表明,Ⅰ型整合子普遍存在于沙门氏菌中,并且与沙门氏菌的多重耐药性密切相关。     

Arkadia表达载体转染肾小管上皮细胞条件的优化

本试验旨在优化泛素化酶Arkadia质粒表达载体pGPU6/GFP/Neo转染小鼠肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs)的条件,为研究Arkadia表达载体在小鼠马兜铃酸肾病(aristolochic acid nephrohathy,AAN)中的作用奠定基础。以小鼠RTECs为转染对象、脂质体Lipofectamine^TM 2000为转染介质,采用Real-time PCR和CCK-8法检测不同的质粒与脂质体比例条件下Arkadia mRNA的表达差异及对细胞活性的影响;同时,用Real-time PCR检测不同的转染时间条件下表达载体对Arkadia mRNA沉默效果的差异。结果显示,Arkadia-pGPU6/GFP/Neo载体的转染效率表现出了一定的剂量和时间依赖性。当质粒DNA∶Lipofectamine^TM 2000为0.66 μg∶2 μL、转染时间为24 h时,对Arkadia mRNA表达的抑制最明显并且对细胞的毒性最小。最终确定了Arkadia-pGPU6/GFP/Neo载体转染小鼠RTECs的最佳条件。     

Arkadia和UCH37表达载体的构建及其对TGF-β1/Smads信号通路的影响

【目的】构建泛素启动酶Arkadia和泛素羧基末端水解酶-5（亦称UCH37）的表达载体,并探讨Smad7蛋白的泛素化修饰对马兜铃酸肾病中TGF-β1/Smads信号通路的影响。【方法】通过观察绿色荧光的表达量及real-time PCR反应优化转染条件,转染Arkadia和UCH37 siRNA,real-time PCR检测mRNA表达抑制率。分别构建Arkadia和UCH37的表达载体pGPU6/GFP/Neo,经鉴定后转染细胞,real-time PCR和Western blotting检测Arkadia、UCH37和Smad7的表达变化。【结果】①30 pmol siRNA和1.5 μL LipofectamineTM 2000为最佳转染条件;②Arkadia-1490和UCH37-721的干扰效果最明显;③载体的插入序列完全正确,且pGPU6/GFP/Neo-Arkadia能上调马兜铃酸肾病模型中Smad7的表达,而pGPU6/GFP/Neo-UCH37使Smad7表达下降。【结论】成功构建了表达载体pGPU6/GFP/Neo-Arkadia和pGPU6/GFP/Neo-UCH37,且Arkadia和UCH37可分别放大、抑制TGF-β1/Smads信号通路。     

鸡传染性支气管炎病毒M41型的扩繁及在鸡胚肾细胞上的适应性研究

探明鸡传染性支气管炎病毒（Avian Infectious Bronchitis Virus,IBV）感染鸡胚肾细胞（Chicken Embry-o Kidney Cells,CEK cell）,并且实现其增殖为目的。将IBV稀释液注射到SPF鸡胚尿囊腔内,培养鸡胚扩繁,观察记录结果;并培养CEK细胞,采用100倍半数组织培养感染量的IBV进行染毒实验;应用Reed-Muench法计算半数鸡胚感染量为10-6.68/0.1 mL;用Real time PCR检测IBV在感染细胞中的含量,以确定IBV在CEKcells中已经感染且增殖成功。结果表明,接种10日龄的SPF鸡胚可以收集更多的、约8 mL的尿囊液毒;反复盲传至7代的IBV可使CEK cells产生明显的细胞病变效应;通过实时荧光定量PCR和RT-PCR检测,最终确定IBV-M41型扩繁成功并且能够在CEK细胞上繁殖,为下一步实验提供了参考。     

Dab2在马兜铃酸肾病小鼠肾脏中的表达变化

本试验旨在研究Dab2蛋白在马兜铃酸肾病（aristolochic acid nephropathy,AAN）小鼠模型中的表达变化。在AAN小鼠模型的基础上,利用免疫组化、荧光定量PCR和Western blotting技术对肾脏中Dab2基因转录水平和蛋白表达水平进行检测。结果显示,随着用药时间的延长,肾脏组织损伤程度加重;Dab2蛋白表达量在第6天先降低（P＞0.05）,在第12天突然升高随后又极显著降低（P＜0.01）,Dab2蛋白表达总体呈上升趋势,Dab2基因转录水平变化趋势与此一致;同时Dab2蛋白的定位也发生了变化,完成了从刷状缘到细胞质,再到细胞核的转移。结果表明Dab2蛋白参与AAN小鼠的发病过程,为进一步研究Dab2蛋白在AAN中的作用奠定理论基础。