子宫内膜基质金属蛋白酶-2、-9 mRNA表达与奶牛子宫内膜炎关系的研究

为探讨基质金属蛋白酶(MMPs)-2、MMP-9在奶牛子宫内膜炎中的作用机制,选用产后6～10d健康及患急性化脓性子宫内膜炎的中国荷斯坦奶牛各10头,分别为对照组和试验组,通过ELISA检测PGF2a、孕酮浓度;免疫组化检测子宫内膜Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原的表达;SYBR Green I荧光定量PCR检测子宫内膜MMP-2和MMP-9mRNA表达。结果表明:试验组PGF2a浓度极显著低于对照组(P<0.01),孕酮含量显著高于对照组(P<0.05),PGF2a与孕酮浓度呈显著负相关(r=0.893);试验组子宫内膜中Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原的表达量均高于对照组,差异极显著(P<0.01);MMP-2和MMP-9mRNA水平则显著低于对照组(P<0.01)。结果提示:产后子宫内膜炎病牛子宫内膜MMP-2、MMP-9低表达,导致Ⅰ型和Ⅳ型胶原降解受阻,使细胞外基质为子宫内膜细胞提供的刺激信号不足,子宫分泌PGF2a量少,黄体消退障碍,血清孕酮含量高;说明子宫内膜MMP-2、MMP-9mRNA表达对产后子宫内膜炎的发生和发展起促进作用。     

磺胺类药物对猪肾脏损害的病理学观察

对14例含有磺胺结晶的猪肾脏用10%中性福尔马林固定,常规石蜡切片技术切片染色,对肾脏进行组织病理学观察。结果显示,皮质区肾小管上皮细胞肿胀变性、髄质区肾小管破坏较为严重,大部分肾小管、集合管上皮细胞脱落、变性坏死,并引起梗阻性肾病,同时,肾小球囊腔扩张、血管球萎缩。结果证实,超剂量或长期使用磺胺类药物会严重损害肾实质,导致肾功能下降甚至肾衰竭。     

p38介导β-羟丁酸对原代培养犊牛肝细胞凋亡的影响

本试验旨在探讨β-羟丁酸（BHBA）对体外原代培养犊牛肝细胞凋亡的影响以及p38MAPK在其中的调控作用。选择培养72h的肝细胞,添加不同浓度的BHBA（0、0．6、1．2、2．4mmol／L）,培养9h,每个浓度3个重复。另外选取细胞,p38MAPK抑制剂SB203580（10pmol／L）预处理1h后,添加BHBA,使其终浓度为2．4retool／L;PI／An—nexinV—FITC双染,运用荧光显微镜观察肝细胞凋亡情况;ELISA法检测p38的活性;实时荧光定量PCR方法检测p38、Caspase-3、Caspase9、bcl2基因的mRNA表达水平。结果表明,与对照组相比,1．2和2．4mmol／I—BHBA组的肝细胞凋亡明显增加;p38酶活性明显升高;p38、caspase-3和caspase-9基因mRNA表达水平均显著增加（P〈0．01）。bcl2基因mRNA表达水平显著降低（P〈0．05）;添加p38抑制剂后,caspase-3和caspase-9基因mRNA表达水平显著降低（P〈0．01）,bcl-2基因mRNA表达水平显著增加（P〈O．05）。高浓度的BHBA可以诱导体外原代培养犊牛肝细胞凋亡,p38在BHBA诱导的细胞凋亡中发挥重要作用。     

大学英语教学中的文学教学

长期以来，在外语教学中占主导地位的是以语言形式为主的教学，过于强调语音、词汇和语法规则的作用，忽视或不重视在课堂内传授语言知识的同时培养学生的文化内涵；教学内容枯燥乏味，必要的文化背景知识没有得到应有的重视。文学教学更是如此。大学英语课程作为大学生的一门必修的基础课程，是一门综合基础课程。调查、教学实践以及大学英语教学的最终动机证明，大学英语教学离不开文学教学。文章肯定了大学英语教学中的文学教学在提高学生英语学习的兴趣和培养其综合素养，尤其是人文素养方面起着重要的作用，不能被忽视，还就当前现状进行了分析并提出了一些建议。     

兔肺炎双球菌病的病原分离鉴定及治疗

2013年山东滨州市某兔场发生仔兔高病死率、母兔流产的疾病。为了诊断治疗该病,本试验采集病死兔肺脏进行病原的分离,通过病原分离、形态学观察、生理生化试验、溶血试验、药敏试验等试验,证实分离菌为肺炎双球菌。该菌具有α-溶血性,对青霉素、头孢吡肟、阿米卡星等药物敏感;动物回归试验成功复制出兔肺炎双球菌病,症状典型,病理剖检变化明显。根据临床症状和药敏试验结果,用青霉素等药物进行治疗,病情得到有效控制。     

Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立

根据获得的Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒（DHVⅠ）RNA聚合酶基因序列，应用Primer Premier5．0软件设计了1对引物，建立了检测DHVⅠ的RT-PCR方法。该法能从DHVⅠ中扩增到440bp的条带，而对正常鸭胚尿囊液、健康鸭肝、鸭瘟病毒、番鸭细小病毒、鹅细小病毒、雏鹅新型病毒性肠炎病毒、禽流感病毒（H5N2亚型）、鸭病毒性肿头出血症病毒、鸭源多杀性巴氏杆菌（5：A）的扩增结果均为阴性。该法最低可以检测到30pg的DHV工核酸模板。RT-PCR对DHVⅠ强毒CHv-1株人工感染发病死亡鸭肝的检测结果与病毒分离和Dot—ELISA检测结果的阳性检出率均为100％，对脾、肺、脑病料的检出率显著（P≤0．01）高于病毒分离和Dot-ELISA。RT-PCR、病毒分离和Dot—ELSA对1987～2005年采集且保存于-20℃的经病毒分离已确诊为鸭肝炎的临床送检肝病料的检出率分别为100％（19／19）、36．84％（7／19）和57．98％（11／19），对2000-2005年采集且于-20℃保存的来源于中国18个省份发病鸭群的48份肝病料的检出率分别为100％（48／48）、56．25％（27／48）和75．00％（36／48）。结果表明，建立的RT—PCR方法具有良好的特异性和敏感性，可用于DHVⅠ的分离鉴定、临床病料的检测和分子流行病学调查。     

H3亚型猪流感病毒荧光定量PCR检测方法的建立

通过RT-PCR方法克隆了H3亚型猪流感病毒HA基因一段靶序列,构建重组质粒作为标准阳性模板.根据GenBank中的H3亚型猪流感病毒HA基因保守序列设计了用于FQ-PCR的1对引物和1条TaqMan探针.通过条件优化,以10倍系列稀释的质粒为标准品进行荧光定量PCR扩增,并制作标准曲线,建立了检测H3亚型猪流感的荧光定量PCR方法.结果表明,该方法检测灵敏度可达1.0×100拷贝/μL,线性范围为109～100,达10个数量级;对起始浓度为1.0×109、1.0×108、1.0×107拷贝/μL的标准品的最终实际测得值(Ct)分别为13.68,18.21和20.57;变异系数分别为0.31%、0.17%和0.12%,均小于5%,说明此方法具有良好的准确性和重现性.对阳性组织病料的检测表明,该方法的检测灵敏度高出常规PCR,与套式PCR具有相近的灵敏度.     

猪萎缩性鼻炎凝集反应抗原的制备及应用

为快速地诊断猪萎缩性鼻炎及监测其免疫状况,本试验在对支气管败血波氏杆菌保存菌种进行复苏和全面鉴定的基础上,制备了猪萎缩性鼻炎凝集反应抗原,经凝集反应试验表明,该抗原在PBS中不发生自凝,与猪传染性胸膜肺炎、猪喘气病和猪瘟的阳性血清均无凝集反应,而对猪萎缩性鼻炎标准阳性血清的凝集效价高达1∶10 240以上,具有较高的特异性和敏感性;对20份免疫母猪所产仔猪血清样本进行检测,检出率为95%.     

奶牛粪样中致病性大肠埃希菌的分离与鉴定

大肠埃希菌血清型众多,一些具有特殊血清型的大肠埃希菌对人和动物有致病性。本试验从包头市侯家营奶牛场77头外表健康成年泌乳荷斯坦奶牛采集新鲜粪样,进行细菌分离培养,共分离到疑似大肠埃希菌69株,经过形态观察、生化鉴定、动物致病性试验和血清型鉴定,其中12株为致病性大肠埃希菌,均为强毒株,占分离菌数的17.4%,另57株为非致病性大肠埃希菌,占分离菌数的82.6%。同时对12株致病性大肠埃希菌进行了"O"血清型鉴定,分属7种血清型O78、O6、O9、O98、O1、O8、O149,分别占定型菌株的25.0%(3/12)、8.3%(1/12)、16.7%(2/12)、8.3%(1/12)、8.3%(1/12)、8.3%(1/12)、25.0%(3/12)。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp4的表达及其抗血清的制备

根据GenBank中已发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV）HuN4株全基因组序列,设计合成一对引物,对PRRSV HuN4株非结构蛋白Nsp4（Nonstructural protein 4基因进行RT-PCR扩增,克隆到原核表达载体pET30a（＋）中,构建重组表达载体pET30a-Nsp4,经酶切测序鉴定。将pET30a-Nsp4转化表达菌株BL21（DE3）,诱导可表达分子量约为27kDa重组蛋白。Westernblot显示其具有较好的反应原性,经镍离子亲和层析（Ni-NTA）纯化获得了高纯度的可溶性重组蛋白。将纯化的Nsp4蛋白免疫BALB／c小鼠,抗血清ELISA效价达1：16000,Western blot和IFA表明,所制备的抗血清能够特异性识别PRRSV自身表达的Nsp4蛋白。本研究获得了可溶性的PRRSV Nsp4蛋白,制备了Nsp4特异性多抗血清,为进一步研究Nsp4蛋白的亚细胞定位及功能奠定了基础。